1.傳統檢測方法的流程圖[2]

2.注意事項

國guo標biao法fa測ce菌jun群qun總zong數shu是shi以yi檢jian樣yang中zhong的de細xi菌jun細xi胞bao和he營ying養yang瓊qiong脂zhi混hun合he後hou
，每mei個ge細xi菌jun細xi胞bao都dou能neng形xing成cheng一yi個ge可ke見jian的de單dan獨du菌jun落luo的de假jia定ding為wei基ji礎chu的de。由you於yu檢jian驗yan中zhong采cai用yong37℃於有氧條件下培養(空氣中含氧約20％)
，因而並不能測出每g或mL檢樣中實際的總活菌數，厭氧菌、微嗜氧菌和冷營菌在此條件下不生長，有特殊營養要求的一些細菌也受到了限製，因此所得結果，隻包括一群能在普通營養瓊脂中發育、嗜中溫的
、需氧和兼性厭氧的細菌菌落的總數。國標法檢測應注意以下問題：

2.1 所用器皿及稀釋液

2.1.1 檢驗中所用玻璃器皿，如培養皿，吸管
、試管等必須是完全滅菌的
，並在滅菌前徹底洗滌幹淨，不得殘留有抑菌物質。
2.1.2 用(yong)作(zuo)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)的(de)液(ye)體(ti)，每(mei)批(pi)都(dou)要(yao)有(you)空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)。如(ru)果(guo)在(zai)瓊(qiong)脂(zhi)對(dui)照(zhao)平(ping)板(ban)上(shang)出(chu)現(xian)幾(ji)個(ge)菌(jun)落(luo)時(shi)，要(yao)追(zhui)加(jia)對(dui)照(zhao)平(ping)板(ban)
，以(yi)判(pan)定(ding)是(shi)空(kong)白(bai)稀(xi)釋(shi)液(ye)，用(yong)於(yu)傾(qing)注(zhu)平(ping)皿(min)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，還(hai)是(shi)平(ping)皿(min)吸(xi)管(guan)或(huo)空(kong)氣(qi)可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)的(de)汙(wu)染(ran)。
2.1.3 檢樣的稀釋液雖可用滅菌鹽水或蒸餾水
，但以用磷酸緩衝鹽水特別是0.1％danbaidongshuiweiheshi
，yindanbaidongshuiduixijunxibaoyougenghaodebaohuzuoyong，buhuiyinweizaixishiguochengzhongershishipinjianyangzhongyuanyishousunshangdexijunxibaodaozhisiwang。ruguoduihanyanliangjiaogaodeshipin(如醬品等)進行稀釋
，則需采用蒸餾水。

2.2 樣品稀釋

2.2.1 檢樣稀釋時,無菌稱取(或量取)有代表性的樣品25g(或mL)剪碎放於含有225mL滅菌稀釋液的玻璃瓶內(瓶內預置適當數量的玻璃珠)
，經充分振搖作成1:10的稀釋液。製備10倍係列稀釋的樣品勻液時，每一步都應該搖勻試管或反複吹吸，使菌體能夠盡量分散均勻。如係肉、魚等固體樣品，最好剪細於滅菌乳缽內與稀釋液研勻
，或與稀釋液同置於滅菌均質器杯中，以8000-10000rpm速度攪拌1分鍾，使做成均勻的1：10稀釋液。對於像食醋或酸性飲料等酸度較高的樣品
，如果直接用原樣液來檢測菌落總數，結果會偏低甚至為0
，隻有嚴格按標準要求先用滅菌的20-30%碳酸鈉溶液將其PH值調至中性後方可準確檢測出菌落總數。

2.2.2 根據食品衛生標準要求或對標本汙染情況的估計，將上述1:10的檢樣稀釋液再做成幾個適當的10倍遞增稀釋液。即取1:10稀釋液1mL與9mL稀釋液混和做成1:100的稀釋液，然後依次遞增稀釋，做成1:1 000、1:10000等稀釋液。注意每遞增稀釋一次，必須另換1支1mL滅菌吸管，這樣所得檢樣的稀釋倍數方為準確。
2.2.3 從吸管筒內取出滅菌吸管時，不要將吸管尖端碰著其他仍留在容器內的吸管的外露部分
；而且吸管在進出裝有稀釋液的玻璃瓶和試管時，也不要觸及瓶口及試管口的外側部分
；因為這些部分都可能接觸過手或其他沾汙物。
2.2.4 在作10倍遞增稀釋中，吸管插入檢樣稀釋液內不能低於液麵2.5cm；xiruyetishi，yingxiangaoyuxiguankedu
，ranhoutiqixiguanjianduanlikaiyemian，jiangjianduantieyubolipinghuoshiguandeneibishixi。guanneiyetitiaozhisuoyaoqiudekedu

，zheyangquyangjiaozhunque，erqiezaixiguancongxishiyeneiquchushibuhuiyouduoyudeyetizhanfuyuguanwai。   

2.2.5 當用吸管將檢樣稀釋液加至另一裝有9mL空白稀釋液的試管內時，應小心沿管壁加入

，不要觸及管內稀釋液
，以防吸管尖端外側部分粘附的檢液也混入其中。

2.3 平板接種與培養

2.3.1 將稀釋液加至滅菌平皿內時，應根據食品衛生標準要求或對標本汙染情況的估計，選擇2—3個適宜稀釋度

，分別在作1O倍遞增稀釋的同時

，即以吸取該稀釋度的吸管移lmL稀釋液加入皿內(從皿側加入

，不要揭去皿蓋)
，最後將吸管直立使液體流畢，並在皿底幹燥處再擦一下吸管尖將餘液排出
，而不要吹出。每個稀釋度應作2個平皿。

2.3.2 培養溫度，應根據食品種類而定。肉、乳、蛋類食品用37℃培養，水產品用30℃培養。培養時間為48±2h。其他食品，如清涼飲料

，調味品
，糖果、糕點．果脯，酒類(主要為發酵酒)、豆製品和醬醃萊均係用37℃24±2h培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)溫(wen)度(du)和(he)時(shi)間(jian)之(zhi)所(suo)以(yi)有(you)這(zhe)種(zhong)不(bu)同(tong)的(de)區(qu)分(fen)，是(shi)因(yin)為(wei)在(zai)製(zhi)定(ding)這(zhe)些(xie)食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)標(biao)準(zhun)中(zhong)關(guan)於(yu)菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)的(de)規(gui)定(ding)時(shi)
，分(fen)別(bie)采(cai)用(yong)了(le)不(bu)同(tong)的(de)溫(wen)度(du)和(he)培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)所(suo)取(qu)得(de)的(de)數(shu)據(ju)之(zhi)故(gu)。水(shui)產(chan)品(pin)因(yin)來(lai)自(zi)淡(dan)水(shui)或(huo)海(hai)水(shui)，水(shui)底(di)溫(wen)度(du)較(jiao)低(di)
，因(yin)而(er)製(zhi)定(ding)水(shui)產(chan)品(pin)細(xi)菌(jun)方(fang)麵(mian)的(de)衛(wei)生(sheng)標(biao)準(zhun)時(shi)，係(xi)用(yong)30℃作為培養的溫度。

2.4 菌落計數

2.4.1 在zai進jin行xing菌jun落luo計ji數shu時shi，有you一yi些xie樣yang品pin的de殘can渣zha會hui在zai視shi覺jiao上shang與yu菌jun落luo混hun淆xiao，因yin此ci，在zai進jin行xing計ji數shu時shi應ying該gai仔zai細xi分fen辨bian。菌jun落luo的de形xing狀zhuang相xiang對dui規gui則ze
，比bi較jiao有you光guang澤ze度du，更geng飽bao滿man

，而er樣yang品pin的de殘can渣zha比bi較jiao不bu規gui則ze，沒mei有you菌jun落luo的de飽bao滿man度du和he光guang澤ze度du。另ling外wai

，還hai可ke向xiang培pei養yang基ji中zhong添tian加jia一yi定ding濃nong度du的deTTC
，可以使菌落成紅色，便於觀測和計數
，但TTC的濃度不宜過高
，否則會抑製菌落的生長。

2.4.2 從溫箱內取出平皿進行菌落計數時，應先分別觀察同一稀釋度的兩個平皿和不同稀釋度的幾個平皿內平板上菌落生長情況。平行試驗的2個ge平ping板ban與yu菌jun落luo數shu應ying該gai接jie近jin，不bu同tong稀xi釋shi度du的de幾ji個ge平ping板ban上shang菌jun落luo數shu則ze應ying與yu檢jian樣yang稀xi釋shi倍bei數shu成cheng反fan比bi，即ji檢jian樣yang稀xi釋shi倍bei數shu越yue大da，菌jun落luo數shu越yue低di，稀xi釋shi倍bei數shu越yue小xiao，菌jun落luo數shu越yue高gao。
2.4.3 菌落計數所得結果，可分別按以下幾種不同情況作報告。

2.4.3.1 若1個稀釋度的平均菌落數在30—300之間，則將該菌落數乘其稀釋倍數報告之。

2.4.3.2 若有兩個稀釋度，其生長的菌落數均在30—300之間，則視二者之比如何來決定。若其比值小於2
，應報告其平均數。
2.4.3.3 若所有稀釋度的平均菌落數均大於300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。

2.4.3.4 若所有稀釋度的平均菌落數均小於30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之。

1.3M測試片快速分析技術

1.1 3M測試片快速分析技術概念

3M測試片法是一種便捷可再生水化幹膜
，適用於細菌和真菌的計數。

1.2 檢測步驟

隻需三步就可實現快速準確的測定。(以大腸杆菌的為例)

1.3 結果判讀

①測試片中含有一種紅色指示染劑可使菌落著色，計算所有紅色菌落(不論其大小和顏色深淺均計算之)。

②測試片上沒有任何菌落生長。

③有不多的菌落。

④測試片菌落數適宜計數範圍是25-250。

⑤測試片麵積約為20平方厘米，當菌落數超過250個，如5所示，為了估計菌落數

，可選擇其中一個或數個有代表性菌落的小方格(1cm²)，計算平均菌落數
，再乘以20可得到整個測試片上的菌落數。

⑥ 測試片上菌落太多而無法計數。

⑦有很多高數量菌落

，使整個生長區變粉色
，應計錄為菌落太多無法計數。

⑧有時菌落分布出現不均衡，如8所示,這也記錄為菌落太多無法計數。

⑨測試片上的菌落,最先粗略一看是可計數的

，然而，你密切注意到生長區邊緣，能看到高密度的菌落，應記錄為菌落太多無法計數。

1.4 測試片法特點

1.4.1 工作效率的極大提高

根據大量數據統計，使用 3M測試片技術， 可以提高實驗室工作效率 118% 以上。勞動資源的最佳使用帶來生產能力的提高，最終的效果就是效益的增加。

1.4.2 標準化的檢測方法

品質穩定的快速測試片克服了傳統的測試方法存在的由於使用不同批次的培養基，不同的配製條件
，不同配製人員而導致的差異性。

1.4.3 國際化的認證方法

3M快速測試的方法得到包括 AOAC，AFNOR 在(zai)內(nei)的(de)國(guo)際(ji)權(quan)威(wei)機(ji)構(gou)的(de)認(ren)證(zheng)，在(zai)全(quan)球(qiu)許(xu)多(duo)國(guo)家(jia)也(ye)已(yi)獲(huo)得(de)官(guan)方(fang)機(ji)構(gou)的(de)正(zheng)式(shi)批(pi)準(zhun)
，從(cong)而(er)可(ke)以(yi)確(que)保(bao)檢(jian)測(ce)結(jie)果(guo)的(de)可(ke)靠(kao)性(xing)和(he)在(zai)世(shi)界(jie)各(ge)地(di)的(de)廣(guang)泛(fan)認(ren)可(ke)。

1.4.4 快速得到檢測結果

對比傳統的測試方法
， 3M快速測試片縮短檢測時間，使您在更短的時間內獲得樣品的測試結果，能更加迅速地采取有效的措施解決發現的問題。

1.4.5 方便進行HACCP 認證

由於檢測速度快，檢測項目全，準確性高。3Mweishipinshengchangongyiguochengzhongguanjiankongzhidiandejiankongtigonglejiaoweiwanzhengdexiliechanpin，keyiduibaokuoshengchanxian，shengchanshebeihehuanjingzaineidegegehuanjiejinxingquanmiandeceshi。

2.ATP法

2.1 ATP熒光法檢測總菌落數原理

螢火蟲會發光是由於它能合成將化學物質的化學能轉變為光能的生物催化劑—熒光素酶、蟲熒光素(D-luciferin)以及所有細胞生物都產生的生物能量物質—三磷酸腺苷（ATP）。在有氧的條件下，蟲光素酶催化蟲熒光素和ATP之間發生氧化反應，形成氧化熒光素並發出熒光
，其生化反應式如下：

2.2 ATP法特點：

2.2.1 具有成本低，操作簡單，響應速度快等特點
，

2.2.2 微生物 ＡＴＰ 生物發光法在國外已被廣泛地運用於食品中菌落總數的測定。

3.MTT法

3.1 MTT法檢測原理

檢測原理為活體微生物線粒體中含有琥珀酸脫氫酶
，能使外源性MTT（噻唑藍）還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Formazan)並沉積在細胞中

，而死細胞無此功能。Formazan結晶形成的量與活菌數成正比。用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值
，可間接反映活菌細胞數量。

3.2 應用實例：巴氏消毒奶中活菌素快速檢測

取巴斯消毒奶10mL ，至於無菌離心管中3000rpm離心5分鍾
，棄去上清。加入10mL無菌生理鹽水洗滌離心管
，再次3000rpm離心5分鍾，棄去上清取出奶液基質。加入1mL生理鹽水重懸底部的微生物，取0.2mL到96孔酶標板中，同時加入標準菌液做標準曲線，統一加入底物反應30分鍾
，讀數。

3.3 該方法的特點：檢測快速，靈敏度高。

4.流式細胞術

4.1 流式細胞術檢測原理

檢測原理：細胞經特異熒光素標記後

，通過激光照射，產生特異熒光信號
，通過對這些熒光信號的檢測和定量計算出菌群總數。

4.2 特點：快速、便捷結果可靠、便於操作。

結語：

菌jun落luo總zong數shu是shi微wei生sheng物wu檢jian測ce中zhong最zui常chang見jian的de項xiang目mu，在zai檢jian驗yan的de每mei一yi個ge環huan節jie都dou應ying該gai小xiao心xin謹jin慎shen
，精jing準zhun操cao作zuo，確que保bao檢jian測ce結jie果guo的de準zhun確que度du。國guo標biao法fa采cai用yong的de平ping板ban計ji數shu法fa是shi我wo們men最zui常chang用yong的de檢jian測ce方fang法fa，但dan是shi操cao作zuo過guo程cheng較jiao為wei複fu雜za
，時shi間jian較jiao長chang

；而(er)其(qi)他(ta)方(fang)法(fa)操(cao)作(zuo)簡(jian)便(bian)，省(sheng)時(shi)，但(dan)是(shi)有(you)的(de)成(cheng)本(ben)相(xiang)對(dui)較(jiao)高(gao)，並(bing)且(qie)有(you)的(de)隻(zhi)針(zhen)對(dui)特(te)定(ding)的(de)食(shi)品(pin)種(zhong)類(lei)。我(wo)們(men)應(ying)該(gai)積(ji)極(ji)關(guan)注(zhu)新(xin)的(de)科(ke)學(xue)技(ji)術(shu)在(zai)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)中(zhong)的(de)應(ying)用(yong)，讓(rang)檢(jian)測(ce)更(geng)加(jia)精(jing)確(que)、經濟

、便捷和可靠。