轉染 ，是(shi)將(jiang)外(wai)源(yuan)性(xing)基(ji)因(yin)導(dao)入(ru)細(xi)胞(bao)內(nei)的(de)一(yi)種(zhong)專(zhuan)門(men)技(ji)術(shu)。隨(sui)著(zhe)基(ji)因(yin)與(yu)蛋(dan)白(bai)功(gong)能(neng)研(yan)究(jiu)的(de)深(shen)入(ru)

，轉(zhuan)染(ran)目(mu)前(qian)已(yi)成(cheng)為(wei)實(shi)驗(yan)室(shi)工(gong)作(zuo)中(zhong)經(jing)常(chang)涉(she)及(ji)的(de)基(ji)本(ben)方(fang)法(fa)。轉(zhuan)染(ran)大(da)致(zhi)可(ke)分(fen)為(wei)物(wu)理(li)介(jie)導(dao)、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法
、顯微注射和基因槍屬於通過物理方法將基因導入細胞的範例
；化學介導方法很多

，如經典的磷酸鈣共沉澱法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。

 

理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)小(xiao)等(deng)優(you)點(dian)。病(bing)毒(du)介(jie)導(dao)的(de)轉(zhuan)染(ran)技(ji)術(shu)，是(shi)目(mu)前(qian)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)最(zui)高(gao)的(de)方(fang)法(fa)
，同(tong)時(shi)具(ju)有(you)細(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)很(hen)低(di)的(de)優(you)勢(shi)。但(dan)是(shi)，病(bing)毒(du)轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)的(de)準(zhun)備(bei)程(cheng)序(xu)複(fu)雜(za)
，常(chang)常(chang)對(dui)細(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)有(you)很(hen)強(qiang)的(de)選(xuan)擇(ze)性(xing)，在(zai)一(yi)般(ban)實(shi)驗(yan)室(shi)中(zhong)很(hen)難(nan)普(pu)及(ji)。其(qi)它(ta)物(wu)理(li)和(he)化(hua)學(xue)介(jie)導(dao)的(de)轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)，則(ze)各(ge)有(you)其(qi)特(te)點(dian)。

 

需(xu)要(yao)指(zhi)出(chu)的(de)一(yi)點(dian)
，無(wu)論(lun)采(cai)用(yong)哪(na)種(zhong)轉(zhuan)染(ran)技(ji)術(shu)，要(yao)獲(huo)得(de)最(zui)優(you)的(de)轉(zhuan)染(ran)結(jie)果(guo)
，可(ke)能(neng)都(dou)需(xu)要(yao)對(dui)轉(zhuan)染(ran)條(tiao)件(jian)進(jin)行(xing)優(you)化(hua)。影(ying)響(xiang)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)的(de)因(yin)素(su)很(hen)多(duo)

，從(cong)細(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)
、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮。

 

一
、細胞傳代

 

1. 試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸
，試管架

，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。

 

2. 棄掉培養皿中的培養基
，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。

 

3. 用Tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鍾(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。

 

4. 加入1ml的含血清培養基終止反應。

 

5. 用Tip頭多次吹吸，使細胞完全分散開。

 

6. 將培養液裝入離心管中

，1000rpm離心5min。

 

7. 用培養液重懸細胞，細胞計數後選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。

 

8. 將合適體積完全培養液加入離心管中，混勻細胞後輕輕加入培養皿中

，使其均勻分布。

 

9. 將培養皿轉入CO2培養箱中培養，第二天轉染。

 

二、細胞轉染

 

1. 轉染試劑的準備

 

① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鍾
，溶解脂狀物。

 

② 震蕩後將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。

 

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩後在加入合適體積的轉染試劑
，再次震蕩。

 

3. 將混合液在室溫放置10―15分鍾。

 

4. 吸去培養板中的培養基

，用PBS或者無血清培養基清洗一次。

 

5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。

 

6. 到時後，根據細胞種類決定是否移除混合液
，之後加入完全培養基繼續培養24－48小時。

 

三
、第二次細胞傳代

 

1. 在轉染後24小時
，觀察實驗結果並記錄綠色熒光蛋白表達情況。

 

2. 再次進行細胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養皿將細胞重新轉入培養皿中。

 

3. 在正常條件下培養24小時後按照染色要求條件固定。