因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過
，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。

使用後沒有及時清洗泵

流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)應(ying)含(han)有(you)任(ren)何(he)腐(fu)蝕(shi)性(xing)物(wu)質(zhi)，含(han)有(you)緩(huan)衝(chong)液(ye)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)應(ying)保(bao)留(liu)在(zai)泵(beng)內(nei)，尤(you)其(qi)是(shi)在(zai)停(ting)泵(beng)過(guo)夜(ye)或(huo)更(geng)長(chang)時(shi)間(jian)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)。如(ru)果(guo)將(jiang)含(han)緩(huan)衝(chong)液(ye)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)留(liu)在(zai)泵(beng)內(nei)，由(you)於(yu)蒸(zheng)發(fa)或(huo)泄(xie)漏(lou)，甚(shen)至(zhi)隻(zhi)是(shi)由(you)於(yu)溶(rong)液(ye)的(de)靜(jing)置(zhi)
，就(jiu)可(ke)能(neng)析(xi)出(chu)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)體(ti)

，這(zhe)些(xie)晶(jing)體(ti)將(jiang)和(he)上(shang)述(shu)固(gu)體(ti)微(wei)粒(li)一(yi)樣(yang)損(sun)壞(huai)密(mi)封(feng)環(huan)和(he)柱(zhu)塞(sai)等(deng)。因(yin)此(ci)，必(bi)須(xu)泵(beng)入(ru)純(chun)水(shui)將(jiang)泵(beng)充(chong)分(fen)清(qing)洗(xi)後(hou)
，再(zai)換(huan)成(cheng)適(shi)合(he)於(yu)色(se)譜(pu)柱(zhu)保(bao)存(cun)和(he)有(you)利(li)於(yu)泵(beng)維(wei)護(hu)的(de)溶(rong)劑(ji)（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

流動相走空

泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完
，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環

，最終產生漏液。

沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦
？

可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉
，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。

壓力和流量不穩了？

原因可能是氣泡，需要排除；或(huo)者(zhe)是(shi)單(dan)向(xiang)閥(fa)內(nei)有(you)異(yi)物(wu)，可(ke)卸(xie)下(xia)單(dan)向(xiang)閥(fa)，浸(jin)入(ru)丙(bing)酮(tong)內(nei)超(chao)聲(sheng)清(qing)洗(xi)。有(you)時(shi)可(ke)能(neng)是(shi)砂(sha)濾(lv)棒(bang)內(nei)有(you)氣(qi)泡(pao)
，或(huo)被(bei)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)粒(li)或(huo)滋(zi)生(sheng)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)部(bu)分(fen)堵(du)塞(sai)，這(zhe)時(shi)，可(ke)卸(xie)下(xia)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)流(liu)動(dong)相(xiang)內(nei)超(chao)聲(sheng)除(chu)氣(qi)泡(pao)
，或(huo)將(jiang)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)稀(xi)酸(suan)（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。

壓力為啥過高或過低？

可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。

在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化
，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

PS：（在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)對(dui)組(zu)分(fen)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)方(fang)法(fa)。在(zai)同(tong)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)
，按(an)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)不(bu)斷(duan)改(gai)變(bian)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)比(bi)，稱(cheng)為(wei)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)。從(cong)而(er)可(ke)以(yi)使(shi)一(yi)個(ge)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)性(xing)質(zhi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)組(zu)分(fen)能(neng)按(an)各(ge)自(zi)適(shi)宜(yi)的(de)容(rong)量(liang)因(yin)子(zi)k達到良好的分離目的。

梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）

梯度洗脫的流動相選擇不當

要yao注zhu意yi溶rong劑ji的de互hu溶rong性xing，不bu相xiang混hun溶rong的de溶rong劑ji不bu能neng用yong作zuo梯ti度du洗xi脫tuo的de流liu動dong相xiang。有you些xie溶rong劑ji在zai一yi定ding比bi例li內nei混hun溶rong，超chao出chu範fan圍wei後hou就jiu不bu互hu溶rong，使shi用yong時shi更geng要yao引yin起qi注zhu意yi。當dang有you機ji溶rong劑ji和he緩huan衝chong液ye混hun合he時shi，還hai可ke能neng析xi出chu鹽yan的de晶jing體ti，尤you其qi使shi用yong磷lin酸suan鹽yan時shi需xu特te別bie小xiao心xin。

忽略的空白梯度洗脫

梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)所(suo)用(yong)的(de)溶(rong)劑(ji)純(chun)度(du)要(yao)求(qiu)更(geng)高(gao)
，以(yi)保(bao)證(zheng)良(liang)好(hao)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)。進(jin)行(xing)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)前(qian)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)空(kong)白(bai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)，以(yi)辨(bian)認(ren)溶(rong)劑(ji)雜(za)質(zhi)峰(feng)
，因(yin)為(wei)弱(ruo)溶(rong)劑(ji)中(zhong)的(de)雜(za)質(zhi)富(fu)集(ji)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)頭(tou)後(hou)會(hui)被(bei)強(qiang)溶(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)下(xia)來(lai)。用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)溶(rong)劑(ji)需(xu)徹(che)底(di)脫(tuo)氣(qi)，以(yi)防(fang)止(zhi)混(hun)合(he)時(shi)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。

忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)的(de)粘(zhan)度(du)常(chang)隨(sui)組(zu)成(cheng)而(er)變(bian)化(hua)，因(yin)而(er)在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)常(chang)出(chu)現(xian)壓(ya)力(li)的(de)變(bian)化(hua)。例(li)如(ru)甲(jia)醇(chun)和(he)水(shui)粘(zhan)度(du)都(dou)較(jiao)小(xiao)
，當(dang)二(er)者(zhe)以(yi)相(xiang)近(jin)比(bi)例(li)混(hun)合(he)時(shi)粘(zhan)度(du)增(zeng)大(da)很(hen)多(duo)，此(ci)時(shi)的(de)柱(zhu)壓(ya)大(da)約(yue)是(shi)甲(jia)醇(chun)或(huo)水(shui)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)的(de)兩(liang)倍(bei)。因(yin)此(ci)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)壓(ya)力(li)超(chao)過(guo)輸(shu)液(ye)泵(beng)或(huo)色(se)譜(pu)柱(zhu)能(neng)承(cheng)受(shou)的(de)最(zui)大(da)壓(ya)力(li)。

關於六通閥的正確使用和維護

①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。

②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置
，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力
；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗

，再用水衝洗。