一、葡萄嫩梢采集與消毒
將大樹或扡插苗長出5―7片葉的嫩梢,取5―10厘米長,去掉幼葉。用自來水衝洗3―5分鍾,在70%酒精中浸泡30―40秒鍾,用蒸餾水衝洗2―3次,再放入0.5%氯化汞溶液中消毒7一10分鍾,最後用無菌水衝洗5―6次後備用。
二、培養基製作與篩選
(一)莖尖培養 方1 1/2ms培養基+6―苄基嘌呤(6―ba)0.5一lppm個荼乙酸(naa)0.01ppm+水解乳蛋白(lh)100ppm+蔗糖2%+瓊脂0.6%配製,氫離子濃度調到1585納摩/升[ph5.8)。在98.06千帕的壓力下,高壓滅菌20分鍾,冷涼待用。山東釀酒葡萄研究所用此方對白羽、紅香蕉、白友誼、雷司令等品種莖尖培養成活率達83.5%以上。
方2 1/2ms培養基+赤黴素(ga)0.1ppm+吲哚乙酸(1ba)0.59pm+6-節基嘻吟lppm+激動素(kt)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(ade)4ppm+瓊脂0.6%+蔗糖0.2%的培養基,對康拜爾芽變(康太)成活較好(遼寧省農科院植保所)。
(二)莖葉分化培養 方1 1/2ms培養基+赤黴素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-節基膘吟1ppm+蔗糖2%+瓊脂0.6%,氫離子濃度調到1000納摩/升(ph6.0)。在98.06千帕高壓下滅菌20分鍾後備用。遼寧省農業科學院植保所對貝達、紅富土、黑奧林、巨峰品種族種成活率達90%以上。
方2 用b5大量元素培養基+ms培養基其他元素+吲哚乙酸(1aa)0.01―0.1ppm+6-苄基嘌呤0.02―0.59pm+腺嘌呤(a)2;ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2%―3%+瓊脂0.7%,氫離子濃度630.9―1585納摩/升(ph5.8―6.2),配好後裝入三角瓶中,用兩層硫酸紙封口,在98.06―117.67千帕的高壓鍋中滅菌20分鍾,冷涼待用。河南省園藝所用此配方對京早晶品種接種成活效果較好。
(三)幼根分化培養 方1 用bs大量元素培養基+蔗糖4%+吲哚乙酸1ppm+6-苄基嘌呤0.08ppm+瓊脂7%,氫離子濃度1000納摩/升(ph6),經高壓滅菌20分鍾,冷涼備用。遼寧省農業科學院植保所用此配方對紅富士、黑奧林、巨峰等品種莖尖培養的單芽段,插入滅菌後的三角瓶培養基中,芽痕高於培養基麵3.5毫米,每瓶插入1―3個莖段,插後在黑暗中培養48小時;再轉入間歇光照(兩支40瓦日光燈下,每天光照10小時)培養,溫度保持在23―28℃,20天後幼根平均長分別為99.0,86.3,78.0毫米。
方2 用1/2ms培養基+蔗糖4%+吲哚乙酸0.4ppm+6-苄基嘌呤0.06ppm+瓊脂7%,氫離子濃度1000納摩/升(ph6),經過高壓滅菌後接種貝達、紅宮土、黑奧林、臣蜂,20天後幼根平均長分別為94.0,36.5,16.8,50.8毫米。此培養基對貝達繁殖有較好效果(遼寧省農科院植保所)。
三、接種(莖段試管培養) 在超淨工作台上,將徹底消毒過的備用嫩枝剪截2厘米核的單芽莖段,將其下部插入滅菌後的試管培養基中,芽痕高於培養基麵3―5毫米,每管插1―3個莖段,在黑暗處培養48小時,再轉入間歇光照(兩支40瓦日光燈下,每天照10個小時)培養,溫度保持在25―28℃,以後光照時間每天可延長12―14小時,光照強度為2000―2500勒。
四、繼代培養 將試管苗剪成帶葉單芽段,不必消毒,插人培養基中,一般10一15天開始生根,30―35天可長成5.6片葉的小苗,在適宜條件下,1年可繁殖數萬株試管苗。
五、煉苗移栽 試管苗長成後移到溫室或塑料大繃裏,在自然光照下煉苗。要求溫度在20―25℃,經兩周後將試管塞揭開,使之接受自然光照、溫度、濕度鍛煉4―5天(tian)。用(yong)鑷(nie)子(zi)夾(jia)葉(ye)柄(bing)將(jiang)小(xiao)苗(miao)從(cong)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)取(qu)出(chu),洗(xi)去(qu)培(pei)養(yang)基(ji)殘(can)留(liu)物(wu),直(zhi)接(jie)栽(zai)入(ru)溫(wen)室(shi)或(huo)大(da)棚(peng)中(zhong)的(de)小(xiao)拱(gong)棚(peng)裏(li)的(de)砂(sha)壤(rang)土(tu)或(huo)粗(cu)砂(sha)裏(li),澆(jiao)透(tou)底(di)水(shui)。棚(peng)內(nei)濕(shi)度(du)保(bao)持(chi)在(zai)90%左右。10厘米下的地溫應穩定在15℃左右,光照為4000―5000勒。15―20天後見幼葉變綠時,即可移植到大田,成活率達80%以上。如棚內溫度過高,要通風和蓋葦簾遮蔭降溫,噴灑涼水,提高棚內空氣濕度和土壤濕度,以保持煉壯苗的適宜條件。
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