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junzhongshiguojiazhongyaodeshengwuziyuan，jianyuqizishendeyichuanxinghebianyixing，zaijunzhongbaozangguochengzhong，ruhejiangdijunzhongdeshuaiwangsudu，fangzhizajunwuran，baochijunzhongyichuanxingzhuangbubianyi，shiyoulianggaochanjunzhuchangqizaishengchanzhongyingyong，chengweishiyongjunlingyuyixiangzhongyaodeketi。weishiyingqunzhongxingshengchandexuyao，weishiyingqunzhongxingshengchandexuyao，benwenjieshaolejizhongjiandanyixing、實用效果好的菌種保藏方法。
一、菌種保藏基本原理
通過低溫、幹燥、缺氧和饑餓等手段來達到最大限度降低菌絲體的生理代謝。首先要挑選優良純菌種，包括菌絲體和它們的孢子；其次，根據其生理、生化特點，人為創造低溫、幹gan燥zao或huo缺que氧yang等deng條tiao件jian，抑yi製zhi微wei生sheng物wu的de代dai謝xie作zuo用yong，使shi其qi生sheng命ming活huo動dong降jiang低di到dao極ji低di的de程cheng度du或huo處chu於yu休xiu眠mian狀zhuang態tai，從cong而er延yan長chang菌jun種zhong生sheng命ming以yi及ji使shi菌jun種zhong保bao持chi原yuan有you的de性xing狀zhuang，防fang止zhi變bian異yi。
二、 菌種保藏的方法
試管斜麵菌種係列保存方法
1、低溫定期移植保藏法
將需要保藏的菌種接種在適宜的斜麵培養基上，適溫培養，當菌絲健壯地長滿斜麵時取出，放在3~5℃低溫幹燥處或4℃冰箱中保藏，每隔3~6個月移植轉管1次(ci)，具(ju)體(ti)應(ying)根(gen)據(ju)菌(jun)種(zhong)特(te)性(xing)決(jue)定(ding)。保(bao)藏(zang)時(shi)要(yao)注(zhu)意(yi)環(huan)境(jing)濕(shi)度(du)不(bu)能(neng)太(tai)高(gao)，以(yi)防(fang)黴(mei)菌(jun)通(tong)過(guo)棉(mian)塞(sai)進(jin)入(ru)管(guan)內(nei)。因(yin)此(ci)，若(ruo)用(yong)棉(mian)塞(sai)，可(ke)用(yong)幹(gan)淨(jing)的(de)塑(su)料(liao)薄(bo)膜(mo)或(huo)牛(niu)皮(pi)紙(zhi)包(bao)紮(zha)棉(mian)塞(sai)，也(ye)可(ke)用(yong)無(wu)菌(jun)的(de)白(bai)膠(jiao)塞(sai)，並(bing)用(yong)石(shi)蠟(la)塗(tu)封(feng)，即(ji)可(ke)減(jian)少(shao)汙(wu)染(ran)的(de)機(ji)會(hui)，也(ye)可(ke)防(fang)止(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)幹(gan)燥(zao)。除(chu)草(cao)菇(gu)外(wai)，大(da)多(duo)食(shi)用(yong)菌(jun)菌(jun)種(zhong)都(dou)能(neng)采(cai)用(yong)此(ci)法(fa)保(bao)藏(zang)。
2、液體石蠟保藏法
取化學純液體石蠟裝於三角瓶中高壓滅菌後，放入40℃恒溫箱中，蒸發其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜麵上，28～30℃下培養2～3d，證明無雜菌生長方可使用。然後將母種接在斜麵培養基上，當菌絲在斜麵上生長豐滿後，將液體石蠟注在斜麵上，注入量以高出斜麵1cm為wei宜yi，使shi菌jun種zhong與yu空kong氣qi隔ge絕jue，降jiang低di其qi新xin陳chen代dai謝xie能neng力li。管guan口kou用yong滅mie過guo菌jun的de白bai膠jiao塞sai塞sai緊jin，並bing用yong石shi蠟la塗tu封feng，直zhi立li放fang在zai室shi內nei幹gan燥zao處chu或huo冰bing箱xiang內nei保bao藏zang。一yi般ban可ke保bao存cun1年(nian)以(yi)上(shang)，在(zai)低(di)溫(wen)下(xia)保(bao)藏(zang)時(shi)間(jian)還(hai)可(ke)延(yan)長(chang)。使(shi)用(yong)時(shi)從(cong)斜(xie)麵(mian)上(shang)挑(tiao)取(qu)菌(jun)絲(si)少(shao)許(xu)，移(yi)接(jie)到(dao)新(xin)鮮(xian)斜(xie)麵(mian)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)，經(jing)培(pei)養(yang)即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)菌(jun)絲(si)體(ti)沾(zhan)有(you)液(ye)體(ti)石(shi)蠟(la)而(er)影(ying)響(xiang)其(qi)生(sheng)長(chang)，需(xu)再(zai)經(jing)1次移接才能恢複正常生長。
3、白膠塞封口保存法
選擇與試管口徑相符的白膠塞，用0.2%煤酚皂溶液洗滌，浸泡在酒精內待用。當試管斜麵長滿菌絲後，在無菌條件下拔去棉塞，取浸泡的白膠塞1個，通過火焰迅速塞入試管口內，並用石蠟熔封。此法能達到與石蠟油封存相似的效果。用該法保存菌種可存活1～3年，但以每年移植1次為好。
4、蒸餾水保藏法
將8成熟試管菌種放在接種箱內，注入蒸餾水，將培養基斜麵全部淹沒至管口2cm。管口用白膠塞塞緊，並用石蠟塗封，常溫下置於陰涼處立放，可以保藏1年左右。
非斜麵固體菌種係列保存法
1、麥麩保藏法
將麥麩和水按0.80∶1充(chong)分(fen)拌(ban)勻(yun)後(hou)，裝(zhuang)入(ru)試(shi)管(guan)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)，經(jing)無(wu)菌(jun)檢(jian)查(zha)合(he)格(ge)後(hou)接(jie)種(zhong)，適(shi)溫(wen)下(xia)培(pei)養(yang)至(zhi)菌(jun)絲(si)體(ti)發(fa)育(yu)好(hao)後(hou)，將(jiang)試(shi)管(guan)放(fang)入(ru)真(zhen)空(kong)幹(gan)燥(zao)器(qi)內(nei)，用(yong)真(zhen)空(kong)泵(beng)將(jiang)麥(mai)麩(fu)培(pei)養(yang)基(ji)內(nei)水(shui)分(fen)抽(chou)幹(gan)，然(ran)後(hou)移(yi)入(ru)盛(sheng)有(you)矽(gui)膠(jiao)的(de)幹(gan)燥(zao)器(qi)內(nei)，用(yong)凡(fan)士(shi)林(lin)密(mi)封(feng)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)保(bao)存(cun)，可(ke)保(bao)藏(zang)3～5年。
2、麥粒保藏法
取優質小麥，淘洗後浸入20℃水中5h，撈出稍晾幹，裝入試管，占管深1/3，高壓滅菌後趁熱搖散，冷卻後接入菌絲體，適溫培養至菌絲長滿基質後用石蠟封棉塞，置於冰箱或20℃以下幹燥處，可保藏1～2年。
3、木屑保藏法
將闊葉樹木屑78％、麥麩20％、蔗糖1％、石膏粉1％，混合後加水拌勻，裝入試管滅菌後，接入斜麵菌種，在適溫下培養，待菌絲長至試管2/3時用石蠟封棉塞，置低溫或常溫下保藏，一般可保藏1~ 2年。
4、稻草粉保存草菇菌種
草菇斜麵菌種在2～4℃下保存2d便失去生活力，室溫下保存又因斜麵培養基失水太快影響菌種存活。用稻草粉保存草菇菌種有其獨特的優越性。其配方為稻草粉75%、麥麩22%、石膏粉1%、碳酸鈣1%、蔗糖1%、適量的水拌勻調濕。裝入試管高壓滅菌後按常規接種培養，當菌絲長到試管2/3時，管口棉塞用石蠟熔封。常溫下保存至次年，不影響其活力和種性。
液體係列菌種保存法
1、生理鹽水保藏法
將待保藏的菌種接入馬鈴薯培養液中，在250mL三角形瓶中裝60mL培養液，振蕩培養或每天搖動5～10次，培養5～7d，然後將形成的菌絲球用無菌吸管吸入裝有５mL無菌生理鹽水試管中，每管移入4～5個菌絲球，塞上無菌白膠塞，用石蠟塗封，置低溫下可保藏1～2年。
2、營養液保存法
營養液的配方為馬鈴薯汁20%、葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.3%、硫酸鎂0.15%、硫酸銨微量。每支試管內裝5mL，滅菌後用無菌吸管吸取生理鹽水保藏法深層培養的菌絲球4～5個於試管中，10~25℃的室溫下保存，可存活2～3年，其保存效果優於生理鹽水保存法。不影響菌株形成子實體的能力。
3、無菌水保存法
先將培養好的斜麵菌種切成小塊，連同培養基移入盛有適量無菌蒸餾水的試管中，然後用白膠塞封口，在20℃左右的室溫下保存。可存活1～2年。也可用磷酸緩衝液做保存液，其緩衝液的pH值視各保存菌株生長的酸堿度而定。該法操作簡便易行。
利用孢子保存菌種係列方法
1、濾紙片保藏法
取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）濾紙，剪成4.0cm×0.8cm的(de)小(xiao)紙(zhi)條(tiao)，平(ping)鋪(pu)在(zai)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)用(yong)紙(zhi)包(bao)裹(guo)進(jin)行(xing)滅(mie)菌(jun)。采(cai)用(yong)鉤(gou)懸(xuan)法(fa)收(shou)集(ji)孢(bao)子(zi)，讓(rang)孢(bao)子(zi)落(luo)在(zai)濾(lv)紙(zhi)條(tiao)上(shang)。將(jiang)載(zai)有(you)孢(bao)子(zi)的(de)濾(lv)紙(zhi)條(tiao)放(fang)入(ru)保(bao)藏(zang)試(shi)管(guan)中(zhong)，白(bai)膠(jiao)塞(sai)封(feng)口(kou)，再(zai)將(jiang)保(bao)藏(zang)試(shi)管(guan)放(fang)入(ru)幹(gan)燥(zao)器(qi)中(zhong)1～2d，除去濾紙水分，然後低溫保藏。保存期可達２～10年。
2、沙土管保藏法
取河沙用水浸泡洗滌數次，過60目篩除去粗粒，加用1％稀鹽酸煮沸30min，以除去其中的有機質，再用水衝洗至pH值達到中性，烘幹備用。同時取非耕作層的瘦黃土或紅土，用水反複衝洗至中性，烘幹碾細，過100目篩，將處理好的沙與土以2～4∶1混勻，然後分裝小試管內，每管裝0.5g，高壓滅菌（1.5kg/cm2）3次，再幹熱滅菌（160℃，2h）1次，待無菌檢驗合格後方可使用。將已形成孢子的斜麵菌種，在無菌條件下注入無菌水3mL，刮gua菌jun苔tai，製zhi成cheng菌jun懸xuan液ye，再zai用yong無wu菌jun吸xi管guan吸xi取qu菌jun液ye滴di入ru砂sha土tu管guan中zhong，以yi浸jin透tou砂sha土tu為wei止zhi。將jiang接jie種zhong後hou的de沙sha土tu管guan放fang入ru盛sheng有you幹gan燥zao劑ji的de真zhen空kong幹gan燥zao器qi內nei，接jie上shang真zhen空kong泵beng抽chou氣qi至zhi沙sha土tu幹gan燥zao為wei止zhi。真zhen空kong幹gan燥zao操cao作zuo需xu在zai孢bao子zi接jie入ru後hou48h內完成，以免孢子發芽。製備好的沙土管石蠟封口，在低溫下可保藏2～10年。
此外，還有甘油保藏法、枝條保藏法、超低溫液氮保藏法、冷凍真空幹燥法等。菌種保藏方法雖多，但也各有利弊。其中低溫定期移植保藏法雖然簡單易行，不需特殊設備，但需幾個月轉管1次，轉管的次數多了，變異的可能性就增大，易造成菌種衰退。
近年來人們找到一種目前認為最有效廣譜安全的保藏方法——超低溫液氮保藏法，ATCC 用這種方法保藏雙孢蘑菇，9nianhoujunzhongrengbaochiwending，shimuqianguojishanggongrenweijiaoweilixiangdejunzhongbaozangfangfa。danxuyaoyedanbaozangguanshebei，qieyedanlaiyuanyouxian，feiyonggao，zhiyoushaoshukeyanyuansuoshiyong，wufatuiguang。ciwai，haiyoulengdongzhenkongganzaofa，cifayibankebaocun10年以上，但成本較高。
三、菌種保藏效果的鑒定
常用指標是菌株的存活率和接種物成活率。為確切判斷菌株在保藏後是否發生變異，還須從以下4個方麵進行觀察和測定：①生物學特征，如菌絲形態、顏色等；②對基質分解能力，如走菌、吃料速度等；③遺傳特征，如相關酶的酶譜、酶活力等；④生產出菇能力，包括產量、zhiliang。tongguojingchangjianyan，yiquebaobuchuxianrenhetuihuajixiangdejunzhuqudegunongdexinlai。tongguobaozangjunzhongdexiaoguojianding，keyiduibaozangfangfajiayigaishan，shibaozangtixigengjiawanshan。
