“賽默飛之生物通2012實驗室創新技術大獎”評ping選xuan活huo動dong開kai展zhan以yi來lai，生sheng物wu通tong已yi經jing陸lu陸lu續xu續xu收shou到dao不bu少shao項xiang目mu
，這zhe些xie項xiang目mu中zhong有you的de能neng減jian少shao實shi驗yan步bu驟zhou，有you的de能neng降jiang低di實shi驗yan成cheng本ben，還hai有you一yi些xie改gai進jin了le實shi驗yan設she備bei
，讓rang我wo們men的de實shi驗yan過guo程cheng更geng加jia輕qing鬆song。

 

參選項目：一種簡單快速的miRNA檢測新方法----液相雜交顯色法

 

背景：MicroRNAs(miRNAs)是近年來發現的在進化上高度保守的一類非編碼小RNA(~22nt)。它作為轉錄後關鍵的基因表達調控子可參與幾乎所有的生理和病理過程
，革新了我們對基因表達調控的傳統認識。miRNAs的檢測是其功能研究的基礎
，但小片段的特性使其檢測十分困難。

 

PCR和Northernblot是目前檢測單個miRNA最廣泛使用的兩種方法。PCR方法敏感性高，但假陽性的憂慮和引物設計的困難限製了它的使用。Northernblot是非常有效的檢測工具，但傳統的固相雜交技術程序複雜、時間漫長且操作不便。新出現的液相雜交技術檢測速度快，但需要特定的熒光信號檢測儀器。

 

方法改進：我們這裏報道一種新的miRNA檢測方法：液相雜交顯色法(LHCD)。

 

這種方法是將提取純化的小RNA與5’端生物素標記的DNA探針進行液相雜交，接著用核酸外切酶消化多餘的探針
，再將雜交液點於尼龍膜上，之後ABC孵育，最後BCIP/NBP、DAB或者ECL顯色。

 

LHCD能夠區別miRNA家族成員間一個堿基的差異
，其靈敏度可以達到2.5fmol，全過程耗時不到3個小時。本方法由於整合了快速液相雜交和親和素-生物素信號放大係統(ABC)兩大技術，不但實現了miRNA的簡單、快速、高靈敏度檢測
，其可視化的信號目測，還省去了昂貴的信號檢測儀。此外，本方法簡單的操作流程，使其容易學習和方便使用。