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一、稱取 用精度度0.01的de電dian子zi天tian平ping稱cheng取qu培pei養yang基ji所suo需xu藥yao品pin。先xian根gen據ju配pei方fang計ji算suan出chu配pei製zhi一yi定ding量liang培pei養yang基ji所suo需xu各ge種zhong成cheng分fen藥yao品pin的de量liang，然ran後hou用yong天tian平ping準zhun確que稱cheng取qu。稱cheng量liang時shi用yong稱cheng量liang紙zhi折zhe疊die成cheng簸bo箕ji狀zhuang盛sheng放fang藥yao品pin。稱cheng量liang紙zhi折zhe疊die方fang法fa如ru圖tu所suo示shi。
二、溶化 培養基放入燒杯或燒瓶中，慢慢加入少量所需水，邊加入邊用玻棒攪拌。如果培養基中不含有瓊脂，培養基不需要加熱;如果含有瓊脂，則需要用電爐或者電熱板等加熱煮沸，完全溶解後，再補齊所需水，並攪拌均勻(如圖3所示)。如(ru)果(guo)配(pei)製(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)量(liang)很(hen)大(da)，可(ke)用(yong)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)鍋(guo)加(jia)熱(re)溶(rong)化(hua)，可(ke)先(xian)用(yong)溫(wen)水(shui)加(jia)熱(re)並(bing)隨(sui)時(shi)攪(jiao)動(dong)，防(fang)止(zhi)焦(jiao)化(hua)，如(ru)有(you)焦(jiao)化(hua)現(xian)象(xiang)，配(pei)製(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)就(jiu)不(bu)能(neng)使(shi)用(yong)，要(yao)重(zhong)新(xin)配(pei)製(zhi)。
配製培養基時不可用銅或鐵的容器溶化，因銅或鐵製容器可能會使培養基中的銅和鐵的含量超標，影響實驗(培養基中銅含量大於0.3mg/L，細菌不宜生長，鐵含量超過0.14mg/L，妨礙細菌產毒素)。對容易發生反應，產生沉澱的藥品，要分開溶解，後加入培養基，如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。 三、調pH 雖然培養基中含有緩衝物質成分，能使培養基的pH盡可能的保持在要求的範圍內，但是配出的培養基若不符合要求，就要進行必要的調整。如果有已校準pH計，可用pH計，如果沒有，可用精密的pH試紙，再根據需要用1 mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸(微調可用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸)調製所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調整的需要高壓滅菌的培養基，在調整pH時要調至高出所需0.1個～0.2個單位，因用氫氧化鈉調整時，高壓滅菌後，培養基的pH要降低0.1~0.2。如培養基中含有碳酸鈣成分，可不pH。 四、過濾 配成的培養基，若無特殊要求，可省略此步。若有沉澱或渾濁.需要澄清的.液ye體ti培pei養yang基ji可ke用yong油you紙zhi過guo濾lv。而er固gu體ti培pei養yang基ji可ke用yong中zhong間jian夾jia一yi薄bo層ceng脫tuo脂zhi棉mian的de雙shuang層ceng紗sha布bu過guo濾lv。如ru果guo過guo濾lv法fa還hai不bu能neng達da到dao澄cheng清qing的de要yao求qiu，則ze可ke用yong蛋dan清qing澄cheng清qing法fa，即ji培pei養yang基ji加jia熱re冷leng卻que到dao50~60℃，裝入三角瓶內(不超過容量的二分之一)，按1000mL加人1個～2個雞蛋的蛋清，用力搖晃3-5min，高壓蒸汽滅菌121℃、20min，取出趁熱過濾即可。 五、分裝 配製好的培養基根據不同的用途分裝在三角瓶、試shi管guan等deng容rong器qi中zhong，分fen裝zhuang試shi管guan，如ru果guo試shi管guan量liang很hen大da，可ke用yong自zi動dong分fen液ye器qi，如ru果guo試shi管guan量liang少shao，可ke用yong漏lou鬥dou分fen裝zhuang。分fen裝zhuang量liang不bu超chao過guo容rong器qi容rong積ji的de三san分fen之zhi二er。三san角jiao瓶ping以yi不bu超chao過guo容rong積ji的de二er分fen之zhi一yi為wei宜yi;瓊脂斜麵以不超過試管長度的五分之一為宜，滅菌後，擺成的斜麵為培養基量的三分之一，底層為三分之二的量為宜;半固體瓊脂分裝量為試管長度的三分之一;用來接種或保菌的高層瓊脂，分裝量為試管長度的四分之一或三分之一，用來接種厭氧菌的要達到三分之二;瓊脂平板，內徑為90mm的以13mL~15 mL為宜，內徑70mm的平板為8mL~10 mL，製成的瓊脂平板若表麵水分較多，可將平板倒扣，放置在37℃培養箱內30min，幹燥後再用。每批培養基應另外分裝一小玻璃瓶(約20mL)與該批培養基同時滅菌，為測定該批培養基終pH。 六、滅菌 分裝好的培養基應立即進行滅菌。滅菌的方法種類如下： 1. 高壓蒸汽滅菌法 大多耐熱培養基都可用此法，小量分裝時，用121℃，15min;滅菌量大時，用121℃，30min滅菌;含糖類的培養基隻能113~115℃，15min滅菌，避免糖類遭破壞。 2.煮沸滅菌法 對含有不耐高溫物質的培養基，可使用此方法。 3.過濾除菌 以過濾的方法除菌，用無菌操作技術，定量加入培養基。血液、抗生素可用無菌操作技術抽取，加入冷卻到50℃左右的培養基中。培養基含有不耐熱的物質時，可用此法。 對LST培養基進行滅菌時，有時發酵管內會有氣泡。為防止發酵管內產生氣泡，可以采取以下幾項措施： 1. 小倒管浸滿培養基(不留氣泡)後再加入到盛LST的試管中。 2.滅菌鍋關閉放氣閥前，將鍋內氣體排幹淨。 3.試管塞不要塞得太緊(使用矽膠塞的時候)，勿使用橡皮塞。 4不要過早打開滅菌鍋，要等滅菌鍋內氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。 如果以上情況都做到還有氣泡，可用水做培養基組的對照試驗，若培養基組有氣泡，而對照組沒有氣泡可確定是培養基自身的原因。 七、倒平板 滅菌融化的培養基冷卻到50℃後，倒入無菌幹燥的培養皿中。培養基的溫度不能過高，否則容易在培養皿的內蓋上形成太多的冷凝水;溫(wen)度(du)太(tai)低(di)，培(pei)養(yang)基(ji)又(you)容(rong)易(yi)凝(ning)固(gu)成(cheng)塊(kuai)，無(wu)法(fa)製(zhi)成(cheng)平(ping)板(ban)。倒(dao)平(ping)板(ban)時(shi)，應(ying)在(zai)靠(kao)近(jin)酒(jiu)精(jing)燈(deng)火(huo)焰(yan)進(jin)行(xing)，以(yi)免(mian)外(wai)界(jie)的(de)雜(za)菌(jun)落(luo)入(ru)平(ping)板(ban)內(nei)，左(zuo)手(shou)拿(na)培(pei)養(yang)皿(min)，右(you)手(shou)拿(na)三(san)角(jiao)瓶(ping)的(de)底(di)部(bu)，用(yong)左(zuo)手(shou)的(de)小(xiao)指(zhi)和(he)手(shou)掌(zhang)部(bu)位(wei)把(ba)三(san)角(jiao)瓶(ping)的(de)棉(mian)塞(sai)拔(ba)下(xia)，灼(zhuo)燒(shao)瓶(ping)口(kou)，用(yong)大(da)拇(mu)指(zhi)和(he)食(shi)指(zhi)把(ba)培(pei)養(yang)皿(min)蓋(gai)打(da)開(kai)一(yi)條(tiao)縫(feng)，至(zhi)瓶(ping)口(kou)剛(gang)好(hao)伸(shen)入(ru)，倒(dao)入(ru)培(pei)養(yang)基(ji)，以(yi)鋪(pu)滿(man)底(di)為(wei)限(xian)，不(bu)超(chao)過(guo)培(pei)養(yang)皿(min)高(gao)度(du)的(de)三(san)分(fen)之(zhi)一(yi)，迅(xun)速(su)蓋(gai)好(hao)蓋(gai)，放(fang)在(zai)桌(zhuo)麵(mian)上(shang)，輕(qing)輕(qing)地(di)轉(zhuan)動(dong)培(pei)養(yang)皿(min)，使(shi)培(pei)養(yang)基(ji)分(fen)布(bu)均(jun)勻(yun)，冷(leng)凝(ning)後(hou)即(ji)可(ke)。 八、擺斜麵 裝在試管中的瓊脂培養基，在滅菌完成後，趁熱立即擺放在木棒(或玻璃棒)上，並成適當的斜度，冷卻後，瓊脂凝固即成斜麵。斜麵長度不用超過試管二分之一。 九、質量檢查 培養基滅菌後仔細檢查一遍，發現有破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染，都要丟棄，不能再用。並測定其終pH。還需進行無菌檢查和效果檢查。無菌檢查是將滅菌後的培養基取1管(瓶)~2管(瓶)，37℃恒溫培養1d～2d，確定無雜菌生長;效果檢查是用標準菌株接種在相關的培養基上檢查檢查菌的生長、形態及生化情況，與已知情況相符。兩種情況都合格，配製的培養基方可使用。
