shiyongjunjunzhongzhiliangdeyoulie，zhijieyingxiangdaozaipeidechengbaihechanliangdegaodi，zhiyouyouliangdejunzhong，cainenghuodeyouzhigaochandeshiyongjun。yincishiyongjundezhizhong，shishengchanzhongyixiangjiqizhongyaodegongyi。

食用菌的菌種按培養階段和來源的不同
，可分母種、原種和栽培種三種。從食用菌的孢子分離培養或從組織分離培養、基(ji)內(nei)菌(jun)絲(si)分(fen)離(li)培(pei)養(yang)所(suo)得(de)到(dao)的(de)第(di)一(yi)代(dai)菌(jun)絲(si)體(ti)，稱(cheng)為(wei)母(mu)種(zhong)。從(cong)母(mu)種(zhong)擴(kuo)大(da)培(pei)養(yang)的(de)菌(jun)絲(si)體(ti)，稱(cheng)為(wei)原(yuan)種(zhong)。從(cong)原(yuan)種(zhong)擴(kuo)大(da)培(pei)養(yang)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)生(sheng)產(chan)上(shang)播(bo)種(zhong)的(de)菌(jun)絲(si)體(ti)

；稱為栽培種。

一、母種的分離和培養

    （一）母種培養基的配製

    1.母種培養基的種類 muzhongshijunzhongshengchandeguanjian，yaoqiuchundugao，bunenghunshengzajun
，tongshimuzhongdejunsitijiaoweixianxi
，fenjiepeiyangliaodenenglijiaoruo。yinci
，muzhongjunsitixuyaopeiyangzaiyingyangfengfu
，yibeixishou，biaomianguanghuayiyujianbieyouwuzajunganrandeqiongzhipeiyangjishang。shihemuzhongjunsishengchangdeqiongzhipeiyangjizhongleihenduo，changyongdeyouxialiejizhong：

1、	馬鈴薯――葡萄糖――瓊脂培養基	馬鈴薯（去皮）	200克	瓊脂	20克
		葡萄糖（或蔗糖）	20克	水	1000毫升
2、	麥芽汁――葡萄糖――瓊脂培養基	幹麥芽	250克	瓊脂	20克
		葡萄糖（或蔗糖）	10克	水	1000毫升
3、	胡蘿卜――葡萄糖――瓊脂培養基	胡蘿卜	100克	瓊脂	20克
		葡萄糖（或蔗糖）	20克	水	1000毫升
4、	蘑菇汁――葡萄糖一一瓊脂培養基（適用於蘑菇）	鮮蘑菇	250克	瓊脂	20克
		葡萄糖（或蔗糖）	20克	水	1000毫升
5 、	蛋白腖――葡萄糖――瓊脂培養基	蛋白腖	2克	葡萄糖	20克
		磷酸氫二鉀	2克	維生素B1（硫胺素)	0.5毫克
		磷酸二氫鉀	0.5克	瓊脂	18克
		硫酸鎂	0.5克	水	l000毫升

 

    2.母種培養基的製法 茲以最常用的馬鈴薯――葡萄糖――瓊脂培養基的製法為例介紹如下：先將馬鈴薯去皮，洗滌，切成小塊，加水1000毫升，煮沸15～20分鍾
，取雙層紗布過濾，取其濾液，加入瓊脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加熱使其溶化，最後補足水分，使其容量仍為1000毫升。趁熱分裝於試管中，裝量約為試管長度的1/5左右，裝管時要注意不使培養基沾汙試管壁和試管口。試管口塞上大小合適的棉花塞
，塞入試管口內的長度為棉塞總長的3/5。塞好棉塞後，每10支zhi作zuo一yi捆kun，用yong牛niu皮pi紙zhi包bao紮zha好hao後hou，置zhi鐵tie絲si網wang籠long中zhong，然ran後hou進jin行xing高gao壓ya滅mie菌jun。如ru作zuo為wei孢bao子zi分fen離li用yong
，則ze將jiang培pei養yang基ji分fen裝zhuang於yu三san角jiao瓶ping或huo培pei養yang皿min中zhong
，然ran後hou高gao壓ya滅mie菌jun。

    3.母種培養基的消毒滅菌 母種培養基通常用高壓蒸汽滅菌鍋來消毒滅菌
，常用的高壓蒸汽滅菌鍋有直式、臥式和手提式三種。將配製好後的母種培養基移入上述任何一種高壓蒸汽滅菌鍋中，在15公斤/平方厘米 壓力下
，消毒滅菌30分鍾。

    高(gao)壓(ya)蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌(jun)主(zhu)要(yao)是(shi)依(yi)靠(kao)提(ti)高(gao)蒸(zheng)汽(qi)的(de)溫(wen)度(du)來(lai)滅(mie)菌(jun)的(de)
，因(yin)此(ci)滅(mie)菌(jun)時(shi)
，應(ying)將(jiang)鍋(guo)內(nei)的(de)冷(leng)空(kong)氣(qi)全(quan)部(bu)排(pai)除(chu)。否(fou)則(ze)
，盡(jin)管(guan)壓(ya)力(li)表(biao)上(shang)的(de)壓(ya)力(li)已(yi)達(da)到(dao)要(yao)求(qiu)，然(ran)而(er)，滅(mie)菌(jun)鍋(guo)內(nei)的(de)溫(wen)度(du)卻(que)未(wei)達(da)到(dao)所(suo)需(xu)的(de)溫(wen)度(du)（表11）。排除冷空氣的方法是加熱後當壓力表上指針上升到0.5公斤/平方厘米時，打開排氣閥，放氣至指針仍回到“零”的位置。滅菌的時間是以排除冷空氣後，壓力回升到1.5公斤/平方厘米 時才開始計算。每次滅菌之後，要等壓力降到“零”時，才打開鍋蓋，否則
，滅菌的液體會因突然減壓而外溢，玻璃器皿也會因突然降溫而破裂。

表11高壓滅菌時壓力的換算及其與溫度的關係

磅/平方英寸	公斤/平方厘米	滅菌器中的溫度（℃）
		排除空氣	未排除空氣
5	0.352	108.4	72
10	0.703	115.2	90
15	1.055	121.0	100
20	1.406	126.0	109
25	1.758	130.4	115
30	2.109	134.5	121

    在沒有高壓蒸汽滅菌鍋設備的情況下
，可用蒸鍋、蒸籠等進行常壓滅菌。由於密封性差，壓力升不高，溫度隻能升至102℃左右，因此要連續蒸4～6小時才能達到滅菌的目的。

高壓嚴菌後將試管取出排成斜麵備用。

    （二）母種分離材料的選擇

    1.子實體的選擇 無(wu)論(lun)是(shi)用(yong)作(zuo)孢(bao)子(zi)分(fen)離(li)或(huo)組(zu)織(zhi)分(fen)離(li)的(de)子(zi)實(shi)體(ti)
，都(dou)要(yao)從(cong)產(chan)量(liang)高(gao)，長(chang)勢(shi)好(hao)，適(shi)應(ying)性(xing)強(qiang)
，無(wu)雜(za)菌(jun)蟲(chong)害(hai)的(de)群(qun)體(ti)中(zhong)
，選(xuan)擇(ze)朵(duo)大(da)，生(sheng)長(chang)健(jian)壯(zhuang)的(de)單(dan)生(sheng)子(zi)實(shi)體(ti)作(zuo)為(wei)分(fen)離(li)的(de)材(cai)料(liao)。

選作分離的子實體，成熟度要適當，如蘑菇、草(cao)菇(gu)具(ju)有(you)菌(jun)膜(mo)，最(zui)好(hao)選(xuan)菌(jun)膜(mo)將(jiang)破(po)而(er)未(wei)破(po)的(de)成(cheng)熟(shu)度(du)
，這(zhe)種(zhong)子(zi)實(shi)體(ti)發(fa)育(yu)已(yi)成(cheng)熟(shu)，子(zi)實(shi)層(ceng)又(you)未(wei)受(shou)汙(wu)染(ran)，因(yin)此(ci)能(neng)很(hen)快(kuai)散(san)出(chu)大(da)量(liang)的(de)無(wu)菌(jun)孢(bao)子(zi)。對(dui)沒(mei)有(you)菌(jun)膜(mo)或(huo)菌(jun)膜(mo)自(zi)幼(you)已(yi)破(po)的(de)食(shi)用(yong)菌(jun)，如(ru)香(xiang)菇(gu)、平菇等
，則以選取八分熟，正在釋放孢子的個體為最好
；因為剛從擔子彈射出來的孢子基本上也是無菌的。

    2.菇木和耳本的選擇 木生食用菌如香菇、銀耳、黑(hei)木(mu)耳(er)等(deng)，可(ke)以(yi)從(cong)它(ta)們(men)生(sheng)長(chang)的(de)基(ji)質(zhi)
，即(ji)菇(gu)木(mu)和(he)耳(er)木(mu)作(zuo)為(wei)分(fen)離(li)的(de)材(cai)料(liao)。選(xuan)擇(ze)時(shi)
，應(ying)從(cong)野(ye)生(sheng)或(huo)人(ren)工(gong)栽(zai)培(pei)場(chang)所(suo)挑(tiao)選(xuan)子(zi)實(shi)體(ti)生(sheng)長(chang)健(jian)壯(zhuang)
，朵(duo)大(da)，長(chang)勢(shi)好(hao)，菌(jun)絲(si)在(zai)段(duan)木(mu)中(zhong)發(fa)育(yu)旺(wang)盛(sheng)，材(cai)質(zhi)較(jiao)為(wei)結(jie)實(shi)，尚(shang)未(wei)腐(fu)爛(lan)，一(yi)般(ban)是(shi)接(jie)種(zhong)後(hou)一(yi)年(nian)內(nei)已(yi)出(chu)菇(gu)、出耳而無雜菌害蟲感染的幼齡菇木或耳木為最好。采去子實體後，截取適當部位，掛於通風處風幹後，供分離時用。

    （三）母種的分離方法

    1.孢子分離法 是shi利li用yong食shi用yong菌jun的de有you性xing孢bao子zi或huo無wu性xing孢bao子zi，萌meng發fa成cheng菌jun絲si，獲huo得de細xi菌jun種zhong的de一yi種zhong方fang法fa。按an分fen離li時shi挑tiao取qu孢bao子zi的de數shu目mu不bu同tong，又you分fen為wei單dan孢bao子zi分fen離li法fa和he多duo孢bao子zi分fen離li法fa兩liang種zhong。蘑mo菇gu、草菇等由於孢子沒有性的區別，采用單孢子分離獲得純菌種，有結實能力，而其它食用菌如香菇、銀耳、黑hei木mu耳er等deng由you於yu孢bao子zi有you性xing別bie之zhi分fen，單dan孢bao子zi分fen離li得de到dao的de菌jun絲si不bu能neng結jie實shi，所suo以yi
，隻zhi在zai育yu種zhong上shang采cai用yong，生sheng產chan上shang很hen少shao采cai用yong。多duo孢bao子zi分fen離li法fa，是shi把ba許xu多duo孢bao子zi接jie種zhong於yu同tong一yi培pei養yang基ji上shang，讓rang它ta們men萌meng發fa，自zi然ran交jiao配pei而er獲huo得de純chun種zhong

，操cao作zuo簡jian單dan易yi學xue，生sheng產chan上shang經jing常chang采cai用yong。由you於yu采cai集ji孢bao子zi的de方fang法fa不bu同tong又you分fen為wei如ru下xia幾ji種zhong：

    （1）采集器孢子彈射法 采集孢子的裝置可用玻璃鍾罩或玻璃漏鬥做成。蘑菇和香菇常用這種方法采集孢子。具體做法是：把玻璃鍾罩或玻璃漏鬥，放在一個墊有幾層紗布的瓷 盤上，內放培養皿和不鏽鋼支架（漏鬥內也可倒掛鐵絲代支 架），上端通氣孔用棉花塞住
，然後用二層大紗布將整個裝置包起來
，高壓滅菌後
；移入無菌室備用。分離時把選好的種菇（八、九分成熟）
，切去菌柄基部送入無菌室
，用0.1％～0.2％的升汞溶液或75％的酒精表麵消毒1～2分鍾後，放在無菌水中漂洗，除去表麵藥液
，再用滅菌紗布揩手
，插到不鏽鋼支架上或鐵絲構上，靜置1～2天，菌褶上的孢子大量散落到培養皿內
，形成一層粉末狀孢子印時
，取下種菇，用滅菌的注射器
，吸取3～5毫升無菌水，注入盛有孢子的培養皿中，輕輕攪動，便孢子均勻地懸浮於水上
，再將注射器插上針頭
，吸取沉於底部的飽滿孢子
，注l～2滴(di)懸(xuan)液(ye)於(yu)試(shi)管(guan)斜(xie)麵(mian)培(pei)養(yang)基(ji)，並(bing)使(shi)其(qi)均(jun)勻(yun)分(fen)布(bu)於(yu)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)。或(huo)用(yong)接(jie)種(zhong)針(zhen)挑(tiao)取(qu)少(shao)量(liang)的(de)孢(bao)子(zi)直(zhi)接(jie)在(zai)斜(xie)麵(mian)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)劃(hua)線(xian)。待(dai)孢(bao)子(zi)萌(meng)發(fa)，生(sheng)成(cheng)菌(jun)落(luo)時(shi)，選(xuan)孢(bao)子(zi)萌(meng)發(fa)快(kuai)
，生(sheng)長(chang)良(liang)好(hao)的(de)菌(jun)落(luo)
，移(yi)接(jie)到(dao)新(xin)的(de)斜(xie)麵(mian)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)培(pei)養(yang)。

    （2）三角瓶約懸法 銀耳、黑木耳常用此法采集孢子。茲以銀耳為例，介紹其具體做法如下：選朵大、雪白、wubingchonghaidexinxianyiner，zuoweizhonger，jingwujunshuipiaoxizhongershucihou
，yongwujunxishuizhibazhongerbiaomiandeshuifenxigan。zaibazhongerqiechengyixiaokuai，yirupinghoubuhuipengdaopingbiweidu
，guazaiyonghuoyanmiejunguodexiaojinshusigou（或不鏽鋼鉤）上，迅速懸掛在三角瓶內，注意勿使種耳磁到培養基，以防雜菌汙染。塞上棉塞，放在20～25℃條件下
，經l～2天，就可看到培 養基上形成一個霧狀孢子印。此時，以無菌操作把懸掛瓶內的耳片取出，再塞上棉塞
，移到20～25℃的室中培養，經2～3天
，培養基表麵就會出現許多乳白色糊狀的白落
，就是銀耳的分生孢子。

采用孢子分離，要注意控製培養的溫度。因為食用菌孢子的彈射與培養的溫度有密切關係
，如雙孢蘑菇孢子彈射最適溫度是14～18℃
，如培養在25℃條tiao件jian下xia，孢bao子zi就jiu很hen難nan彈dan出chu。一yi般ban食shi用yong菌jun孢bao子zi彈dan射she的de最zui適shi溫wen度du比bi菌jun絲si體ti生sheng長chang的de最zui適shi溫wen度du為wei低di，而er與yu子zi實shi體ti發fa育yu的de最zui適shi溫wen度du大da致zhi相xiang同tong。如ru香xiang菇gu孢bao子zi彈dan射she的de最zui適shi溫wen度du為wei12～18℃，銀耳為20～24℃，黑木耳為20～26℃，平菇為13～20℃。

此(ci)外(wai)，孢(bao)子(zi)采(cai)集(ji)還(hai)可(ke)采(cai)用(yong)菌(jun)褶(zhe)塗(tu)抹(mo)法(fa)
，適(shi)用(yong)於(yu)野(ye)外(wai)采(cai)種(zhong)

，方(fang)法(fa)簡(jian)便(bian)，效(xiao)果(guo)也(ye)好(hao)，即(ji)選(xuan)成(cheng)熟(shu)的(de)種(zhong)菇(gu)，用(yong)接(jie)種(zhong)針(zhen)直(zhi)接(jie)插(cha)入(ru)褶(zhe)片(pian)間(jian)
，輕(qing)輕(qing)塗(tu)抹(mo)褶(zhe)片(pian)表(biao)麵(mian)尚(shang)未(wei)彈(dan)射(she)的(de)孢(bao)子(zi)，然(ran)後(hou)在(zai)試(shi)管(guan)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)接(jie)種(zhong)。

    2.組織分離法 是用食用菌幼嫩的組織塊直接分離培養成純菌種的方法。選用的子實體先經0.1％開汞水或70％酒(jiu)精(jing)表(biao)麵(mian)消(xiao)毒(du)後(hou)。用(yong)無(wu)菌(jun)水(shui)衝(chong)洗(xi)並(bing)用(yong)無(wu)菌(jun)紗(sha)布(bu)擦(ca)去(qu)表(biao)麵(mian)水(shui)分(fen)。分(fen)離(li)香(xiang)菇(gu)時(shi)用(yong)無(wu)菌(jun)解(jie)剖(pou)刀(dao)自(zi)菌(jun)柄(bing)處(chu)切(qie)開(kai)少(shao)許(xu)，再(zai)用(yong)手(shou)將(jiang)子(zi)實(shi)體(ti)掰(bai)開(kai)為(wei)二(er)

，在(zai)菌(jun)蓋(gai)與(yu)菌(jun)褶(zhe)交(jiao)界(jie)處(chu)
，切(qie)取(qu)0.3～0.4立方厘米的一小塊菌肉
，移放在斜麵培養基中央。如已開傘的種菇
、則選菌蓋與菌柄交界處的菌肉。分離草菇時，用無菌解剖刀把菌蕾縱切少許
；再用手把菌蓋輕輕剝開，在菌柄上方和菌蓋交界處，切取1～5haomidexikuai，jiezaixiemianpeiyangjizhong。ruzhongguyishouyulin，xishuijiaoduo
，yingqujunzhezuoweijiezhongcailiao。zuzhifenlihoujiangshiguanwaimianfangzaihengwenxiangzhongpeiyang。daizuzhikuaizhouweimengfachujunsi，bingxiang 培養基蔓延生長後，再挑取生長健壯的菌絲進行轉管培養。組織分離法操作簡便
，又不易帶入雜菌，容易獲得純菌種。但對銀耳、黑木耳等膠質菌；因其子實體中菌絲的含量極少，如用組織分離培養，則往往不易成功。

    3.基內菌絲分離法 是利用食用菌生長的基質一菇木和耳木作為分離材料，而培養成純菌種的方法。特別是銀耳

、黑hei木mu耳er采cai用yong這zhe種zhong方fang法fa，成cheng功gong率lv高gao，性xing狀zhuang也ye較jiao穩wen定ding，為wei生sheng產chan上shang經jing常chang采cai用yong的de方fang法fa。具ju體ti做zuo法fa是shi從cong野ye生sheng或huo人ren工gong栽zai培pei的de場chang所suo，選xuan擇ze子zi實shi體ti發fa生sheng早zao，生sheng長chang旺wang盛sheng，朵duo大da
，無wu病bing蟲chong害hai的de菇gu木mu或huo耳er木mu，鋸ju取qu一yi小xiao段duan，讓rang其qi充chong分fen風feng幹gan後hou備bei用yong。分fen離li時shi如ru為wei香xiang菇gu的de菇gu木mu
，先xian鋸ju取qu1厘米的薄片

，切去四周
，用0.1％升汞水表麵消毒1～2分 鍾，用無菌刀將其劈成小木片
，再切成0.5平方厘米的小木條

，移入試管斜麵培養基上，經25～27℃培養
，菌絲生長後，再行轉管培養。

    分離時如為銀耳的耳木，先從長有子實體部位，鋸取1～2厘米厚的木片
，剔除樹皮及耳基，再用0.1％升汞水或70％酒(jiu)精(jing)塗(tu)擦(ca)表(biao)麵(mian)消(xiao)毒(du)，通(tong)過(guo)耳(er)基(ji)著(zhe)生(sheng)處(chu)，把(ba)耳(er)木(mu)縱(zong)切(qie)為(wei)二(er)，用(yong)無(wu)菌(jun)刀(dao)在(zai)耳(er)基(ji)著(zhe)生(sheng)處(chu)
，削(xue)取(qu)極(ji)小(xiao)的(de)木(mu)屑(xie)，移(yi)入(ru)試(shi)管(guan)斜(xie)麵(mian)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)。接(jie)種(zhong)後(hou)放(fang)在(zai)20～28℃的溫度下培養
，數天後接種塊的周 weikaishichangchuxianxidebaisejunsi
，yanshendaopeiyangjihou
，peiyangjideyansezhujianbianhuangzhuanhei，biaomianchuxianqianhuisebanwen，zhejiushiyumaozhuangjunsi。yixingqihou，xiaomuxieshangchuxianbaiseduanrongmaozhuangjunsi
，tongshifenmibaisehuodanhuangseshuizhu，zhejiushiyinerdefayujunsi。tiaoquyinerfayujunsiheshao xuyumaozhuangjunsizhuanjieyuxindexiemianpeiyangjishangjinxingkuojie，yixingqihou
，junsichangmanshiguan，jichengweimuzhong。zaishijifenlizhongwangwangbukenengdedaoyinerjunsiyuyumaozhuangjunsiliangzhejianyoudemuzhong。huochunweiyinerjunsi； 或純為羽毛狀菌絲
；或酵母狀分生孢子，還有相當數量是感染雜菌或不長任何菌絲的。純銀耳菌絲和純羽毛狀菌絲，經適當配合後，就可應用於生產。

    黑木耳的耳木分離
，其操作方法與銀耳大致相同，但不象銀耳有多種類型的菌絲。耳木接入試管後，一般放在22～28℃培養2～3天，可見菌絲長出。選生長健壯、清楚、兩端展整齊的
，進行轉管純化2～3次培育成母種。在培養過程中，有時培養基背麵會出現乳白色或淡褐色，這是正常現象。

    （四）母種的擴大培養

    congfenlihuodehuowaidiyinrudeyouliangmuzhong，youyushuliangyouxianbunengmanzushengchanshangdexuyao
，yingjinxingkuodafanzhipeiyang。qifangfashiyiwujuncaozuobaxiemianpeiyangjiliantongjunsitiqiechengduanmilidadexiaokuai，yijiedaoxindexiemianpeiyangjishang，zaishiwentiaojianxiapeiyang

，daijunsichangmanxiemianshijicheng。yibanmeizhimuzhongshiguankekuodafanzhi60～80支新管。擴大母種第一次應多些，以避免多次轉管，造成菌絲生活力降低，結菇（耳）少
，影響產量和質量。一般要求轉管不要超過五次。