由於HPLC係統中氣泡的存在
，會造成色譜圖上出現尖銳的噪聲峰
，嚴重時會造成分析靈敏度下降
；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定
，使基線起伏。造成上述現象的主要原因有三條：一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡
；二是係統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕幹淨
；三是在注入樣品時不注意混入了空氣。

為了避免這類問題的出現
，HPLC實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理
；在HPLC係統開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動相
，將流路中的空氣驅趕幹淨
；在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。

在操作HPLC時(shi)，色(se)譜(pu)柱(zhu)是(shi)在(zai)室(shi)溫(wen)環(huan)境(jing)下(xia)工(gong)作(zuo)的(de)。大(da)多(duo)數(shu)的(de)工(gong)作(zuo)環(huan)境(jing)溫(wen)度(du)是(shi)不(bu)斷(duan)變(bian)化(hua)的(de)，溫(wen)度(du)的(de)差(cha)別(bie)就(jiu)會(hui)引(yin)起(qi)較(jiao)複(fu)雜(za)的(de)問(wen)題(ti)。溫(wen)度(du)的(de)影(ying)響(xiang)在(zai)所(suo)有(you)的(de)色(se)譜(pu)分(fen)析(xi)方(fang)式(shi)中(zhong)都(dou)是(shi)存(cun)在(zai)的(de)
，HPLC方法中的洗脫方式受溫度的影響。

等度洗脫時溫度會影響保留時間，當溫度升高時所有的色譜峰都前移了
，等度洗脫時一般溫度每升高１℃，保留時間會縮短(1~3)％。wendubianhuaduitiduxituohedengduxituodeyingxiangqushishiyiyangde。wendubianhuaduitiduxituodeyingxiangyaoxiaoyuduidengduxituodeyingxiang。jibianruci
，ruotiduxituoshibukongzhiwendudehua，baoliuzhiyibanyehuiyoujiaodadebianhua。wendubianhuahaikenengyinqixuanzexingxianzhubianhua。

正(zheng)如(ru)柱(zhu)子(zi)不(bu)能(neng)完(wan)全(quan)平(ping)衡(heng)將(jiang)導(dao)致(zhi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)差(cha)一(yi)樣(yang)，柱(zhu)溫(wen)不(bu)平(ping)衡(heng)也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)不(bu)理(li)想(xiang)的(de)後(hou)果(guo)，這(zhe)個(ge)問(wen)題(ti)在(zai)峰(feng)寬(kuan)上(shang)的(de)影(ying)響(xiang)尤(you)其(qi)明(ming)顯(xian)。當(dang)溫(wen)度(du)變(bian)化(hua)時(shi)除(chu)了(le)選(xuan)擇(ze)性(xing)和(he)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)的(de)變(bian)化(hua)之(zhi)外(wai)，峰(feng)寬(kuan)也(ye)會(hui)發(fa)生(sheng)變(bian)化(hua)。升(sheng)高(gao)溫(wen)度(du)通(tong)常(chang)會(hui)使(shi)理(li)論(lun)塔(ta)板(ban)數(shu)升(sheng)高(gao)
，峰(feng)寬(kuan)變(bian)窄(zhai)
，由(you)於(yu)峰(feng)麵(mian)積(ji)不(bu)變(bian)
，峰(feng)越(yue)窄(zhai)就(jiu)會(hui)越(yue)高(gao)，因(yin)此(ci)升(sheng)高(gao)溫(wen)度(du)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)更(geng)小(xiao)的(de)檢(jian)測(ce)限(xian)。

柱子裏的溫度變化也會影響峰形。當流動相和柱子之間的溫差增大時

，由溫度不平衡而導致的峰變形就會加劇。 

weilehuodeyizhidejieguowomenbixuyaokongzhizhuwen，shiyongzhuwenxiangshizuihaodebanfa。ruguomeiyouzhuwenxiang，zuiyouxiaodebanfajiushijiangsepuzhugejuezaiyigewendubodongzuixiaodedifang。

色譜柱汙染會引起保留時間漂移。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾並吸附流動相攜帶的任何物質。汙染源可能是：流動相本身
，流動相容器，連接管、泵
、進樣器和儀器密封墊，以及樣品等。

樣(yang)品(pin)中(zhong)如(ru)果(guo)存(cun)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)上(shang)保(bao)留(liu)很(hen)強(qiang)的(de)組(zu)分(fen)，就(jiu)可(ke)能(neng)使(shi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)漂(piao)移(yi)。通(tong)常(chang)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)強(qiang)保(bao)留(liu)組(zu)分(fen)具(ju)有(you)較(jiao)高(gao)的(de)分(fen)子(zi)量(liang)，在(zai)此(ci)情(qing)況(kuang)下(xia)，保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)漂(piao)移(yi)的(de)同(tong)時(shi)或(huo)其(qi)後(hou)會(hui)有(you)反(fan)壓(ya)的(de)增(zeng)加(jia)。可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)使(shi)用(yong)固(gu)相(xiang)提(ti)取(qu)等(deng)樣(yang)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)方(fang)法(fa)來(lai)去(qu)除(chu)樣(yang)品(pin)基(ji)質(zhi)的(de)影(ying)響(xiang)。

避bi免mian色se譜pu柱zhu汙wu染ran最zui簡jian單dan的de方fang法fa是shi防fang患huan於yu未wei然ran。相xiang比bi之zhi下xia，找zhao到dao問wen題ti的de所suo在zai並bing設she計ji有you效xiao的de清qing洗xi步bu驟zhou以yi去qu除chu汙wu染ran物wu要yao困kun難nan的de多duo。通tong常chang使shi用yong在zai給gei定ding色se譜pu條tiao件jian下xia的de強qiang溶rong劑ji，但dan並bing非fei所suo有you汙wu染ran物wu都dou可ke以yi在zai流liu動dong相xiang中zhong溶rong解jie。

使用保護柱是個非常有效的方法。反衝色譜柱僅是不得已時采用的辦法。

如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10~20個柱體積的流動相。但如果在流動相中加入少量添加劑則需要相當長的時間來平衡色譜柱。需要柱子的充分平衡，然後才能對HPLC進行檢定。

HPLC分析總要求使用HPLC純的試劑，關鍵是兩點：純度高
、紫外吸收小。純度高
，是希望沒有雜質幹擾HPLC分析
；不會有金屬離子損害純度為99.99%以上的高純度矽膠基質。可以通過重蒸分析純溶劑
；或濾膜過濾，並定期把前置的過濾頭取下，放稀硝酸裏清洗，再用純水洗至中性。

流動相有機溶劑可能影響HPLC的檢測限。

柱壓過高是HPLCfenxizhongchangpengdaodewenti。qiyuanyinyouduofangmian，erqiechangchangbingbushizhuzibenshendewenti。rongjihuoyangpinhanyoukelizazhi，zhexiezazhijiangshaibandusaiyinqiyalishangsheng，yinggenghuanzhuzirukoushaiban
；泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；比例閥失效
，應更換比例閥；泵密封墊損壞，應更換密封墊
；係統檢漏，則找出漏點，密封即可。

HPLCfenxizhong
，zaisepuzhuzhengchang，yangpinlingminduzugou
，fenxifangfaheshi，sepufengzaichufengshijianjiaoduandetiaojianxia，fengxingyingduichengerjianrui。chongfenkaolvdaokenengyingxiangfenxijieguodeyinsu
，keyikexuedijinxingyexiangsepuyidejianding。