1.樣品的前處理:製備色譜柱子由於處理的樣品多,比分析柱子更容易受汙染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質。
2.色譜柱的選擇:各ge種zhong規gui格ge的de玻bo璃li柱zhu子zi在zai實shi驗yan室shi裏li頭tou很hen容rong易yi得de到dao,而er且qie價jia格ge低di廉lian,但dan玻bo璃li柱zhu子zi致zhi命ming的de弱ruo點dian是shi它ta能neng承cheng受shou的de壓ya力li很hen小xiao,且qie非fei常chang容rong易yi破po碎sui。當dang由you於yu壓ya力li太tai小xiao而er導dao致zhi流liu動dong相xiang流liu速su很hen慢man的de時shi候hou,高gao位wei液ye麵mian或huo加jia高gao壓ya空kong氣qi(或者氮氣)的采用是一個簡單的解決辦法。在底下加真空,也能在一定程度上解決這個問題。不鏽鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能,但其價格相對很貴。如果,隻有很小的分離任務且經費也允許,市麵上直徑為1cm的(de)小(xiao)型(xing)製(zhi)備(bei)柱(zhu)就(jiu)是(shi)首(shou)選(xuan)。有(you)機(ji)玻(bo)璃(li)柱(zhu)子(zi)也(ye)能(neng)抗(kang)壓(ya)力(li)耐(nai)腐(fu)蝕(shi),相(xiang)對(dui)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)柱(zhu)子(zi)而(er)言(yan),它(ta)是(shi)半(ban)透(tou)明(ming)的(de),可(ke)以(yi)看(kan)到(dao)液(ye)體(ti)的(de)運(yun)行(xing)狀(zhuang)態(tai),對(dui)有(you)色(se)的(de)物(wu)質(zhi)其(qi)特(te)點(dian)就(jiu)更(geng)為(wei)突(tu)出(chu)。
3.固定相的選擇:矽膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻報道,對填料可以進行一下處理提高了分離效果,如,對矽膠進行的硝酸銀(或緩衝液)處理。
4.裝柱方法的選擇:根gen據ju固gu定ding相xiang顆ke粒li度du和he柱zhu子zi的de尺chi寸cun,采cai用yong不bu同tong的de裝zhuang柱zhu方fang法fa,往wang往wang裝zhuang填tian越yue好hao分fen離li效xiao果guo越yue好hao。裝zhuang柱zhu效xiao果guo跟gen填tian料liao的de顆ke粒li度du關guan係xi很hen大da,顆ke粒li度du的de減jian少shao會hui導dao致zhi裝zhuang柱zhu的de難nan度du。一yi般ban來lai說shuo,顆ke粒li直zhi徑jing小xiao於yu20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂"敲擊-裝填"技術適用於顆粒直徑大於25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀鬆的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。然而,當柱直徑大於20mm,所加壓力為30-40bar時(shi),高(gao)壓(ya)懸(xuan)漿(jiang)裝(zhuang)填(tian)技(ji)術(shu)就(jiu)變(bian)得(de)十(shi)分(fen)複(fu)雜(za)。為(wei)將(jiang)小(xiao)顆(ke)粒(li)固(gu)定(ding)相(xiang)裝(zhuang)入(ru)更(geng)大(da)得(de)製(zhi)備(bei)型(xing)色(se)譜(pu)柱(zhu),可(ke)采(cai)用(yong)柱(zhu)長(chang)壓(ya)縮(suo)技(ji)術(shu)。這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa),先(xian)將(jiang)固(gu)定(ding)相(xiang)懸(xuan)漿(jiang)(或偶爾是幹填充物)裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設備,在柱子填完後,應用有柱效的測量,對柱效低的柱子應該重填。
5.流動相的選擇:除chu了le和he分fen析xi色se譜pu同tong樣yang的de考kao慮lv外wai,在zai選xuan用yong流liu動dong相xiang時shi,要yao考kao慮lv色se譜pu分fen離li後hou麵mian加jia有you旋xuan轉zhuan蒸zheng發fa等deng二er次ci分fen離li操cao作zuo。一yi般ban來lai說shuo,不bu宜yi采cai用yong高gao毒du性xing溶rong劑ji,對dui多duo元yuan溶rong劑ji要yao盡jin可ke能neng的de少shao用yong。
6.加樣的方法:可以采用以下方法之一進樣。-用注射器進樣-用旋轉閥進樣-通過六通閥進樣-通過主泵進樣-通過輔泵進樣-固體上樣。
7.泵的選用:生產製備色譜泵的廠商很多。根據有無脈衝、能承受的最大壓力、控製的精度、售後服務等來選擇泵。
8.檢測器的選用:一般的分析池的最大允許流速僅為5 mL/min 或者10mL/min。而專門的製備池的最大允許流速可為150mL/min。有時,采用旁路分離管,將少量流體導入分析池進行檢測,是一個不錯的辦法,但其濃度的誤差會相對較大。
9.組分保留時間的估計:用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間後,按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定,通過計算可以知道組分的大致保留時間區域。
10.產品的收集:手工餾分收集費時費力,自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。
手機版


