一、母種培養:培養母種是指用組織分離或孢子分離得到的菌種。母種培養基的製備通常用土豆洋菜培養基。配製1000毫升培養基,用土豆200克,瓊脂(洋菜)18-20克,葡萄糖20克。
做法:先將土豆洗淨去皮,切成蠶豆粒小塊,放1000毫升水中煮沸30分鍾,用6-8層沙布過濾,補足損失水分。將瓊脂加入溶化後,加進溶解的糖,補充水分至1000毫升。以後分裝試管,每管裝量1/5-1/4,並加棉塞、包紙。在1.2公斤壓力下滅菌30分鍾, 趁熱擺成斜麵。冷卻後置於25-27℃條件下觀察無雜菌即可接種。一支母種可轉管25-30支。 在無菌操作下接種的試管置於25℃左右恒溫條件下培養,半個月左右菌絲可長滿試管。培養過程中應注意除掉雜菌汙染的試管。培養好的母種移入冰箱,在4℃條件下保存半年,或室溫下保存三個月。
二、原種培養:原種培養原料可用木屑(鋸末)或棉籽皮。木屑培養基配方:木屑78%,麥麩或米糠20%,糖1%,石膏1%(生、熟石膏均可,但要磨成粉方可應用)。棉籽皮培養基配方:用100 斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%,(3 斤土豆切成泥煮沸 30分鍾的濾液),糖0.1%,硫酸鎂0.1%(按水量的千分之一)。
做法:培養料加水拌合均勻,培養料的濕度以用手緊握料,指縫內見水珠,而滴不下來為宜,一般料水比 1:1.2-1.3(即100斤料加水120-130斤)。然ran後hou裝zhuang瓶ping,裝zhuang瓶ping方fang法fa是shi邊bian裝zhuang邊bian將jiang瓶ping輕qing輕qing地di抖dou動dong,使shi瓶ping上shang下xia部bu緊jin密mi適shi中zhong,裝zhuang至zhi瓶ping肩jian部bu將jiang料liao壓ya平ping,洗xi淨jing瓶ping口kou內nei外wai的de培pei養yang料liao,加jia棉mian塞sai包bao紙zhi捆kun好hao放fang進jin高gao壓ya消xiao毒du鍋guo內nei進jin行xing滅mie菌jun,在zai1.5 公斤壓力下滅菌一小時。冷卻後,在無菌操作條件下接種。將試管種母種接入瓶中,一支母種可接4-5瓶原種, 接種後置於25℃恒溫條件下培養一個月左右菌絲可長滿瓶,即為原種。
三、栽培種培養:栽zai培pei種zhong的de製zhi備bei實shi際ji上shang就jiu是shi原yuan種zhong進jin行xing一yi次ci擴kuo大da繁fan殖zhi。栽zai培pei種zhong木mu屑xie培pei養yang基ji的de配pei方fang同tong原yuan種zhong培pei養yang的de配pei方fang。棉mian籽zi皮pi培pei養yang基ji的de配pei方fang也ye同tong原yuan種zhong培pei養yang的de配pei方fang。裝zhuang瓶ping後hou滅mie菌jun,在zai無wu菌jun條tiao件jian下xia,把ba原yuan種zhong菌jun種zhong接jie入ru栽zai培pei種zhong瓶ping內nei。一yi瓶ping750毫升原種可接80-100瓶栽培後。接種後置於25℃恒溫條件下培育一個月左右,長滿瓶後即可播種。在培養原種和栽培種時,接種後每隔2-3天要檢查一次, 直至菌絲長滿料麵後每周檢查一次。揀出有雜菌汙染的菌種,並遠離培養室處理掉。
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