1、紫外吸收檢測器
紫外吸收(UV)檢測器是目前HPLC應用最廣泛的檢測器。其工作原理是朗伯-比bi爾er定ding律lv。這zhe種zhong檢jian測ce器qi靈ling敏min度du高gao,線xian性xing範fan圍wei寬kuan,對dui流liu速su和he溫wen度du變bian化hua不bu敏min感gan,可ke用yong於yu梯ti度du洗xi脫tuo分fen離li。紫zi外wai吸xi收shou檢jian測ce要yao求qiu被bei檢jian測ce樣yang品pin組zu分fen有you紫zi外wai-可ke見jian光guang吸xi收shou,而er使shi用yong的de流liu動dong相xiang無wu吸xi收shou,或huo在zai被bei測ce組zu分fen吸xi收shou波bo長chang處chu無wu吸xi收shou。一yi般ban選xuan擇ze在zai欲yu分fen析xi物wu有you最zui大da吸xi收shou的de波bo長chang處chu進jin行xing檢jian測ce,以yi獲huo得de最zui大da靈ling敏min度du和he抗kang幹gan擾rao能neng力li。在zai沒mei有you最zui大da吸xi收shou時shi,可ke采cai用yong末mo端duan吸xi收shou。檢jian測ce波bo長chang的de選xuan擇ze除chu取qu決jue於yu待dai測ce物wu質zhi的de成cheng分fen和he分fen子zi結jie構gou外wai,還hai必bi須xu考kao慮lv流liu動dong相xiang組zu成cheng、共(gong)存(cun)組(zu)分(fen)幹(gan)擾(rao)等(deng)因(yin)素(su)。特(te)別(bie)是(shi)各(ge)種(zhong)溶(rong)劑(ji)都(dou)有(you)一(yi)定(ding)的(de)透(tou)過(guo)波(bo)長(chang)下(xia)限(xian)值(zhi),超(chao)過(guo)這(zhe)個(ge)波(bo)長(chang),溶(rong)劑(ji)的(de)吸(xi)收(shou)會(hui)變(bian)得(de)很(hen)強(qiang),以(yi)至(zhi)於(yu)不(bu)能(neng)很(hen)好(hao)地(di)測(ce)出(chu)待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)的(de)吸(xi)收(shou)強(qiang)度(du)。下(xia)表(biao)列(lie)出(chu)了(le)HPLC中一些常用的溶劑透過波長的下限。

2、光電二極管陣列檢測器
光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector,PDAD)又稱快速掃描紫外可見分光度計,是一種新型的光吸收檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,形成多通道並行工作,同時它對光柵分離的所有波長的光信號進行檢測,然後將其入射到陣列接收機,然後快速掃描二極管陣列來采集數據,得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(L)函han數shu的de三san維wei色se譜pu光guang譜pu圖tu。由you此ci可ke及ji時shi觀guan察cha與yu每mei一yi組zu分fen的de色se譜pu圖tu相xiang應ying的de光guang譜pu數shu據ju,從cong而er迅xun速su決jue定ding具ju有you最zui佳jia選xuan擇ze性xing和he靈ling敏min度du的de波bo長chang。計ji算suan機ji化hua的de數shu據ju處chu理li,還hai可ke進jin行xing色se譜pu峰feng光guang譜pu相xiang似si性xing比bi較jiao、峰純度檢測及利用譜圖庫對樣品進行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。
danguangshuerjiguanzhenliejianceqi,guangyuanfachudeguangxiantongguojiancechi,tousheguangyouquanxiguangzhasesanchengduoseguang,shedaozhenlieyuanjianshang,shisuoyoubochangdeguangzaijieshouqishangtongshibeijiance。zhenlieshijieshouqishangdeguangxinhaoyongdianzixuedefangfakuaisusaomiaotiquchulai,meifutuxiangjinxuyao10 ms,遠遠超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。
3、熒光檢測器
熒光檢測器(fluorescence detector, FD)是一種高靈敏度、youxuanzexingdejianceqi,kejiancenengchanshengyingguangdehuahewu。yingguangjianceqideyuanliyuyingguangfenxifaxiangtong,huahewushouziwaiguangjifahou,fashechubijifaguangbochanggengchangdeguang,chengweiyingguanghuofasheguang。xuduoyaowuheshengminghuoxingwuzhijuyoutianranyingguang,能直接檢測,某些不發熒光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物,然後進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1 ng/mL,適用於痕量分析。一般情況下,熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個ge數shu量liang級ji,但dan其qi線xian性xing範fan圍wei不bu如ru紫zi外wai檢jian測ce器qi寬kuan。近jin年nian來lai,采cai用yong激ji光guang作zuo為wei熒ying光guang檢jian測ce器qi的de光guang源yuan而er產chan生sheng的de激ji光guang誘you導dao熒ying光guang檢jian測ce器qi極ji大da地di增zeng強qiang了le熒ying光guang檢jian測ce的de信xin噪zao比bi,因yin而er具ju有you很hen高gao的de靈ling敏min度du,在zai痕hen量liang和he超chao痕hen量liang分fen析xi中zhong得de到dao廣guang泛fan應ying用yong。
4、示差折光檢測器
示差折光檢測器(differential refractive Index detector, RID)是一種通用的濃度檢測器,對所有溶質都有響應。某些不能用選擇性檢測器檢測的組分,如高分子化合物、糖類、脂zhi肪fang烷wan烴ting等deng,可ke用yong示shi差cha檢jian測ce器qi檢jian測ce。示shi差cha檢jian測ce器qi是shi基ji於yu連lian續xu測ce定ding樣yang品pin流liu路lu和he參can比bi流liu路lu之zhi間jian折zhe射she率lv的de變bian化hua來lai測ce定ding樣yang品pin含han量liang的de。光guang從cong一yi種zhong介jie質zhi進jin入ru另ling一yi種zhong介jie質zhi時shi,由you於yu兩liang種zhong物wu質zhi的de折zhe射she率lv不bu同tong就jiu會hui產chan生sheng折zhe射she。隻zhi要yao樣yang品pin組zu分fen與yu流liu動dong相xiang的de折zhe光guang指zhi數shu不bu同tong,就jiu可ke被bei檢jian測ce,二er者zhe相xiang差cha愈yu大da,靈ling敏min度du愈yu高gao。在zai一yi定ding濃nong度du範fan圍wei內nei檢jian測ce器qi的de輸shu出chu與yu溶rong質zhi濃nong度du成cheng正zheng比bi。
5、電化學檢測器
電化學檢測器(electrochemical detector, ECD)屬選擇性檢測器,主要有電導檢測器、安培檢測器、介電常數檢測器和電位測定檢測器等,可檢測具有電活性的化合物。電導、電位等檢測器已在離子色譜中得到了廣泛應用;介電常數檢測器性能類似於示差折光檢測器;安培檢測器可檢測氧化性物質,適用範圍很寬。
電化學探測器的優點:
①靈敏度高,檢測量一般為ng級,可以達到pg級;
②選擇性好,可測定大量非電活性物質中極痕量電活性物質;
③線性範圍寬,通常為4~5個數量級;
④設備簡單,成本較低;
⑤易於自動操作。
6、化學發光檢測器
化學發光檢測器(Chemiluminescence detector, CD)是近年來發展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器,具有設備簡單、價格低廉、線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)寬(kuan)等(deng)優(you)點(dian)。其(qi)原(yuan)理(li)是(shi)基(ji)於(yu)某(mou)些(xie)物(wu)質(zhi)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)進(jin)行(xing)化(hua)學(xue)反(fan)應(ying),生(sheng)成(cheng)處(chu)於(yu)激(ji)發(fa)態(tai)勢(shi)反(fan)應(ying)中(zhong)間(jian)體(ti)或(huo)反(fan)應(ying)產(chan)物(wu),當(dang)它(ta)們(men)從(cong)激(ji)發(fa)態(tai)返(fan)回(hui)基(ji)態(tai)時(shi),就(jiu)發(fa)射(she)出(chu)光(guang)子(zi)。由(you)於(yu)物(wu)質(zhi)激(ji)發(fa)態(tai)的(de)能(neng)量(liang)是(shi)來(lai)自(zi)化(hua)學(xue)反(fan)應(ying),故(gu)叫(jiao)作(zuo)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)。當(dang)分(fen)離(li)組(zu)分(fen)從(cong)色(se)譜(pu)柱(zhu)中(zhong)洗(xi)脫(tuo)出(chu)來(lai)後(hou),立(li)即(ji)與(yu)適(shi)當(dang)的(de)化(hua)學(xue)發(fa)光(guang)試(shi)劑(ji)混(hun)合(he),引(yin)起(qi)化(hua)學(xue)反(fan)應(ying),導(dao)致(zhi)發(fa)光(guang)物(wu)質(zhi)產(chan)生(sheng)輻(fu)射(she),其(qi)光(guang)強(qiang)度(du)與(yu)該(gai)物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度(du)成(cheng)正(zheng)比(bi)。
這zhe種zhong檢jian測ce器qi不bu需xu要yao光guang源yuan,也ye不bu需xu要yao複fu雜za的de光guang學xue係xi統tong,隻zhi要yao有you恒heng流liu泵beng,將jiang化hua學xue發fa光guang試shi劑ji以yi一yi定ding的de流liu速su泵beng入ru混hun合he器qi中zhong,使shi之zhi與yu柱zhu流liu出chu物wu迅xun速su而er又you均jun勻yun地di混hun合he產chan生sheng化hua學xue發fa光guang,通tong過guo光guang電dian倍bei增zeng管guan將jiang光guang信xin號hao變bian成cheng電dian信xin號hao,就jiu可ke進jin行xing檢jian測ce。這zhe種zhong檢jian測ce器qi的de最zui小xiao檢jian出chu量liang可ke達da10~12g。
7、蒸發光散射檢測器
蒸發光散射檢測器(evaporative light—scattering detector,ELSD)是20世紀90年代出現的新型通用型質量檢測器,它適用於檢測揮發性低於流動相的組分,主要用於檢測糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘(gan)油(you)三(san)酯(zhi)及(ji)甾(zai)體(ti)等(deng),並(bing)在(zai)沒(mei)有(you)標(biao)準(zhun)品(pin)和(he)化(hua)合(he)物(wu)結(jie)構(gou)參(can)數(shu)未(wei)知(zhi)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)檢(jian)測(ce)未(wei)知(zhi)化(hua)合(he)物(wu)。對(dui)各(ge)物(wu)質(zhi)有(you)幾(ji)乎(hu)相(xiang)同(tong)的(de)響(xiang)應(ying),但(dan)是(shi)其(qi)靈(ling)敏(min)度(du)比(bi)較(jiao)低(di),尤(you)其(qi)是(shi)有(you)紫(zi)外(wai)吸(xi)收(shou)的(de)組(zu)分(fen)。此(ci)外(wai)流(liu)動(dong)相(xiang)必(bi)須(xu)是(shi)揮(hui)發(fa)性(xing)的(de),不(bu)能(neng)含(han)有(you)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)等(deng)。它(ta)的(de)通(tong)用(yong)檢(jian)測(ce)原(yuan)理(li)克(ke)服(fu)了(le)常(chang)見(jian)於(yu)HPLC傳統檢測方法的不足,已越來越多地應用於HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同於紫外和熒光檢測器,ELSDdexiangyingbuyilaiyuyangpindeguangxuetexing,renhehuifaxingdiyuliudongxiangdeyangpinjunnengbeijiance,bushouqiguannengtuandeyingxiang。lingmindubishichazheguangjianceqigao,duiwendubianhuabumingan,jixianwending,shiheyutiduxituoyexiangsepulianyong。
(1)ELSD檢測原理
ELSD運行有三個過程:第一是霧化過程,用惰性氣體或淨化空氣將色譜柱流出物霧化;第二是蒸發過程,在一個加熱管(漂移管)中將流動相揮發;第三是檢測過程,測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個過程。模式A的操作是全部柱流出物(氣溶膠)都進入直的漂移管,讓流動相在其中蒸發,模式B中(zhong)是(shi)將(jiang)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)通(tong)過(guo)一(yi)個(ge)彎(wan)管(guan),在(zai)此(ci)管(guan)中(zhong)大(da)的(de)顆(ke)粒(li)沉(chen)積(ji)下(xia)來(lai)流(liu)入(ru)廢(fei)氣(qi)管(guan),其(qi)餘(yu)的(de)小(xiao)顆(ke)粒(li)進(jin)入(ru)螺(luo)旋(xuan)狀(zhuang)的(de)漂(piao)移(yi)管(guan),在(zai)上(shang)述(shu)兩(liang)種(zhong)模(mo)式(shi)中(zhong),樣(yang)品(pin)顆(ke)粒(li)均(jun)進(jin)入(ru)光(guang)管(guan),使(shi)激(ji)光(guang)發(fa)生(sheng)散(san)射(she)而(er)得(de)以(yi)檢(jian)測(ce)。
(2)ELSD檢測的優點及缺點
優點:
①具有較好的通用性,任何揮發性低於流動相的樣品均能被檢測;
②在相同色譜條件下,物理性質相似的物質可給出一致的響應;
③能與梯度洗脫方式相容;
④靈敏度高於示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法;
⑤在ELSD上開發的實驗方法移植到質譜上則無需修改。
ELSD檢測的不足之處主要是:
①靈敏度不夠理想;
②流動相的選擇受限;
③某些樣品線性範圍較窄等。
(3)影響ELSD檢測性能的基本因素
①操作模式選擇,選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度,操作模式的選擇取決於樣品的揮發性、流動相的組成及其流速。
②流動相組成及流速選擇,流動相的揮發性越好,方法的靈敏度越高。流動相的流速越低,相應的信號越強。
③漂移管溫度對基線水平和噪音的影響並無明顯規律性。最優溫度應為在流動相基本揮發基礎上,產生可接受噪音的最低溫度。
④載氣流速是影響檢測性能的一個很重要因素。最優載氣流速應是在可接受噪音的基礎上(例如0.5mV),產生最大檢測響應值時的最低流速。
(4)ELSD檢測時的數據處理模式
ELSD檢測最常采用的數學模型是lgy=algx+b (y為響應值,x為進樣量或樣品濃度,a、b為回歸常數),也有采用二次曲線模型的(y=ax2+bx+c)。由於響應值(y)與進樣量(x)之間並非線性關係,故其數據處理不同於紫外檢測方法。ELSD測ce定ding已yi知zhi物wu質zhi的de含han量liang時shi,一yi般ban應ying用yong隨sui行xing標biao準zhun曲qu線xian法fa而er非fei外wai標biao法fa,因yin為wei校xiao正zheng線xian性xing方fang程cheng的de截jie距ju並bing不bu為wei零ling。新xin藥yao基ji準zhun品pin的de建jian立li,除chu了le對dui照zhao品pin為wei另ling外wai一yi種zhong含han量liang已yi知zhi、結構相似的物質外,數據處理方式同上相似。ELSD測(ce)定(ding)物(wu)質(zhi)純(chun)度(du)時(shi),由(you)於(yu)響(xiang)應(ying)值(zhi)與(yu)進(jin)樣(yang)量(liang)間(jian)並(bing)非(fei)線(xian)性(xing)關(guan)係(xi),多(duo)通(tong)過(guo)繪(hui)製(zhi)其(qi)中(zhong)的(de)一(yi)種(zhong)或(huo)數(shu)種(zhong)物(wu)質(zhi)的(de)隨(sui)行(xing)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)來(lai)加(jia)以(yi)校(xiao)正(zheng)。多(duo)組(zu)分(fen)物(wu)質(zhi)的(de)分(fen)析(xi),除(chu)了(le)隨(sui)行(xing)校(xiao)正(zheng)曲(qu)線(xian)的(de)線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)有(you)所(suo)區(qu)別(bie)外(wai),數(shu)據(ju)處(chu)理(li)同(tong)上(shang)類(lei)似(si)。盡(jin)管(guan)存(cun)在(zai)一(yi)些(xie)不(bu)足(zu)之(zhi)處(chu),但(dan)是(shi)ELSDzuoweiyizhongxinxingdetongyongxingzhiliangjianceqi,juyouxuduodutedeyoushi,lirutadetongyongxing,xiangyingyinzideyizhixingyijiyutiduxituoxiangrongdeng,jiangzaiwutezhengziwaixishouwuzhidefenxifangmianfahuiyuelaiyuezhongyaodezuoyong。
手機版




