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液相色譜對於多數人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經驗豐富的分析員都會習慣於一些錯誤的操作（師傅教錯了？），jingchangdaozhiyixieyiqiguzhang。fangbiankuaijiedefenxiguochengguranzhongyao，danshiweileduozuoyangpinerhulveleyixiebibukeshaodebuzhou，wangwangdebuchangshi，naxiecaozuobunengzuo？naxielanerbunengtou？naxiexiaogailvdeguzhangshifumeijiaozenmeban？yexiangshiyongguochengzhongyounasidaguanjianyinsuyaozhuyi？benwenyiyigaosunio！
一、流動相不過濾
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
二、使用後沒有及時清洗泵
liudongxiangbuyinghanyourenhefushixingwuzhi，hanyouhuanchongyedeliudongxiangbuyingbaoliuzaibengnei，youqishizaitingbengguoyehuogengchangshijiandeqingkuangxia。ruguojianghanhuanchongyedeliudongxiangliuzaibengnei，youyuzhengfahuoxielou，shenzhizhishiyouyurongyedejingzhi，jiukenengxichuyandeweixijingti，zhexiejingtijiangheshangshugutiweiliyiyangsunhuaimifenghuanhezhusaideng。yinci，bixubengruchunshuijiangbengchongfenqingxihou，zaihuanchengshiheyusepuzhubaocunheyouliyubengweihuderongji（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
三、流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦？
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
四、壓力和流量不穩了？
原因可能是氣泡，需要排除；或huo者zhe是shi單dan向xiang閥fa內nei有you異yi物wu，可ke卸xie下xia單dan向xiang閥fa，浸jin入ru丙bing酮tong內nei超chao聲sheng清qing洗xi。有you時shi可ke能neng是shi砂sha濾lv棒bang內nei有you氣qi泡pao，或huo被bei鹽yan的de微wei細xi晶jing粒li或huo滋zi生sheng的de微wei生sheng物wu部bu分fen堵du塞sai，這zhe時shi，可ke卸xie下xia砂sha濾lv棒bang浸jin入ru流liu動dong相xiang內nei超chao聲sheng除chu氣qi泡pao，或huo將jiang砂sha濾lv棒bang浸jin入ru稀xi酸suan（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視。
PS：在zai液ye相xiang色se譜pu中zhong對dui組zu分fen複fu雜za的de樣yang品pin采cai用yong梯ti度du洗xi脫tuo的de方fang法fa。在zai同tong一yi個ge分fen析xi周zhou期qi中zhong，按an一yi定ding程cheng序xu不bu斷duan改gai變bian流liu動dong相xiang的de濃nong度du配pei比bi，稱cheng為wei梯ti度du洗xi脫tuo。從cong而er可ke以yi使shi一yi個ge複fu雜za樣yang品pin中zhong的de性xing質zhi差cha異yi較jiao大da的de組zu分fen能neng按an各ge自zi適shi宜yi的de容rong量liang因yin子zik達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
五、梯度洗脫的流動相選擇不當
要yao注zhu意yi溶rong劑ji的de互hu溶rong性xing，不bu相xiang混hun溶rong的de溶rong劑ji不bu能neng用yong作zuo梯ti度du洗xi脫tuo的de流liu動dong相xiang。有you些xie溶rong劑ji在zai一yi定ding比bi例li內nei混hun溶rong，超chao出chu範fan圍wei後hou就jiu不bu互hu溶rong，使shi用yong時shi更geng要yao引yin起qi注zhu意yi。當dang有you機ji溶rong劑ji和he緩huan衝chong液ye混hun合he時shi，還hai可ke能neng析xi出chu鹽yan的de晶jing體ti，尤you其qi使shi用yong磷lin酸suan鹽yan時shi需xu特te別bie小xiao心xin。
六、忽略的空白梯度洗脫
tiduxituosuoyongderongjichunduyaoqiugenggao，yibaozhenglianghaodezhongxianxing。jinxingyangpinfenxiqianbixujinxingkongbaitiduxituo，yibianrenrongjizazhifeng，yinweiruorongjizhongdezazhifujizaisepuzhutouhouhuibeiqiangrongjixituoxialai。yongyutiduxituoderongjixuchedituoqi，yifangzhihunheshichanshengqipao。
七、忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)的(de)粘(zhan)度(du)常(chang)隨(sui)組(zu)成(cheng)而(er)變(bian)化(hua)，因(yin)而(er)在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)常(chang)出(chu)現(xian)壓(ya)力(li)的(de)變(bian)化(hua)。例(li)如(ru)甲(jia)醇(chun)和(he)水(shui)粘(zhan)度(du)都(dou)較(jiao)小(xiao)，當(dang)二(er)者(zhe)以(yi)相(xiang)近(jin)比(bi)例(li)混(hun)合(he)時(shi)粘(zhan)度(du)增(zeng)大(da)很(hen)多(duo)，此(ci)時(shi)的(de)柱(zhu)壓(ya)大(da)約(yue)是(shi)甲(jia)醇(chun)或(huo)水(shui)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)的(de)兩(liang)倍(bei)。因(yin)此(ci)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)壓(ya)力(li)超(chao)過(guo)輸(shu)液(ye)泵(beng)或(huo)色(se)譜(pu)柱(zhu)能(neng)承(cheng)受(shou)的(de)最(zui)大(da)壓(ya)力(li)。
八、關於六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。
九、關於色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
調節流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
反衝色譜柱
一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以(yi)避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相(xiang)被(bei)破(po)壞(huai)。有(you)時(shi)可(ke)以(yi)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)前(qian)麵(mian)連(lian)接(jie)一(yi)預(yu)柱(zhu)，分(fen)析(xi)柱(zhu)是(shi)鍵(jian)合(he)矽(gui)膠(jiao)時(shi)，預(yu)柱(zhu)為(wei)矽(gui)膠(jiao)，可(ke)使(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)在(zai)進(jin)入(ru)分(fen)析(xi)柱(zhu)之(zhi)前(qian)預(yu)先(xian)被(bei)矽(gui)膠(jiao)“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
避bi免mian將jiang基ji質zhi複fu雜za的de樣yang品pin尤you其qi是shi生sheng物wu樣yang品pin直zhi接jie注zhu入ru柱zhu內nei，需xu要yao對dui樣yang品pin進jin行xing預yu處chu理li或huo者zhe在zai進jin樣yang器qi和he色se譜pu柱zhu之zhi間jian連lian接jie一yi保bao護hu柱zhu。保bao護hu柱zhu一yi般ban是shi填tian有you相xiang似si固gu定ding相xiang的de短duan柱zhu。保bao護hu柱zhu可ke以yi而er且qie應ying該gai經jing常chang更geng換huan。
十、【來自前輩的經驗】小概率故障如何排除？
【1】泵壓跳動，跳動範圍10bar左右
解決方法：
1、原先小白頭有點髒，更換後尚未解決；
2、將主動閥上的閥芯取出後，發現有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝後再觀察，仍未解決；
3、更換新的閥芯，將其安裝後，不再有跳動，觀察一段時間後比較平穩，成功解決。
【2】發生故障：
①plug homing over pressure
② 灌注及設流速時均無壓力也不見液體流出
③檢測器光閘不能複位④進完大濃度樣品後，進空白相應位置也出峰。
可能原因：
①在線過濾器堵了
②泵頭下單向閥堵了
③有可能是檢測池髒了，也有可能是光路有點堵，再不行可能是燈壽命到了
④小抹布髒了，需要換
解決方法：
①在線過濾器卸下來，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鍾後甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個消耗品。
②把泵頭下單向閥卸下來，兩個都有可能堵，剛卸下來時豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實驗。
③先用溶劑把檢測池衝衝，用啥試具體樣品而定；若衝了還不行，把檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個幾千），可ke能neng得de清qing洗xi光guang路lu了le。第di一yi次ci清qing洗xi的de話hua建jian議yi還hai是shi叫jiao工gong程cheng師shi來lai，因yin為wei待dai清qing理li的de部bu件jian在zai檢jian測ce器qi的de最zui下xia方fang，有you一yi個ge黑hei色se片pian片pian，中zhong間jian有you一yi條tiao縫feng，而er且qie那na一yi塊kuai的de螺luo絲si都dou是shi八ba角jiao的de，卸xie起qi來lai很hen麻ma煩fan。
④把5個樣品盤都拿出來，可以看見裏麵有一個黑色突起（看不清用手電筒），平時進樣針就是從那個地方吸樣的。手伸進去就可以卸下來，裏麵有一個小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個新的就行了，買儀器時一般配有10個。
液相色譜在使用過程中的四大關鍵因素
1.液相色譜儀本身：
對dui於yu儀yi器qi本ben身shen一yi般ban不bu會hui有you問wen題ti，特te別bie是shi剛gang買mai回hui來lai的de新xin儀yi器qi。對dui於yu儀yi器qi本ben身shen最zui重zhong要yao的de就jiu是shi儀yi器qi的de校xiao驗yan，剛gang買mai回hui來lai的de儀yi器qi一yi般ban都dou是shi由you賣mai家jia先xian對dui儀yi器qi做zuo係xi統tong的de確que認ren工gong作zuo（包括IQ、PQ、OQ），querenshunlitongguohou，zaiqingguojiahuoshengjiyiqijiandingjudelaixiaoyan，jiandinghegehoujiukeyifangxinshiyongle，chucizhiwai，yixiezuodehaodegongsimeibannianhuiduiyiqijinxingyicideneibuxiaoyan，mudejiushiweilebaozhengyiqidezhengchangkeyunxingzhuangtai。
2.色譜條件：
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。
色(se)譜(pu)柱(zhu)會(hui)因(yin)不(bu)同(tong)的(de)品(pin)種(zhong)而(er)有(you)不(bu)同(tong)的(de)要(yao)求(qiu)，但(dan)每(mei)根(gen)色(se)譜(pu)柱(zhu)都(dou)有(you)它(ta)的(de)清(qing)洗(xi)要(yao)求(qiu)，這(zhe)個(ge)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)說(shuo)明(ming)書(shu)上(shang)都(dou)可(ke)以(yi)找(zhao)到(dao)，一(yi)定(ding)要(yao)根(gen)據(ju)上(shang)麵(mian)的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)，否(fou)則(ze)會(hui)造(zao)成(cheng)色(se)譜(pu)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)縮(suo)短(duan)，檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)也(ye)會(hui)因(yin)品(pin)種(zhong)的(de)不(bu)同(tong)有(you)不(bu)同(tong)的(de)要(yao)求(qiu)，這(zhe)裏(li)需(xu)要(yao)指(zhi)出(chu)的(de)是(shi)要(yao)注(zhu)意(yi)觀(guan)察(cha)檢(jian)測(ce)器(qi)氘(dao)燈(deng)能(neng)量(liang)的(de)變(bian)化(hua)，比(bi)如(ru)基(ji)線(xian)波(bo)動(dong)大(da)，活(huo)性(xing)成(cheng)分(fen)的(de)響(xiang)應(ying)值(zhi)突(tu)然(ran)變(bian)小(xiao)等(deng)，都(dou)有(you)可(ke)能(neng)是(shi)氘(dao)燈(deng)的(de)能(neng)量(liang)不(bu)足(zu)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)，氘(dao)燈(deng)一(yi)般(ban)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong)800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人(ren)員(yuan)，但(dan)是(shi)作(zuo)為(wei)研(yan)發(fa)人(ren)員(yuan)，有(you)時(shi)為(wei)了(le)摸(mo)索(suo)條(tiao)件(jian)或(huo)進(jin)行(xing)方(fang)法(fa)耐(nai)用(yong)性(xing)驗(yan)證(zheng)，會(hui)對(dui)流(liu)速(su)進(jin)行(xing)改(gai)變(bian)以(yi)評(ping)價(jia)方(fang)法(fa)的(de)適(shi)用(yong)性(xing)。對(dui)於(yu)進(jin)樣(yang)量(liang)因(yin)不(bu)同(tong)的(de)品(pin)種(zhong)也(ye)有(you)不(bu)同(tong)規(gui)定(ding)，進(jin)樣(yang)量(liang)這(zhe)塊(kuai)現(xian)在(zai)都(dou)使(shi)用(yong)自(zi)動(dong)進(jin)樣(yang)，所(suo)以(yi)進(jin)樣(yang)精(jing)密(mi)度(du)都(dou)很(hen)好(hao)，不(bu)需(xu)強(qiang)調(tiao)什(shen)麼(me)。
3.操作人員：
首shou先xian，作zuo為wei液ye相xiang操cao作zuo人ren員yuan，一yi定ding要yao認ren真zhen學xue習xi夜ye想xiang的de說shuo明ming書shu，掌zhang握wo液ye相xiang硬ying件jian和he軟ruan件jian的de操cao作zuo，掌zhang握wo日ri常chang的de維wei護hu保bao養yang，掌zhang握wo最zui基ji礎chu故gu障zhang的de排pai除chu和he維wei修xiu。一yi般ban液ye相xiang的de操cao作zuo規gui程cheng也ye是shi有you操cao作zuo人ren員yuan起qi草cao的de，所suo以yi隻zhi要yao嚴yan格ge按an照zhao操cao作zuo要yao求qiu進jin行xing操cao作zuo，一yi般ban不bu會hui出chu現xian問wen題ti，當dang然ran啫啫喱li需xu要yao特te別bie指zhi出chu的de是shi對dui於yu液ye相xiang的de日ri常chang維wei護hu保bao養yang很hen重zhong要yao，比bi如ru流liu動dong相xiang的de過guo濾lv、脫氣、泵密封墊的清洗、係統管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色(se)譜(pu)峰(feng)異(yi)常(chang)等(deng)不(bu)必(bi)要(yao)的(de)故(gu)障(zhang)，浪(lang)費(fei)時(shi)間(jian)。其(qi)次(ci)，操(cao)作(zuo)人(ren)員(yuan)在(zai)配(pei)製(zhi)液(ye)相(xiang)分(fen)析(xi)用(yong)樣(yang)品(pin)溶(rong)液(ye)時(shi)，最(zui)好(hao)由(you)同(tong)一(yi)個(ge)人(ren)單(dan)獨(du)完(wan)成(cheng)，以(yi)免(mian)不(bu)必(bi)要(yao)的(de)偶(ou)然(ran)誤(wu)差(cha)。
4.液相安裝環境：
液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、電dian磁ci幹gan擾rao的de屋wu內nei的de台tai麵mian上shang，有you條tiao件jian的de話hua盡jin量liang將jiang液ye相xiang數shu據ju處chu理li係xi統tong分fen隔ge開kai，一yi個ge是shi防fang止zhi色se譜pu基ji線xian噪zao音yin偏pian大da，基ji線xian不bu穩wen等deng，一yi個ge是shi為wei減jian少shao對dui人ren體ti的de危wei害hai。
文章（文字）來源：液相色譜之家。
