1、明確亞硝酸鹽的測定與控製成品質量的關係。

    2、明確與掌握鹽酸萘乙二胺法的基本原理與操作方法。

    二

、原理：

    樣(yang)品(pin)經(jing)沉(chen)澱(dian)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，除(chu)去(qu)脂(zhi)肪(fang)後(hou)，在(zai)弱(ruo)酸(suan)條(tiao)件(jian)下(xia)硝(xiao)酸(suan)鹽(yan)與(yu)對(dui)氨(an)基(ji)苯(ben)磺(huang)酸(suan)重(zhong)氮(dan)化(hua)後(hou)，生(sheng)成(cheng)的(de)重(zhong)氮(dan)化(hua)合(he)物(wu)，再(zai)與(yu)萘(nai)基(ji)鹽(yan)酸(suan)二(er)氨(an)乙(yi)烯(xi)偶(ou)聯(lian)成(cheng)紫(zi)紅(hong)色(se)的(de)重(zhong)氮(dan)染(ran)料(liao)，產(chan)生(sheng)的(de)顏(yan)色(se)深(shen)淺(qian)與(yu)亞(ya)硝(xiao)酸(suan)根(gen)含(han)量(liang)成(cheng)正(zheng)比(bi)


，可(ke)以(yi)比(bi)色(se)測(ce)定(ding)。反(fan)應(ying)式(shi)如(ru)下(xia)：

三、試劑與儀器

1、亞鐵氰化鉀溶液：稱取106克亞鐵氰化鉀[K₄Fe₉(CN)₅.3H₂O]
，溶於水後，稀釋至1000毫升。

    2、乙酸鋅溶液：稱取220克乙酸鋅[Zn(CH₂C00)₂·2H₂0]
，加30毫升冰乙酸溶於水，並稀釋至1000毫升。

    3、飽和硼砂溶液：稱取5克硼酸鈉(Na₂B0₇·10H₂0)
，溶於100毫升熱水中，冷卻後備用。

    4、0.4％對氨基苯磺酸溶液：稱取0.4克對氨基苯磺酸
，溶於100毫升20％的鹽酸中，避光保存。

    5、0.2％鹽酸萘乙二胺溶液：稱取0.2克鹽酸萘乙二胺，溶於100毫升水中，避光保存。

    6
、亞硝酸鈉標準溶液：精密稱取0.1000克於矽膠幹燥器中幹燥24小時的亞硝酸鈉
，加水溶解移入500毫升容量瓶中
，並稀釋至刻度。此溶液每毫升相當於200微克亞硝酸鈉。

    7、亞硝酸鈉標準使用液：臨用前
，吸取亞硝酸鈉標準溶液5.00毫升，置於200毫升容量瓶中

，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當於5微克亞硝酸鈉。

    8，小型絞肉機。

    9、分光光度計。

    四
、操作方法：

    1、樣品處理：稱取5.0克經絞碎混勻的樣品，置於50毫升燒杯中，加工2.5毫升飽和溶液，攪拌均勻
，以70℃左右的水約30毫升將樣品全部洗入500毫升容量瓶中，置沸水浴中加熱15分鍾，取出後冷至室溫，然後一麵轉動一麵加入5毫升亞鐵氰化鉀溶液
，搖勻
，再加入5毫升乙酸鋅溶液以沉澱蛋白質，加水至刻度
，混勻，放置0.5小時
，除去上層脂肪，清液用濾紙過濾棄去初濾液30毫升，濾液備用。

    2、測定

    吸取40毫升上述濾液於50毫升比色管中
，另吸取0.00、0.20


、0．40、0．60、0.80
、1.00、1.50、2.00
、2.50毫升亞硝酸鈉標準使用液(相當於0、1、2、3、5、7、10
、12.5微克亞硝酸鈉)，分別置於50毫升比色管中，於標準與樣品管中分別加入2毫升0.4％對氨基苯磺酸溶液，混勻
，靜置3-5分鍾後各加入1毫升0.2％鹽酸萘乙二胺溶液，加水至刻度
，混勻，靜置15分鍾，用2厘米比色杯，以零管調節零點


，於波長538nm處測吸光度
，繪製標準曲線比較。

計算：  X=(A×1000)/(m×40/500×1000×1000)

X：樣品中亞硝酸鹽的含量
，g／kg
；

m：樣品質量，g
；

A：測定用樣液中亞硝酸鹽的含量，ug．