一、實驗目的
1．了解高效液相色譜儀的基本結構和工作原理
2．學習高效液相色譜儀的使用
3．學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法
二

、基本原理
    高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu法fa是shi以yi液ye體ti作zuo為wei流liu動dong相xiang的de一yi種zhong色se譜pu分fen析xi法fa，它ta亦yi是shi根gen據ju不bu同tong組zu分fen在zai流liu動dong相xiang和he固gu定ding相xiang之zhi間jian的de分fen配pei係xi數shu的de差cha異yi來lai對dui混hun合he物wu進jin行xing分fen離li的de。氣qi相xiang色se譜pu中zhong評ping價jia色se譜pu柱zhu柱zhu效xiao的de方fang法fa及ji計ji算suan理li論lun塔ta板ban數shu的de公gong式shi同tong樣yang適shi合he於yu高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu
，即ji：
式中：tR為組分的保留時間
Y1/2為色譜峰的半峰寬度
Y為色譜峰的峰底寬度
三、儀器和試劑
1．KLC321型高效液相色譜儀（紫外檢測器）
2．FJ-2000色譜工作站
3．25μl微量進樣器
4．超聲波清洗器
5．試劑：苯
、萘、聯苯、甲醇均為分析純；純水為重蒸的去離子水。
    配製成含苯、萘、聯苯各10μl/ml 的甲醇溶液。
四
、實驗條件
1．色譜柱  長15cm

，內徑 3mm，裝填10mm的C-18烷基鍵合固定相
2．流動相  甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min
3．紫外光度檢測器  波長254nm，靈敏度0.08
4．進樣量  5μl
五
、實驗步驟
1．將配製好的流動相置於超聲波清洗器上脫氣約30min。
    2．根據實驗條件，按儀器操作步驟將儀器調節至進樣狀態，待儀器流路及電路係統達到平衡

，色譜工作站之“采樣係統”基線平直時，即可進樣。
    3．吸取5μl苯
、萘、聯苯的甲醇溶液進樣
，並用色譜工作站記錄色譜數據，同時記錄色譜數據文件名。
    4．用色譜工作站之“數據處理”係統處理數據文件。
六、數據記錄及處理
1．記錄實驗條件。
（1）色譜柱與固定相
（2）流動相及其流量、柱前壓
（3）檢測器及其靈敏度
（4）進樣量
2．記錄色譜峰的保留時間tR和相應色譜峰的半峰寬Y1/2。
3．分別計算苯、萘、聯苯在該色譜柱上的理論塔板數n。
七、思考題
1．由本實驗計算出的各組分理論塔板數說明什麼問題

？
2．紫外光度檢測器是否適用於檢測所有有機化合物
，為什麼？