色譜柱參數
物理性質:
柱長,內徑,如250*4.6mm。一般柱長在2―250mm,柱越長,分離度越高,但柱壓更高,分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比,所以一昧增加柱長並不是最有效的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
粒徑,影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被汙染,導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,複雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒li徑jing,更geng大da內nei徑jing的de製zhi備bei色se譜pu柱zhu通tong常chang使shi用yong更geng大da的de粒li徑jing。如ru果guo固gu定ding相xiang選xuan擇ze是shi正zheng確que,但dan是shi分fen離li度du不bu夠gou,那na麼me選xuan用yong更geng小xiao的de粒li度du的de填tian料liao是shi很hen有you用yong的de。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據現實情況而定。
孔徑,60A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率高,比表麵積大,載碳量高;sepuzhutianliaokongjingdaxiaoxuhefenzidaxiaoxiangpipei,baozhengfenziziyoujinchutianliaokongbingyukongneibiaomiandejianhexiangjinxingfenlifenpei,tongchangyaoqiukongjingzhijingshifenzizhijingde3倍以上,一般小分子使用80―120A,大分子使用300A。
顆粒形狀,一般有球形和不規則形,當使用黏度較大的流動相時,球形顆粒可以降低柱壓,延長色譜柱壽命。
比表麵積,指的是每克填料的表麵積,如180m2/g―350m2/g,與粒度和含孔率有關;比表麵積大,會增加樣品與鍵合相之間的反應,增加保留和分離度;比表麵積小則可以縮短分析時間和平衡時間,並不是比表麵積大或者小就更好,需要選擇合適的比表麵積。
化學性質:
矽膠基質:最通用的基質,強度大,化學修飾容易,但使用的pH值範圍有限(一般為2―8,特殊修飾的可以達到1―12)。
聚合物基質:多為聚苯乙烯―二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩定,應用pH範圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重複性較差,商品化色譜柱不多,一般價格較貴。
載碳量:基質表麵鍵合相的比例,載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。
鍵合相:鍵合試劑不同,對化合物的選擇性不同,一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩定。
封端:yongduanlianjiangluoludeguiqiangjijianhehoufengbiqilai,yijianshaocanliudeguichunji,jianqingdaicezufenyusuanxingguiqiangjifanyingeryinqidesepufengtuoweixianxiang。youqiduiyujixingyangpineryan,weifengduanchulidesepuzhufenlixiaoguojiaocha。
正相&反相色譜
目前市場上主要以反相色譜為主,約占80%的比例。
固定相極性
流動相極性
出峰順序
反相吸附色譜
非極性
強極性(水、甲醇、乙腈等)
強極性物質先出峰
正相吸附色譜
極性
弱極性(己烷、庚烷等)
弱極性物質先出峰
柱長及內徑的選擇:
長度的選擇:柱越長,總柱效越高(n值越大),柱越長,分析時間也越長。250―300mm是最普遍的柱長,實驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子,一般用來分離l0到50個組份的中等至複雜混合物;500―600mm,要求較高分辨率的應用,―般用來分離大於50個組份或包含有難分離物質的複雜樣品程序升溫分析。
內徑:柱(zhu)效(xiao)率(lv)與(yu)柱(zhu)半(ban)徑(jing)平(ping)方(fang)成(cheng)反(fan)比(bi),內(nei)徑(jing)越(yue)小(xiao)柱(zhu)效(xiao)越(yue)高(gao),但(dan)內(nei)徑(jing)越(yue)大(da),柱(zhu)容(rong)量(liang)也(ye)增(zeng)加(jia),允(yun)許(xu)進(jin)樣(yang)量(liang)就(jiu)越(yue)多(duo)。當(dang)進(jin)樣(yang)量(liang)超(chao)過(guo)柱(zhu)容(rong)量(liang)時(shi),則(ze)因(yin)柱(zhu)內(nei)每(mei)塊(kuai)理(li)論(lun)板(ban)內(nei)不(bu)能(neng)建(jian)立(li)真(zhen)正(zheng)的(de)平(ping)衡(heng),將(jiang)會(hui)導(dao)致(zhi)色(se)譜(pu)蜂(feng)畸(ji)變(bian),柱(zhu)分(fen)辨(bian)率(lv)降(jiang)低(di),重(zhong)現(xian)性(xing)不(bu)好(hao)。因(yin)此(ci)對(dui)於(yu)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)需(xu)要(yao)精(jing)確(que)分(fen)離(li),必(bi)須(xu)使(shi)用(yong)小(xiao)內(nei)徑(jing)柱(zhu)子(zi)。另(ling)一(yi)方(fang)麵(mian)若(ruo)樣(yang)品(pin)中(zhong)存(cun)在(zai)具(ju)有(you)很(hen)不(bu)相(xiang)同(tong)濃(nong)度(du)組(zu)份(fen)化(hua)合(he)物(wu),為(wei)了(le)增(zeng)加(jia)樣(yang)品(pin)容(rong)量(liang)就(jiu)必(bi)須(xu)使(shi)用(yong)內(nei)徑(jing)大(da)的(de)柱(zhu)子(zi),目(mu)前(qian)實(shi)驗(yan)室(shi)使(shi)用(yong)最(zui)常(chang)見(jian)的(de)柱(zhu)子(zi)內(nei)徑(jing)一(yi)般(ban)是(shi)4.6mm。
一般選擇原則:分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對於高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長色譜柱使用壽命等。
xianzaishangpinhuadeyexiangsepuzhulinlangmanmu,genjusepuzhudecanshukeyigeiwomentigongyigechubudexuanze,danyouyugegeyiqichangshangdetianliaojishuhejianhejishudouyouchayi,jishidoushiC18柱,同一品牌不同係列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有(you)適(shi)合(he)堿(jian)性(xing)樣(yang)品(pin)的(de)等(deng)等(deng)。所(suo)以(yi)在(zai)選(xuan)擇(ze)色(se)譜(pu)柱(zhu)前(qian)要(yao)好(hao)好(hao)研(yan)究(jiu)色(se)譜(pu)柱(zhu)參(can)數(shu),仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)色(se)譜(pu)柱(zhu)說(shuo)明(ming)書(shu),才(cai)能(neng)找(zhao)到(dao)合(he)適(shi)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)和(he)適(shi)宜(yi)的(de)分(fen)離(li)方(fang)法(fa)。
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