PCR實驗室汙染？別急，教你萬能應急法
發布日期：2022-04-08
核心提示：PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優勢已經被廣泛應用，不過正是由於它靈敏度極高，極微量的汙染源都有可能導致檢測結果的假
PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優勢已經jing被bei廣guang泛fan應ying用yong，不bu過guo正zheng是shi由you於yu它ta靈ling敏min度du極ji高gao，極ji微wei量liang的de汙wu染ran源yuan都dou有you可ke能neng導dao致zhi檢jian測ce結jie果guo的de假jia陽yang性xing，因yin此ci所suo有you的de預yu防fang措cuo施shi都dou會hui稍shao稍shao有you所suo不bu同tong。「易查不易察」，汙染來的悄無聲息，我們該如何應對。
那麼，如何避免以及處理實驗室汙染，對PCR人來說是一門必修課。
主要是在采（取）樣的過程中，由於取樣工具之間的交叉造成汙染；或者在核酸提取的過程中，由於移液器、離心管等使用不當導致的汙染。主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由於移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照汙染。這是 PCR 反應中最主要最常見的汙染問題。因為 PCR 產物拷貝量大，遠遠高於 PCR 檢測數個拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產物汙染，就可形成假陽性。還有一種容易被忽視的汙染，是能造成PCR產物汙染形式的氣溶膠汙染，而氣溶膠造成的汙染是一個值得特別重視的問題。
在zai實shi驗yan操cao作zuo中zhong會hui經jing常chang用yong到dao陽yang性xing參can考kao品pin，這zhe些xie參can考kao品pin大da多duo數shu是shi由you某mou些xie克ke隆long質zhi粒li製zhi作zuo而er成cheng的de，質zhi粒li在zai單dan位wei容rong積ji內nei濃nong度du高gao，不bu小xiao心xin使shi用yong極ji易yi造zao成cheng汙wu染ran。
(2).購買市麵上有效氯消毒片，根據要求配置不同濃度的消毒液，或者購買成品次氯酸鈉消毒液配製合適濃度消毒水；(3).購買核酸氣溶膠汙染清除劑(DNA AWAYO®原液/MediClean⑧稀釋100倍)；
(1).清理廢液缸並且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸汙染；(2).用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗，關鍵部位為移液槍前端易汙染部位，清潔幹淨後用潔淨水再擦拭一遍；
(3).將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時後，用清水衝洗幹淨晾幹後使用；
(4).對汙染區域內的設備如擴增儀、全自動提取儀等，使用核酸氣溶膠汙染清除劑進行反複處理；對生物安全櫃等含有空氣過濾係統的設備，需更換過濾網；
(5).用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室（地板、牆麵、天花板、門、窗戶等地方）進行清潔，並且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒（重點部位為操作區），有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗台表麵的核酸汙染；同時加大通風量（內循環無用，盡可能外循環）；
(6).待汙染區域及設備器件清理完成後，常用設備和操作台麵使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時；實驗室內則使用室內紫外燈整晚輻照。
以上措施每日進行，直至汙染消除；步驟(1)-(6)必須堅持每天進行，確保消除實驗室汙染；
設計陰性對照組，根據陰性對照確認汙染情況。可使用敞開後隔夜放置操作區的陰性對照進行實驗（在單獨的實驗室驗證)，若連續三天陰性對照沒有起跳，則說明汙染得到控製，可恢複正常實驗。
汙染，是 PCR 實驗室出現實驗假陽性、結果不可信、研發不可靠的重要推手。在最初開展PCR實驗室的時候，應最大程度的降低可能出現的PCR汙染或杜絕汙染的出現，在實驗室前期設計及日常實驗室管理和操作中，就需要進行合理的規劃以及嚴格執行實驗室SOP，把汙染的可能性扼殺在搖籃中。
編輯：songjiajie2010
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