要懷著一顆為了出具真實、準確，可信數據而敬畏的心去申請能力驗證。

實驗要求科學嚴謹,實驗要預先充分練習和實踐。能力驗證是對實驗室綜合實驗水平（人員，設備，環境等多因素）的評價。

首shou先xian要yao選xuan好hao實shi驗yan項xiang目mu
，找zhao到dao與yu之zhi配pei套tao的de方fang法fa，進jin行xing充chong分fen的de方fang法fa驗yan證zheng，從cong檢jian測ce員yuan能neng力li
，儀yi器qi設she備bei性xing能neng，校xiao檢jian結jie果guo是shi否fou能neng滿man足zu實shi驗yan需xu要yao，實shi驗yan檢jian測ce多duo次ci實shi驗yan，檢jian測ce環huan境jing是shi否fou進jin行xing了le充chong分fen的de考kao慮lv，實shi驗yan確que認ren好hao實shi驗yan項xiang目mu，認ren真zhen學xue習xi標biao準zhun，理li解jie標biao準zhun
，並bing做zuo到dao標biao準zhun所suo規gui範fan的de步bu驟zhou，並bing對dui自zi己ji實shi驗yan有you了le一yi定ding的de信xin心xin後hou再zai去qu申shen請qing能neng力li驗yan證zheng為wei宜yi。

舉例：某(mou)實(shi)驗(yan)室(shi)未(wei)經(jing)過(guo)充(chong)分(fen)實(shi)驗(yan)方(fang)法(fa)確(que)認(ren)，實(shi)驗(yan)平(ping)時(shi)做(zuo)的(de)也(ye)少(shao)，直(zhi)接(jie)申(shen)請(qing)了(le)能(neng)力(li)驗(yan)證(zheng)。實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)生(sheng)疏(shu)，照(zhao)方(fang)抓(zhua)藥(yao)，手(shou)忙(mang)腳(jiao)亂(luan)，造(zao)成(cheng)稀(xi)釋(shi)梯(ti)度(du)不(bu)夠(gou)，平(ping)板(ban)幹(gan)燥(zao)，菌(jun)落(luo)蔓(man)延(yan)，無(wu)法(fa)出(chu)具(ju)具(ju)體(ti)數(shu)值(zhi)
，實(shi)驗(yan)失(shi)敗(bai)。

二、實驗室收到盲樣菌株標本後，首先應做的事情。

1、檢查標本的性狀和確認包裝情況，然後按照要求去能力驗證網站提交收到樣品情況。

2、仔細閱讀參指導書
，包括標本如何保存的信息
，進行實驗室內部工作分配，明確工作任務和要求。

3、實驗前應嚴格按照作業指導書的要求製訂檢驗流程
，認真做好準備工作，包括實驗中需要使用的器皿
，須提前做好清潔滅菌。

三
、能力驗證樣品處理。

1、定量項目
，西林瓶內樣品不可分割
，應全部用於檢測。一般參考書指導的是加40mL稀釋液製成40mL樣品。

2、定量項目樣品稀釋。指導書標明了稀釋範圍的，在稀釋範圍左右各加1個稀釋度進行；書上沒有稀釋範圍的
，多做稀釋倍數

，選擇合適的稀釋倍數計數（一般可稀釋至10^-8）。

3
、定(ding)量(liang)項(xiang)目(mu)，除(chu)了(le)要(yao)多(duo)做(zuo)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)外(wai)，同(tong)時(shi)同(tong)一(yi)稀(xi)釋(shi)度(du)要(yao)多(duo)倒(dao)幾(ji)皿(min)
，從(cong)原(yuan)理(li)上(shang)來(lai)講(jiang)，檢(jian)測(ce)過(guo)程(cheng)屬(shu)於(yu)隨(sui)機(ji)抽(chou)樣(yang)檢(jian)查(zha)，平(ping)板(ban)越(yue)多(duo)，數(shu)據(ju)越(yue)接(jie)近(jin)真(zhen)值(zhi)。考(kao)慮(lv)性(xing)價(jia)比(bi)，又(you)不(bu)可(ke)能(neng)一(yi)直(zhi)瘋(feng)狂(kuang)一(yi)個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)很(hen)多(duo)平(ping)板(ban)，所(suo)以(yi)能(neng)力(li)驗(yan)證(zheng)時(shi)候(hou)多(duo)倒(dao)幾(ji)皿(min)，求(qiu)好(hao)結(jie)果(guo)。

4、定性項目有一些重要步驟。

a
、增zeng菌jun及ji分fen離li步bu驟zhou尤you其qi重zhong要yao。選xuan擇ze合he適shi的de增zeng菌jun液ye和he分fen離li用yong培pei養yang基ji對dui目mu標biao菌jun的de檢jian出chu非fei常chang關guan鍵jian，選xuan擇ze兩liang種zhong以yi上shang的de增zeng菌jun液ye和he分fen離li用yong培pei養yang基ji對dui菌jun株zhu作zuo直zhi接jie分fen離li和he增zeng菌jun後hou分fen離li。

b、劃線分離十分重要，要把增菌液中的目標菌盡量多的表達出來，要分出單個菌落並盡可能多挑取可疑菌落
，確保分離到目標菌。

c、生化試驗和血清學試驗以營養瓊脂平板上的純培養細菌為好。

四、實驗過程一定要做陰陽對照，全程空白對照。

再厲害的高手也有失手和看走眼的時候，所以陰陽對照就是一麵鏡子。對於一些熒光染色後進行判讀的實驗顯得尤為重要。

這裏掃盲一個誤區，定量計數測菌數時，我們會認為空白就是直接取1mL無(wu)菌(jun)水(shui)然(ran)後(hou)加(jia)入(ru)到(dao)平(ping)板(ban)裏(li)，然(ran)後(hou)混(hun)菌(jun)倒(dao)皿(min)

，這(zhe)是(shi)錯(cuo)誤(wu)的(de)。因(yin)為(wei)這(zhe)樣(yang)做(zuo)的(de)話(hua)

，隻(zhi)能(neng)模(mo)擬(ni)證(zheng)明(ming)稀(xi)釋(shi)後(hou)倒(dao)平(ping)板(ban)這(zhe)一(yi)步(bu)有(you)沒(mei)有(you)汙(wu)染(ran)。而(er)無(wu)法(fa)證(zheng)明(ming)從(cong)樣(yang)品(pin)稱(cheng)取(qu)-樣品稀釋時候的汙染質控情況。所以要做全程空白對照。

全quan程cheng空kong白bai的de含han義yi就jiu是shi把ba無wu菌jun液ye當dang成cheng樣yang品pin，然ran後hou走zou一yi遍bian實shi驗yan過guo程cheng。如ru果guo嚴yan格ge這zhe麼me做zuo的de話hua
，又you會hui走zou向xiang另ling一yi個ge極ji端duan
，所suo以yi全quan程cheng空kong白bai隻zhi從cong取qu樣yang開kai始shi至zhi稀xi釋shi10^-1做了簡化
，而不做後續稀釋空白樣的混菌實驗。

在有些其他實驗時候

，會有樣品空白以及稀釋液空白，比如大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣的可以去看看
，對於全程空白的意義理解有更好的幫助。

五、培養基方麵需要注意的地方。

1、培養基配製充分混勻後再滅菌。

正確做法是用一部分水攪拌均勻後，再加入剩餘水量
，混勻後滅菌或分裝。

2、混菌法倒皿要充分混勻。

培養基倒完要左5圈右5圈（混勻速度一定要慢，目的是――避免培養基波動到二皿接觸的縫隙部分造成後續汙染），找較水平位置冷卻凝固。

3
、培養基要不要覆蓋問題。

覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養基表層通過鞭毛移動
，造成片狀生長，無法計數這一不利現象的發生。這裏可以發揮主觀能動性-對於不運動的菌，可以不覆蓋，對於運動的菌覆蓋。

總結一下：

a長期檢測同一種樣品，不覆蓋並無蔓延現象
，不覆蓋；長期檢測蔓延選擇了覆蓋，一直覆蓋。

b未知樣品，進行覆蓋和不覆蓋的比對實驗
，然後決定以後同樣的樣品是否需要覆蓋。養成經驗。

c能力驗證實驗，覆蓋和不覆蓋的都做，不要吝惜那麼一點點培養基或耗材，畢竟能力驗證實驗做的漂亮才是實驗室（是室而不是人！）能力的綜合體現。

4、培養過程防止平皿幹燥。

培養過程中培養基可以倒的適當厚一些，比如25mL。培養箱底部接一個不鏽鋼盆，裝上足量無菌水（沒有就去買幾瓶哇哈哈怡寶什麼的水倒裏麵）。

5、培養完成要保留實驗平皿和其他相關材料。

作為能力驗證，原始記錄及實驗報告還沒出具完成
，各種材料還是保留至數據出具後較好，便於出現問題現查原因
，馬上補救。

題外話：henduojianceyuandengjieguochulewentiranhoudaowangluoshanglaiqiujiu，jieguoyiwenpingminyijingxidiaole，najiubuzhidaoshishenmezhuangkuangle。youshihouniwentatahaihuizhenzhenyoucidejiang：10^-1
，10^-2都蔓延了，不洗掉幹嘛，10^-5
，10^-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我當時真的無語
，也不想多說話就沒繼續講了。現在我回答一下這個問題：我要你一套完整梯度濃度的平皿，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩定，還有蔓延是個什麼狀況
，到底有多少，是一片還是局部還是很小一部分，然後根據整體數據估算結果（當然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你可控的範圍），是補救的一種（並不可取，屬於垂死掙紮）。定量實驗時，當天做完的稀釋樣品也要放冰箱裏
，雖然實驗要求不能複檢或重複檢測
，但作為微生物專業你是知道菌放在2-8℃下並不會長多少，如果第二天一看數據有蔓延或疑問，馬上再做一次，這樣也應該在誤差範圍內出數。

6、 實驗培養過程勤觀察。

weishengwupeiyangguochengyibanxuyaojixiaoshidaojishixiaoshi
，yaoliyongzheduanshijianguanchapeiyangxiangjijunshengchangqingkuang

，biruwendushifouwending，peiyangshineishiduruhedengdeng，duosiduokan，zhunbeiyuan。fangyoukenengdedaoyumangyangyizhideshiyanjieguo。

原始記錄應有條理

、思路清晰,完整準確地記錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要包含時間、試驗現象
、試驗結果三個要素，方便試驗出現問題的查找。