一
、 流動相的要求
 

  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下特點：

1 純度 流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。溶劑所含雜質在柱上積累
，會影響色譜柱的使用壽命。

2 溶解度 樣品的溶解度要適宜如果溶解度，如果溶解度欠佳樣品會在柱頭沉澱，不但影響純化分離，還會縮短柱子的使用壽命。

3 粘度要低(應<2cp) 高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長。最好選擇沸點在100℃以下的流動相。

4 樣品易於回收。應選用揮發性溶劑。

5 流動相  PH 采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時，通過調節流動相的pH值，以抑製樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，並改善峰形的技術稱為反相離子抑製技術。對於弱酸，流動相的pH值越小
，組分的k值越大
，當pH值遠遠小於弱酸的pKa值時

，弱酸主要以分子形式存在;對弱堿，情況相反。分析弱酸樣品時

，通常在流動相中加入少量弱酸
，常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿
，常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和30mmol/L三乙胺溶液。
 

二、色譜泵的使用與維護
 

  液相色譜泵的使用和維護注意事項  為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩定性，必須按照下列注意事項進行操作：  

1 防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過
，可采用Millipore濾膜(0.2µm或0.45µm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。   

2 泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。    

3 輸液泵的工作壓力決不要超過規定的最高壓力
，否則會使高壓密封環變形
，產生漏液。
 

三、色譜柱的使用與維護
 

  在zai日ri常chang分fen離li分fen析xi工gong作zuo中zhong，色se譜pu柱zhu的de正zheng確que使shi用yong和he維wei護hu十shi分fen重zhong要yao
，色se譜pu柱zhu使shi用yong是shi否fou得de當dang，直zhi接jie影ying響xiang色se譜pu柱zhu的de壽shou命ming，在zai色se譜pu操cao作zuo過guo程cheng中zhong，需xu要yao注zhu意yi下xia列lie問wen題ti，以yi維wei護hu色se譜pu柱zhu。 

1 柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產生空隙。

2 如果儀器用來做常規分析，樣品種類有限，但分析次數多，則不妨為每一類常規分析配置一根專用柱
，這樣有助於延長柱子的壽命。 

3 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。 

4 應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。 

5 如使用柱溫控製裝置時，應注意在通人流動相後才能升溫。

6 一般說來色譜柱不能反衝

，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。 

7 xuanzeshiyongshiyideliudongxiang，yibimiangudingxiangbeipohuai。youshikeyizaijinyangqiqianmianlianjieyigeyuzhu，fenxizhushijianheguijiaoshi，yuzhuweiguijiao，keshiliudongxiangzaijinrufenxizhuzhiqianyuxianbeiguijiao“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。 

8 避(bi)免(mian)將(jiang)基(ji)質(zhi)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)尤(you)其(qi)是(shi)生(sheng)物(wu)樣(yang)品(pin)直(zhi)接(jie)注(zhu)人(ren)柱(zhu)內(nei)，需(xu)要(yao)對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)預(yu)處(chu)理(li)或(huo)者(zhe)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)之(zhi)間(jian)連(lian)接(jie)一(yi)個(ge)保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)一(yi)般(ban)是(shi)填(tian)有(you)相(xiang)似(si)固(gu)定(ding)相(xiang)的(de)短(duan)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可(ke)以(yi)而(er)且(qie)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)更(geng)換(huan)。 

9 經(jing)常(chang)用(yong)強(qiang)溶(rong)劑(ji)衝(chong)洗(xi)色(se)譜(pu)柱(zhu)，清(qing)除(chu)保(bao)留(liu)在(zai)柱(zhu)內(nei)的(de)雜(za)質(zhi)。在(zai)進(jin)行(xing)清(qing)洗(xi)時(shi)，對(dui)流(liu)路(lu)係(xi)統(tong)中(zhong)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)置(zhi)換(huan)應(ying)以(yi)相(xiang)混(hun)溶(rong)的(de)溶(rong)劑(ji)逐(zhu)漸(jian)過(guo)渡(du)，每(mei)種(zhong)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)體(ti)積(ji)應(ying)是(shi)柱(zhu)體(ti)積(ji)的(de)20倍左右，即常規分析需要50-75mL。 

10 保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發幹燥。絕對禁止將緩衝溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。 

11 色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進人柱內，使柱頭被汙染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。  
12 在完成分離分析工作之後
，不應立即停機，需及時對色譜分析係統進行衝洗

，一般0.5h以上
，以除去色譜柱內的雜質。