之前
，我們先了解一下液相色譜柱的基本結構
，色譜柱由接頭、螺帽
、柱管、填料


、墊圈及過濾片等組成。

01色譜柱安裝、啟用和維護

01柱頭類型和不鏽鋼毛細管接頭的匹配

色se譜pu柱zhu是shi消xiao耗hao品pin，不bu是shi儀yi器qi原yuan配pei的de情qing況kuang很hen多duo。如ru果guo接jie頭tou和he柱zhu頭tou深shen度du不bu匹pi配pei將jiang會hui產chan生sheng漏lou液ye或huo者zhe死si體ti積ji過guo大da的de現xian象xiang。接jie頭tou比bi柱zhu頭tou深shen度du長chang

，不bu易yi擰ning緊jin而er漏lou液ye；接頭比柱頭深度短，柱頭內留有空隙而產生死體積，使譜帶展寬和峰拖尾。

02溶劑的匹配轉換

色(se)譜(pu)柱(zhu)內(nei)保(bao)存(cun)溶(rong)劑(ji)和(he)儀(yi)器(qi)係(xi)統(tong)內(nei)存(cun)留(liu)溶(rong)劑(ji)
，如(ru)果(guo)和(he)流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)匹(pi)配(pei)，使(shi)用(yong)前(qian)需(xu)進(jin)行(xing)轉(zhuan)換(huan)。特(te)別(bie)是(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)含(han)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)時(shi)
，如(ru)保(bao)存(cun)溶(rong)劑(ji)是(shi)純(chun)有(you)機(ji)相(xiang)或(huo)有(you)機(ji)相(xiang)比(bi)例(li)高(gao)，直(zhi)接(jie)將(jiang)新(xin)柱(zhu)接(jie)入(ru)使(shi)用(yong)，會(hui)導(dao)致(zhi)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)在(zai)柱(zhu)內(nei)結(jie)晶(jing)析(xi)出(chu)
，最(zui)嚴(yan)重(zhong)會(hui)將(jiang)新(xin)柱(zhu)永(yong)久(jiu)不(bu)可(ke)逆(ni)地(di)損(sun)壞(huai)。正(zheng)相(xiang)柱(zhu)保(bao)存(cun)溶(rong)劑(ji)一(yi)般(ban)為(wei)正(zheng)己(ji)烷(wan)
，如(ru)果(guo)要(yao)轉(zhuan)換(huan)成(cheng)HILIC柱模式使用

，由於正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，轉換中間需用二氯甲烷或乙酸乙酯過渡。

03正確使用緩衝鹽

緩(huan)衝(chong)鹽(yan)通(tong)常(chang)易(yi)溶(rong)於(yu)水(shui)，難(nan)溶(rong)於(yu)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)，因(yin)此(ci)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)使(shi)用(yong)不(bu)當(dang)會(hui)使(shi)其(qi)析(xi)出(chu)
，堵(du)塞(sai)填(tian)料(liao)基(ji)質(zhi)上(shang)的(de)微(wei)孔(kong)和(he)顆(ke)粒(li)間(jian)的(de)空(kong)隙(xi)，使(shi)填(tian)料(liao)板(ban)結(jie)
，柱(zhu)壓(ya)上(shang)升(sheng)；tongshizuailejizhishangjianhedetanlianziyoushuzhan，shisepuzhudebaoliunenglixiajiang
，zhuxiaojiangdi。huanchongyanxichuhou
，quchufeichangkunnan
，yinci
，zhengquedeshiyonghuanchongyanduiyanchangsepuzhushiyongshoumingfeichangzhongyao。

正確使用緩衝鹽的目的是防止緩衝鹽析出，因此正確使用緩衝鹽的方法可歸結為一句話：使用前要過濾，使用後要衝洗。

具體方法如下：

1
、等度條件：使用緩衝鹽前和使用後需用過渡流動相以1.0mL/min流速衝洗10個柱體積；使用後去除緩衝鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2mL/min流速衝洗色譜柱過夜。

2、梯度條件：用含有緩衝鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0mL/min流速衝洗10個柱體積。含緩衝鹽流動相的梯度設定應盡量平緩，以避免梯度過程中緩衝鹽析出。注意：過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，區別隻是過渡流動相不含緩衝鹽。

3、緩衝鹽析出的補救方法：

1）方案1：用甲醇/水=20/80以1.0mL/min流速35攝氏度條件下反向衝洗色譜柱120min；

2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2mL/min流速反向衝洗色譜柱過夜。

04新柱使用前的平衡和老化

廠chang家jia出chu廠chang檢jian驗yan時shi一yi般ban都dou已yi進jin行xing過guo平ping衡heng
，但dan色se譜pu柱zhu到dao最zui終zhong用yong戶hu時shi間jian不bu一yi，用yong戶hu正zheng式shi測ce定ding前qian最zui好hao對dui色se譜pu柱zhu再zai次ci平ping衡heng。最zui好hao的de平ping衡heng兼jian老lao化hua一yi起qi進jin行xing的de方fang法fa是shi運yun行xing幾ji次ci完wan整zheng的de分fen析xi程cheng序xu（包括進樣），直到觀察到峰形
、保留時間和峰麵積穩定為止。所謂“老化”是借用了氣相的術語，目的是達到分析物在色譜柱以及整個液相係統流路中的吸附飽和。對某些特定的待測物，如分子量大於1000的
，因擴散速度慢，老化時間相應要長，可采取大濃度進樣或在同一個洗脫周期內連續進樣多針的方式加快老化。

05pH使用範圍

一般認為矽膠基質柱子的pH使用範圍是2-8，這是很粗略的。矽膠類型、使用溫度、矽膠表麵所鍵合的固定相類型以及緩衝鹽的不同
，對此均有影響。矽膠比孔容小

、鍵合密度大的填料pH耐受範圍要大一些

，有些選用高品質矽膠
，加上高密度鍵合和雙封尾，或特殊工藝使pH耐受範圍最大提高到10。磷酸鹽緩衝鹽滲透力強，有加快矽膠溶解的副作用，它的存在會降低pH使用範圍。有機雜化矽膠以及矽膠表麵塗覆雜化層的矽膠填料

，有機質的存在使pH使用範圍能到12以上。拿到柱子第一時間閱讀說明書
，確認色譜柱內的封存液
，有條件可以依照COA報告做柱效測試。

06色譜柱保存

短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相（不含緩衝鹽）保bao存cun為wei佳jia，以yi盡jin量liang減jian少shao下xia次ci使shi用yong的de平ping衡heng時shi間jian。一yi般ban隻zhi建jian議yi在zai長chang期qi保bao存cun反fan相xiang柱zhu的de時shi候hou用yong純chun甲jia醇chun或huo乙yi腈jing
，一yi方fang麵mian純chun有you機ji相xiang保bao存cun有you最zui大da限xian度du減jian少shao鍵jian合he相xiang水shui解jie的de作zuo用yong，但dan純chun甲jia醇chun（乙腈）又you會hui將jiang已yi水shui解jie而er暫zan時shi吸xi附fu在zai柱zhu內nei的de鍵jian合he相xiang洗xi脫tuo出chu去qu，使shi固gu定ding相xiang流liu失shi進jin程cheng加jia快kuai，壽shou命ming縮suo短duan。純chun有you機ji相xiang保bao存cun還hai有you易yi揮hui發fa使shi柱zhu床chuang變bian幹gan的de缺que點dian
，使shi用yong80%左右有機相保存也屬好的選擇
，且足以避免長菌。強烈建議在柱身上貼標簽標明保存溶劑。

離子交換柱和水性SEC柱等適合保存在水溶液中的色譜柱
，可加0.05%疊氮化鈉溶液防止長菌。

正相柱，無論是短期還是長期
，都推薦保存在所用流動相中。