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新購的玻璃器皿
除去包裝沾染的汙垢後,先用熱肥皂水刷洗,流水衝淨,再浸泡於1~2%的工業鹽酸中數小時,使遊離的堿性物質除去,再以流水衝淨。對容量較大的器皿,如大燒瓶、liangtongdeng,xijinghouzhurunongyansuanshaoxu,zhuandongrongqishiqineibubiaomianjunzhanyouyansuan,shufenzhonghouqingquyansuan,zaiyiliushuichongjing,daozhiyuxidijiashangjiangshuikonggan,jikeshiyong。
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用過的玻璃器皿
凡(fan)確(que)無(wu)病(bing)原(yuan)菌(jun)或(huo)未(wei)被(bei)帶(dai)菌(jun)物(wu)汙(wu)染(ran)的(de)器(qi)皿(min),使(shi)用(yong)後(hou)可(ke)隨(sui)時(shi)衝(chong)洗(xi),吸(xi)取(qu)過(guo)化(hua)學(xue)試(shi)劑(ji)的(de)吸(xi)管(guan),可(ke)先(xian)浸(jin)泡(pao)於(yu)清(qing)水(shui)中(zhong),待(dai)到(dao)一(yi)定(ding)數(shu)量(liang)後(hou)再(zai)集(ji)中(zhong)進(jin)行(xing)清(qing)洗(xi)。有(you)可(ke)能(neng)被(bei)病(bing)原(yuan)菌(jun)汙(wu)染(ran)的(de)器(qi)皿(min),必(bi)須(xu)經(jing)過(guo)適(shi)當(dang)消(xiao)毒(du)後(hou),將(jiang)汙(wu)垢(gou)除(chu)去(qu),用(yong)皂(zao)液(ye)洗(xi)刷(shua),再(zai)用(yong)流(liu)水(shui)衝(chong)洗(xi)幹(gan)淨(jing)。若(ruo)用(yong)皂(zao)液(ye)未(wei)能(neng)洗(xi)淨(jing)的(de)器(qi)皿(min),可(ke)用(yong)洗(xi)液(ye)浸(jin)泡(pao)適(shi)當(dang)時(shi)間(jian)後(hou)再(zai)用(yong)清(qing)水(shui)洗(xi)淨(jing)。洗(xi)液(ye)的(de)主(zhu)要(yao)成(cheng)份(fen)是(shi)重(zhong)鉻(ge)酸(suan)鉀(jia)和(he)濃(nong)流(liu)酸(suan),其(qi)作(zuo)用(yong)是(shi)將(jiang)有(you)機(ji)物(wu)氧(yang)化(hua)成(cheng)可(ke)溶(rong)性(xing)物(wu)質(zhi),以(yi)便(bian)衝(chong)洗(xi)。洗(xi)液(ye)有(you)很(hen)強(qiang)的(de)腐(fu)蝕(shi)作(zuo)用(yong),使(shi)用(yong)時(shi)應(ying)特(te)別(bie)小(xiao)心(xin),避(bi)免(mian)濺(jian)到(dao)衣(yi)服(fu)、身體和其他物品上。
在實驗室中配製的適合微生物生長繁殖或累積代謝產物的任何營養基質,都叫做培養基(Media)。由於各類微生物對營養的要求不同,培養目的和檢測需要不同,因而培養基的種類很多。我們可根據某種標準,將種類繁多的培養基劃分為若幹類型。
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根據對培養基組成物質的化學成分是否完全了解來區分,可以將培養基分為天然培養基、合成培養基和半合成培養基。
天然培養基是指利用各種動、植物或微生物的原料,其成分難以確切知道。用作這種培養基的主要原料有:牛肉膏、麥芽汁、蛋白腖、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血(xue)清(qing)等(deng)。用(yong)這(zhe)些(xie)物(wu)質(zhi)配(pei)成(cheng)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)雖(sui)然(ran)不(bu)能(neng)確(que)切(qie)知(zhi)道(dao)它(ta)的(de)化(hua)學(xue)成(cheng)分(fen),但(dan)一(yi)般(ban)來(lai)講(jiang),營(ying)養(yang)是(shi)比(bi)較(jiao)豐(feng)富(fu)的(de),微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)旺(wang)盛(sheng),而(er)且(qie)來(lai)源(yuan)廣(guang)泛(fan),配(pei)製(zhi)方(fang)便(bian),所(suo)以(yi)較(jiao)為(wei)常(chang)用(yong),尤(you)其(qi)適(shi)合(he)於(yu)配(pei)製(zhi)實(shi)驗(yan)室(shi)常(chang)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。這(zhe)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)常(chang)受(shou)生(sheng)產(chan)廠(chang)或(huo)批(pi)號(hao)等(deng)因(yin)素(su)的(de)影(ying)響(xiang)。合成培養基是一類化學成分和數量完全知道的培養基,它是用已知化學成分的化學藥品配製而成。這類培養基化學成分精確、重複性強,但價格昂貴,而微生物又生長緩慢,所以它隻適用於做一些科學研究,例如營養、代謝的研究。在合成培養基中,加入某種或幾種天然成分;或(huo)者(zhe)在(zai)天(tian)然(ran)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong),加(jia)入(ru)一(yi)種(zhong)或(huo)幾(ji)種(zhong)已(yi)知(zhi)成(cheng)分(fen)的(de)化(hua)學(xue)藥(yao)品(pin)即(ji)成(cheng)半(ban)合(he)成(cheng)培(pei)養(yang)基(ji)。例(li)如(ru)馬(ma)鈴(ling)薯(shu)蔗(zhe)糖(tang)培(pei)養(yang)基(ji)等(deng)。這(zhe)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)在(zai)生(sheng)產(chan)實(shi)踐(jian)和(he)實(shi)驗(yan)室(shi)中(zhong)使(shi)用(yong)最(zui)多(duo)。
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根據培養基的物理狀態來區分,可以分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基。
suopeizhidepeiyangjishiyetaide,qizhongdechengfenjibenshangrongyushui,meiyoumingxiandeguxingwu,yetipeiyangjiyingyangchengfenfenbujunyun,yiyukongzhiweishengwudeshengchangdaixiezhuangtai。在液體培養基中加入適量的凝固劑即成固體培養基。常用作凝固劑的物質有瓊脂、明膠、矽膠等,以瓊脂最為常用。固體培養基在實際中用得十分廣泛。在實驗室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗雜菌、計數、保藏、生物測定等。如果把少量的凝固劑加入到液體培養基中,就製成了半固體培養基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養基有時可用來觀察微生物的動力,有時用來保藏菌種。
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根據培養基的用途來區分,可分為選擇培養基、增殖培養基、鑒別培養基等。
在培養基中加入某種物質以殺死或抑製不需要的菌種生長的培養基,稱之為選擇培養基。如鏈黴素、氯黴素等抑製原核微生物的生長;而製黴菌素、灰黃黴素等能抑製真核微生物的生長;結晶紫能抑製革蘭氏陽性細菌的生長等。zaiziranjiezhong,butongzhongdeweishengwuchangshenghuozaiyiqi,weilefenliwomensuoxuyaodeweishengwu,zaiputongpeiyangjizhongjiaruyixiemouzhongweishengwutebiexihuandeyingyangwuzhi,yizengjiazhezhongweishengwudefanzhisudu,zhujiantaotaiqitaweishengwu,zhezhongpeiyangjichengweizengzhipeiyangji,zhezhongpeiyangjichangyongyujunzhongshaixuanhexuanzezengjunzhong。zaimouzhongchengdushangjiang,zengzhipeiyangjiyeshiyizhongxuanzepeiyangji。在zai培pei養yang基ji中zhong加jia入ru某mou種zhong試shi劑ji或huo化hua學xue藥yao品pin,使shi難nan以yi區qu分fen的de微wei生sheng物wu經jing培pei養yang後hou呈cheng現xian出chu明ming顯xian差cha別bie,因yin而er有you助zhu開kai快kuai速su鑒jian別bie某mou種zhong微wei生sheng物wu。這zhe樣yang的de培pei養yang基ji稱cheng之zhi為wei鑒jian別bie培pei養yang基ji。例li如ru用yong以yi檢jian查zha飲yin水shui和he乳ru品pin中zhong是shi否fou含han有you腸chang道dao致zhi病bing菌jun的de伊yi紅hong美mei藍lan培pei養yang基ji就jiu是shi一yi種zhong常chang用yong的de鑒jian別bie性xing培pei養yang基ji。有些培養基是具有選擇和鑒別雙重作用。例如食品檢驗中常用的麥康凱培養基是一例。它含有膽鹽、乳糖和中性紅。膽鹽具有抑製腸道菌以外的細菌的作用(選擇性),乳糖和中性紅(指示劑)能幫助區別乳糖發酵腸道菌(如大腸杆菌)和不能發酵乳糖的腸道致病菌(如沙門氏菌和誌賀氏菌)。另外,根據培養基的營養成分是否“完全”,可以分為基本培養基、wanquanpeiyangjihebuchongpeiyangji,zheleishuyuzhuyaoshiyongzaiweishengwuyichuanxuezhong。genjupeiyangjiyongyushengchandemudelaiqufen,keyifenweizhongzipeiyangjihefajiaopeiyangji。haiyouzhuanmenyongyupeiyangbingdudengjishengweishengwudehuozuzhipeiyangji,rujipeideng;專門用於培養自養微生物的無機鹽培養基等。
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培養基配方的選定
同(tong)一(yi)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)配(pei)方(fang)在(zai)不(bu)同(tong)著(zhu)作(zuo)中(zhong)常(chang)會(hui)有(you)某(mou)些(xie)差(cha)別(bie)。因(yin)此(ci),除(chu)所(suo)用(yong)的(de)是(shi)標(biao)準(zhun)方(fang)法(fa),應(ying)嚴(yan)格(ge)按(an)其(qi)規(gui)定(ding)進(jin)行(xing)配(pei)製(zhi)外(wai),一(yi)般(ban)均(jun)應(ying)盡(jin)量(liang)收(shou)集(ji)有(you)關(guan)資(zi)料(liao),加(jia)以(yi)比(bi)較(jiao)核(he)對(dui),再(zai)依(yi)據(ju)自(zi)己(ji)的(de)使(shi)用(yong)目(mu)的(de),加(jia)以(yi)選(xuan)用(yong),記(ji)錄(lu)其(qi)來(lai)源(yuan)。
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培養基的製備記錄
每次製備培養基均應有記錄,包括培養基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,最終pH值、消毒的溫度和時間製備的日期和製備者等,記錄應複製一份,原記錄保存備查,複製記錄隨製好的培養基一同存放、以防發生混亂。
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培養基成分的稱取
培(pei)養(yang)基(ji)的(de)各(ge)種(zhong)成(cheng)分(fen)必(bi)須(xu)精(jing)確(que)稱(cheng)取(qu)並(bing)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)錯(cuo)亂(luan),最(zui)好(hao)一(yi)次(ci)完(wan)成(cheng),不(bu)要(yao)中(zhong)斷(duan)。可(ke)將(jiang)配(pei)方(fang)置(zhi)於(yu)傍(bang)側(ce),每(mei)稱(cheng)完(wan)一(yi)種(zhong)成(cheng)分(fen)即(ji)在(zai)配(pei)方(fang)麵(mian)軍(jun)做(zuo)出(chu)記(ji)號(hao),並(bing)將(jiang)所(suo)需(xu)稱(cheng)取(qu)的(de)藥(yao)品(pin)一(yi)次(ci)取(qu)齊(qi),置(zhi)於(yu)左(zuo)側(ce),每(mei)種(zhong)稱(cheng)取(qu)完(wan)畢(bi)後(hou),即(ji)移(yi)放(fang)於(yu)右(you)側(ce)。完(wan)全(quan)稱(cheng)取(qu)完(wan)畢(bi)後(hou),還(hai)應(ying)進(jin)行(xing)一(yi)次(ci)檢(jian)查(zha)。
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培養基各成份的混合和溶化
培pei養yang基ji所suo用yong化hua學xue藥yao品pin均jun應ying是shi化hua學xue純chun的de。使shi用yong的de蒸zheng煮zhu鍋guo不bu得de為wei銅tong鍋guo或huo鐵tie鍋guo,以yi防fang有you微wei量liang銅tong或huo鐵tie混hun入ru培pei養yang基ji中zhong,使shi細xi菌jun不bu易yi生sheng長chang。最zui好hao使shi用yong不bu鏽xiu鋼gang鍋guo加jia熱re溶rong化hua,可ke放fang入ru大da燒shao杯bei或huo大da燒shao瓶ping中zhong置zhi高gao壓ya蒸zheng汽qi滅mie菌jun器qi或huo流liu動dong蒸zheng汽qi消xiao毒du器qi中zhong蒸zheng煮zhu溶rong化hua。在zai鍋guo中zhong溶rong化hua時shi、可先用溫水加熱並隨時擾動、以防焦化、如發現有焦化現象、該(gai)培(pei)養(yang)基(ji)即(ji)不(bu)能(neng)使(shi)用(yong),應(ying)重(zhong)新(xin)製(zhi)備(bei)。待(dai)大(da)部(bu)分(fen)固(gu)體(ti)成(cheng)分(fen)溶(rong)化(hua)後(hou),再(zai)用(yong)較(jiao)小(xiao)火(huo)力(li)使(shi)所(suo)有(you)成(cheng)分(fen)完(wan)全(quan)溶(rong)化(hua),直(zhi)至(zhi)煮(zhu)沸(fei)。如(ru)為(wei)瓊(qiong)脂(zhi)溶(rong)化(hua),用(yong)另(ling)一(yi)部(bu)分(fen)水(shui)溶(rong)化(hua)其(qi)它(ta)成(cheng)分(fen),然(ran)後(hou)將(jiang)兩(liang)溶(rong)液(ye)充(chong)分(fen)混(hun)合(he)。在(zai)加(jia)熱(re)溶(rong)化(hua)過(guo)程(cheng)中(zhong),因(yin)蒸(zheng)發(fa)而(er)丟(diu)失(shi)的(de)水(shui)分(fen),最(zui)後(hou)必(bi)須(xu)加(jia)以(yi)補(bu)足(zu)。
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培養基pH的初步調正
因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養基各成分完全溶解後,應進行pH的初步調正。例如,牛肉浸液約可降低pH0.2,而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的最終pH,保證培養基的質量。pH調整後,還應將培養基煮沸數分鍾,以利培養基沉澱物的析出。
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培養基的分裝
培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝於試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包紮(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜麵培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜麵的量為洽當。分裝容器應預先清洗幹淨並經幹烤消毒,以利於培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20mL培養基於一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基最終pH之用。
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培養基的滅菌
一般培養基可采用121℃高壓蒸汽滅菌15分鍾的方法。在各種培養基製備方法中,如無特殊規定,即可用此法滅菌。某些畏熱成分,如糖類,應另行配成20%或更高的濃液,以過濾或間歇滅菌法消毒,以後再用無菌操作技術、定量加於培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入於經冷卻約50℃左右的培養基中。瓊脂斜麵培養基應在滅菌後立即取出,冷至55℃-60℃時,擺置成適當斜麵,待其自然凝固。
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培養基的質量測試
每批培養基製備好以後,應仔細檢查一遍,如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。並測定其最終pH。將全部培養基放入36±1℃恒溫箱培養過夜,如發現有菌生長,即棄去。用有關的標準菌株接種1~2管或瓶培養基,培養24~48小時,如無菌生長或生長不好。應追查原因並重複接種一次,如結果仍同前,則該批培養基即應棄去,不能使用。
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培養基的保存
培養基應存放於冷暗處,最好能放於普通冰箱內。放置時間不宜超過一周,傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基製備記錄副頁或明顯標簽。