所謂植物脫毒,是將植物莖尖生長尖端組織進行分離,將分離組織置於特定培養基中進行培養,從而獲得脫離原體病毒、病bing菌jun的de新xin生sheng種zhong苗miao。具ju體ti到dao食shi用yong菌jun的de脫tuo毒du繁fan種zhong,嚴yan格ge說shuo來lai,一yi般ban的de組zu織zhi分fen離li並bing不bu能neng達da到dao使shi菌jun種zhong脫tuo毒du的de目mu的de,這zhe是shi由you於yu子zi實shi體ti已yi生sheng長chang至zhi中zhong後hou期qi,攜xie帶dai病bing毒du、病菌的概率相當高,故脫毒效果不明顯。而將食用菌尖端生長點進行脫毒,效果理想。
具體的脫毒方法有兩種:
1.菌絲尖端脫毒技術
使用規格為90毫米或110毫米的培養皿。無此規格培養皿時,也可改用規格為25毫米×200毫米的大型試管,但操作不太方便。 先按常規製備母種培養基,裝入三角瓶,棉塞封口,加皮紙包封;同時將培養皿洗淨後用牛皮紙包好。二者同時進行滅菌處理。121℃下滅菌30fenzhong,daimiejunguoneiyaliweilingshi,quchumiejunwu,fangrushixianxiaodudejiezhongxiang。dakainiupizhibaofeng,yishouchipeiyangmin,yishouchisanjiaoping,liyongshouzhitiaokongshipeiyangminshanggaikaiqiyue1~2厘米,倒入培養基液體約10~20毫升,蓋嚴。將培養皿平置,冷卻後成一光滑平麵,俗稱平板 。平板冷卻至30℃以下時,接入待脫毒菌種。接種方法:挑取米粒大小的一塊種源,接入平板邊緣。接種後置於規定溫度下培養〔視品種調控溫度)。當菌絲萌發至最長為2厘米時,用尖刃接種工具切取菌絲尖端1毫米左右,接入新製平板上。此為1次脫毒。一般可連續脫毒3~4次。脫毒次數越多,脫毒效果就越有保證。
2.原基組織脫毒技術
該技術最大程度革除了原有組織分離時子實體處於生長中後期,攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端,真正實現了分離尖端組織的脫毒目的。具體操作為: 常規配製基料,調破氮比為30∶1。碳氮比不可小於25∶1,以免菌絲過度旺盛生長結成菌皮,不易現原基。大口罐頭瓶洗淨、備用。準備數塊又11厘米×11厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時,從瓶口處鋪上一層紗布,用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下,使之緊貼瓶劈。封口滅菌、接種、培養等操作按常規進行。待菌絲發滿瓶後,施行溫差、濕差、光照等刺激,一般約7天即可現出原基。此時原基的形態是白疙瘩 。待原基高至1厘米時,即可進行脫毒分離。 將菌瓶用75%酒精擦洗後,移入已消毒的接種箱,箱內不再進行常規熏蒸。同時準備接種針(或接種釣)、多個刀片(以備交替使用),與菌瓶一同放入接種箱中,噴灑新潔爾滅以確保無菌操作。兩手用75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)洗(xi),伸(shen)入(ru)接(jie)種(zhong)箱(xiang),將(jiang)刀(dao)片(pian)進(jin)行(xing)灼(zhuo)燒(shao)滅(mie)菌(jun)後(hou)手(shou)持(chi)冷(leng)卻(que)。打(da)開(kai)菌(jun)瓶(ping)封(feng)口(kou),兩(liang)手(shou)配(pei)合(he)用(yong)無(wu)菌(jun)鑷(nie)子(zi)取(qu)出(chu)原(yuan)基(ji)。由(you)於(yu)料(liao)麵(mian)覆(fu)蓋(gai)一(yi)層(ceng)紗(sha)布(bu),故(gu)不(bu)會(hui)將(jiang)基(ji)料(liao)帶(dai)出(chu),操(cao)作(zuo)方(fang)便(bian)。用(yong)刀(dao)片(pian)將(jiang)原(yuan)基(ji)表(biao)層(ceng)削(xue)去(qu)約(yue)1毫米,然後用尖刃刀片將原基劃切,使每塊大小1毫米2左右。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進行常規培養。操作要點:一是用刀片進行削、切時,每切一刀須更換一次刀片;二是分離塊接入時須靠邊緣投放,可接在平板的邊緣或試管的最前部,一般不居中接入。
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