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色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃製作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決於所選擇的固定相，以及色譜柱的製備和操作條件。
關於色譜柱的疑問小編搜羅了100個問答，希望能夠幫到你。1.網(wang)上(shang)對(dui)柱(zhu)子(zi)是(shi)否(fou)可(ke)以(yi)反(fan)衝(chong)一(yi)直(zhi)有(you)爭(zheng)論(lun)，那(na)什(shen)麼(me)樣(yang)的(de)柱(zhu)子(zi)可(ke)以(yi)反(fan)衝(chong)，什(shen)麼(me)不(bu)可(ke)以(yi)。反(fan)衝(chong)後(hou)是(shi)正(zheng)著(zhe)用(yong)，還(hai)是(shi)反(fan)著(zhe)用(yong)。具(ju)體(ti)到(dao)各(ge)型(xing)號(hao)柱(zhu)子(zi)不(bu)僅(jin)是(shi)ODS柱，其他如，正向柱、氨基柱、離子交換柱等最好都有解釋。
答：一(yi)般(ban)的(de)正(zheng)相(xiang)反(fan)相(xiang)柱(zhu)應(ying)該(gai)都(dou)能(neng)反(fan)衝(chong)，隻(zhi)有(you)兩(liang)端(duan)篩(shai)板(ban)孔(kong)徑(jing)不(bu)對(dui)稱(cheng)的(de)柱(zhu)子(zi)不(bu)能(neng)反(fan)衝(chong)，不(bu)過(guo)目(mu)前(qian)這(zhe)樣(yang)的(de)柱(zhu)子(zi)已(yi)經(jing)比(bi)較(jiao)少(shao)見(jian)了(le)。反(fan)衝(chong)是(shi)為(wei)了(le)把(ba)柱(zhu)頭(tou)的(de)汙(wu)染(ran)物(wu)衝(chong)洗(xi)掉(diao)，反(fan)衝(chong)後(hou)還(hai)是(shi)正(zheng)著(zhe)用(yong)比(bi)較(jiao)好(hao)，以(yi)免(mian)柱(zhu)子(zi)的(de)兩(liang)頭(tou)都(dou)被(bei)汙(wu)染(ran)，我(wo)們(men)一(yi)直(zhi)提(ti)倡(chang)的(de)是(shi)：正向使用，反向衝洗。
2.我在做方法開發的時候,用乙腈和水作為流動相,在調整梯度的時候發現，剛開始用60%乙腈，RT為2.5分鍾，調到40%乙腈，RT沒有變化，30%也沒有變化，一直調到20%的時候，RT突然變到了約13分鍾，請問這是什麼原因？我用的是離子交柱。
答：離子交換柱的保留時間主要由洗脫液的離子強度和pHjueding，nixianzaijiangdebijiaojiandan，xuyaobanidefangfashuodexiangxiyidiancainengzuojutidefenxi。piru，fenxiwushishenmeqingkuang，qihanyoujixingdianlijituanhefeijixingjituanshishenmexingzhi？lizijiaohuanzhushijuhewujizhihaishiguijiaojizhi？shuixiangshishenmehuanchongyan？
3.對於一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應該怎樣進行活化及維護？為什麼要這樣做？
答：新xin柱zhu活huo化hua，實shi際ji上shang是shi一yi個ge平ping衡heng的de過guo程cheng，除chu了le用yong流liu動dong相xiang平ping衡heng外wai，有you時shi候hou還hai必bi須xu用yong所suo測ce樣yang品pin對dui新xin柱zhu進jin行xing平ping衡heng，特te別bie是shi測ce定ding分fen子zi量liang比bi較jiao高gao的de多duo肽tai，尤you其qi重zhong要yao。因yin為wei，分fen子zi量liang高gao的de物wu質zhi分fen子zi，擴kuo散san速su度du慢man，平ping衡heng所suo需xu時shi間jian也ye相xiang應ying較jiao長chang。具ju體ti平ping衡heng方fang式shi也ye很hen簡jian單dan，多duo進jin幾ji次ci樣yang品pin，直zhi到dao峰feng麵mian積ji和he保bao留liu時shi間jian穩wen定ding，再zai進jin行xing正zheng式shi進jin樣yang測ce定ding。
如果要加快平衡時間，把前麵用來平衡的進樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續進樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是：將矽膠基質填料表麵具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。
4.測定多肽，一般采用什麼柱子？流動相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應該怎麼選擇柱子？
答：分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
5.氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間後，柱效降低，峰形改變，如何恢複？
答：氨基柱測酸性樣品，應該是用氨基柱的HILICmoshi。suandecunzaikenenghuishilvedaifudianhedeanjiguannengtuanzhizihua，daozhishiyongyiduanshijianhouduiyumouxieleidefenxiwubaoliuxingzhiyousuogaibianhuobiaoxianzaizhuxiaoxiajiang。jianyi：用5～10倍的柱體積的含0.5～1.0％NH3的乙腈-水(50：50)溶液衝洗該柱（衝洗後當然要再用不含堿的流動相洗去多餘氨），之後，再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如，0.1％。
6.色譜柱的技術都有哪些？比如，封尾等，這些技術在應用時都體現在哪裏？
答：色se譜pu柱zhu技ji術shu包bao括kuo填tian料liao技ji術shu和he裝zhuang柱zhu技ji術shu，填tian料liao技ji術shu自zi不bu待dai言yan，填tian料liao的de好hao壞huai對dui色se譜pu柱zhu分fen離li性xing能neng和he選xuan擇ze性xing有you決jue定ding性xing影ying響xiang。裝zhuang柱zhu技ji術shu也ye沒mei有you想xiang象xiang中zhong的de這zhe麼me簡jian單dan，不bu同tong固gu定ding相xiang、不同粒徑、不同柱管內徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩定、均一的柱床，更多是一門藝術，需要經驗積累。
7.色譜柱技術的差距在哪裏？
答：色se譜pu柱zhu技ji術shu包bao括kuo填tian料liao技ji術shu和he裝zhuang柱zhu技ji術shu，填tian料liao技ji術shu自zi不bu待dai言yan，填tian料liao的de好hao壞huai對dui色se譜pu柱zhu分fen離li性xing能neng和he選xuan擇ze性xing有you決jue定ding性xing影ying響xiang。裝zhuang柱zhu技ji術shu也ye沒mei有you想xiang象xiang中zhong的de這zhe麼me簡jian單dan，不bu同tong固gu定ding相xiang、不同粒徑、不同柱管內徑和長度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩定、均一的柱床，更多是一門藝術，需要經驗積累。
國內和國外相比，我認為色譜柱的差距在於：guoneigongsiyiqiandoubuhuizijikaifatianliao，yibanmaiguowaixianchengtianliaozhuangzhu，maidaodetianliaozhiliangkongzhiquanbuzaizijishouli。lingwai，yinwei，zhuangzhulishiduan，jingyanjileishao，zhuangzhugongyiyemeiyouwanquandadaoguowaishuiping。lingwai，duisepuzhuxingnenghenguanjiandejichucailiao——裸矽膠，國產的還不過關，在純度、粒徑和孔徑的均一性方麵和國外產品相比，差距很大。
8.柱zhu子zi在zai什shen麼me情qing況kuang下xia可ke以yi清qing洗xi一yi下xia篩shai板ban呢ne？原yuan來lai也ye討tao論lun過guo這zhe個ge問wen題ti，我wo也ye拆chai下xia來lai清qing洗xi過guo，但dan我wo看kan到dao柱zhu前qian段duan的de汙wu染ran更geng甚shen，於yu是shi就jiu用yong刀dao片pian刮gua了le刮gua，然ran後hou把ba清qing洗xi好hao的de篩shai板ban安an裝zhuang上shang去qu。問wen題ti解jie決jue了le，但dan使shi用yong壽shou命ming會hui不bu會hui減jian少shao呢ne？
答：柱(zhu)頭(tou)汙(wu)染(ran)了(le)，就(jiu)取(qu)出(chu)汙(wu)染(ran)的(de)，再(zai)裝(zhuang)一(yi)些(xie)填(tian)料(liao)。因(yin)為(wei)，加(jia)入(ru)你(ni)刮(gua)了(le)些(xie)填(tian)料(liao)，那(na)麼(me)微(wei)觀(guan)的(de)塔(ta)板(ban)數(shu)就(jiu)少(shao)了(le)。假(jia)入(ru)你(ni)刮(gua)得(de)不(bu)多(duo)，僅(jin)表(biao)麵(mian)，可(ke)能(neng)就(jiu)是(shi)一(yi)些(xie)髒(zang)物(wu)，所(suo)以(yi)，問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)，但(dan)是(shi)，今(jin)後(hou)還(hai)會(hui)有(you)同(tong)樣(yang)問(wen)題(ti)，再(zai)掛(gua)，那(na)麼(me)不(bu)小(xiao)心(xin)刮(gua)，影(ying)響(xiang)柱(zhu)效(xiao)。建(jian)議(yi)還(hai)是(shi)裝(zhuang)一(yi)個(ge)預(yu)柱(zhu)。
9.如果柱子取下來放置一段時間，需要做什麼保護嗎？
答：對一般的反相柱，也就是洗幹淨後放到純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然後用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發，應該不需要做特殊的保護。
10.流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什麼？
答：《高效液相色譜方法及應用》於世林編著的上麵說：甲醇為質子給予體、乙腈為質子接受體、四氫呋喃是偶極溶劑，應該除了極性影響，還有另外的影響因素，至於分離機理，還是比較複雜的，不能看成是個萬能方法。
11.關於色譜柱的填裝問題！我個人認為現在色譜柱的填裝一般有3種情況：
①國外生產填料並填裝完成成品賣到國內；
②國外生產填料，國內填裝銷售；
③國內生產填料，國內填裝銷售。
一般情況下，第1種情況賣的最貴，也質量最好！可是我就不明白了：如果是填料的生產很複雜的話，那麼填裝上國內也跟不上去嗎？為什麼換在國內填裝就會出現或多或少的一些小問題呢？
答：國(guo)內(nei)填(tian)裝(zhuang)會(hui)出(chu)現(xian)質(zhi)量(liang)小(xiao)問(wen)題(ti)，和(he)國(guo)內(nei)目(mu)前(qian)普(pu)遍(bian)做(zuo)事(shi)沒(mei)有(you)國(guo)外(wai)嚴(yan)謹(jin)有(you)關(guan)吧(ba)。如(ru)果(guo)工(gong)藝(yi)技(ji)術(shu)上(shang)沒(mei)有(you)問(wen)題(ti)，又(you)能(neng)製(zhi)訂(ding)並(bing)切(qie)實(shi)執(zhi)行(xing)一(yi)整(zheng)套(tao)嚴(yan)格(ge)的(de)生(sheng)產(chan)質(zhi)量(liang)管(guan)理(li)措(cuo)施(shi)，國(guo)內(nei)填(tian)裝(zhuang)和(he)國(guo)外(wai)填(tian)裝(zhuang)並(bing)無(wu)區(qu)別(bie)。
12.國產色譜柱在市場上占有比例如何啊？
答：國內色譜柱市場還沒有人進行過科學統計，連一年色譜柱銷售總量也眾說紛雲，更別說國內生產色譜柱所占份額了。我估計是占30%左右吧。
13.預柱或保護柱用還是不用的問題！yuanlaifenxizhongyaopinzhongshi，woyizhidoushiyongbaohuzhu。danlaidaoxingongsihou，faxiandajiadoumeiyoushiyong，jigeshiyanshilianbaohuzhudoumeizhaodaoyige，yejiushishuodajiaconglaidoumeiyouyongguo。houlaiwenyigelaoyuangong，shuoshiyoukenengyingxiangyaopinfenxi。wojiuxiangwen：安裝保護柱後會影響樣品分析嗎？我們做的大多是頭孢類的抗生素。
答：yinggaizheyangshuo，jiashangbaohuzhu，kendingyouliyubaohusepuzhubushouyixiekeliwuzhidedusai，kendingyouhaiyufenliduhezhuxiao，yinweibaohuzhuzhongjianyouzhesitijidecunzaidanshiruguobaohuzhujiedehaobingqiejinliangkongzhiqipipeixinghejingchanggenghuan，fenliduhezhuxiaoyinggaiyingxiangbingbuda。
頭孢類的抗生素也要看到底是原料藥還是製劑嘍，有些原料藥，可以根據色譜柱的損耗選擇添加預柱（中間是個篩板），製劑的話，如果有輔料嚴重幹擾或者流動相鹽分比較大，那還是最好配個保護柱。
14.用的是四元梯度泵：A：50%甲醇；B：50%水， 經常出現停或進氣泡這是什麼原因？
答：水/甲醇比例在55：45時，黏度和柱壓有個極大值。50：50jiejinlezhegejizhi，zhuyashibijiaogaode，dan，yingxiangzhuyazuidadehaishitianliaolijinghesepuzhuneijing，nizhegeshilizhongbuzhiyongdeshenmeguigedesepuzhu？xitongyaligao，kenenghuiyinrongjibengzhongdeguolvtougongyesudugenbushangerdaozhiqipaojinruxitong，tingjiyeyinggaishiyinweiqipaojinruyalixiajiangdeyuanyin，kekaolvgenghuanyetitonglianggengdadeguolvtou。
15.填料方法的前三種都是濕法嗎，能不能對四種填充方法做一個簡短的說明？
答：資料顯示：在正常條件下，填料粒度＞20µm時，幹法填充製備柱較為合適；顆粒＜20µm時，濕法填充較為理想。填充方法一般有4種：
① 高壓勻漿法，多用於分析柱和小規模製備柱的填充；
② 徑向加壓法，Waters專利；
③ 軸向加壓法，主要用於裝填大直徑柱；
④幹法，柱填充的技術性很強，大多數實驗室使用已填充好的商品柱。為什麼以20μm為分界點？
16.想請您具體說明一下反衝色譜柱的方法，是不連檢測器嗎？
答：反衝就是將柱子反向連到係統中。因為，有汙染物反衝出來，當然不連檢測器，出液端直接接到廢液瓶就可以。
17.如果不使用不鏽鋼接頭，而改用peek頭，是否可以完全解決接頭匹配問題？
答：色譜柱接頭其實大都不是色譜柱廠商自己生產的，供貨商有多個，VICI，Upchurch，Parkerdeng，tamendebiaozhunxianghuzhijianbutongyi，nasepuzhujietoudebiaozhunjiutongyibuqilai。buguoyibanzhegewentiyebunanjiejuede，huangejietoujiukeyile，erqiexianzaiyoulewanyongjietou，keyipeisuoyoubutongleixingdezhutou，buxielu，lianjiesitijiyouhenxiao。
18.有的廠商為避免堵塞，使用了較大孔徑（2～5μm）的前篩板，這種情況反衝會將填料衝出。那麼，你們在使用說明書中會說明前後篩板的孔徑嗎？
答：如果前後篩板孔徑不對稱，廠商肯定也會在說明書裏特別提到的。
19.我在做多肽藥物時遇到下列問題：
1）基線不穩定波動大，流動相 A ：
1％TF，A：水溶液，B：1％TFA乙腈溶液檢測波長210nm流速1.0mL/mL 什麼原因？怎麼解決？TFA有什麼作用？流動相中不加TFA見不到主峰，基線良好；
2）做完肽類樣品時怎麼衝洗C18比較好；
3）藥典上介紹測定分子量大於2000的樣品，選擇柱子填料的孔徑為30nm，30nm與10nm對結果有什麼區別？
答：應該是起“離子對”的作用吧。在做多肽類樣品的時候，300A孔徑的填料相對100A孔徑肯定要選擇性好點，也就是分離度相對比較好點。流動相加入TFA，在反相色譜分離多肽和蛋白質的實驗中，使用三氟乙酸(TFA)作為離子對試劑是常見的手段。流動相中的三氟乙酸通過與疏水鍵合相和殘留的極性表麵以多種模式相互作用，來改善峰形、克服峰展寬和拖尾問題。
※三氟乙酸優於其他離子修飾劑的原因是它容易揮發，可以方便地從製備樣品中除去。另一方麵，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低於200nm ，對多肽在低波長處的檢測幹擾很小。
20.waters，Atlantis C18柱可以用較高比例的流動相，那麼用完後應該怎麼清洗？在什麼體係中保存比教合適？
答：反相柱都可以用下麵通用的方法清洗維護：
流動相中不含緩衝鹽：
分析完成後，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向衝洗色譜柱45min。
流動相中含有緩衝鹽：
分析完成後，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向衝洗45min，然後再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向衝洗色譜柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易長菌，使用時間不可超過3天）；
水性柱保存體係也不特別：
短期保存在所用的流動相中（不含緩衝鹽），中長期保存在純甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中。
21.正相矽膠柱一般保存在什麼溶劑裏麵比較合適？
答：短期和長期都建議保存在正相測定所用的流動相中，一般是正己烷和極少量的異丙醇。
22.磷(lin)酸(suan)鹽(yan)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)滲(shen)透(tou)力(li)強(qiang)，為(wei)什(shen)麼(me)，是(shi)因(yin)為(wei)與(yu)醋(cu)酸(suan)鹽(yan)，枸(gou)椽(chuan)酸(suan)鹽(yan)相(xiang)比(bi)，基(ji)團(tuan)小(xiao)嗎(ma)，使(shi)用(yong)磷(lin)酸(suan)鹽(yan)緩(huan)衝(chong)液(ye)與(yu)其(qi)它(ta)緩(huan)衝(chong)液(ye)相(xiang)比(bi)，會(hui)使(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)壽(shou)命(ming)縮(suo)短(duan)多(duo)少(shao)？
答：jingchangyonglinsuanyan，zaiqitatiaojianchabuduoyiyangdeqingkuangxia，zhuzishoumingkendingbibuyonglinsuanhuanchongyanxiangduiduanyixie。danyonglinsuanyanyeyoubukequdaideyoudianba，fouzebukenengxianzaidabufenrenhaizaiyong。
23.fanxiangliziduisepufazhong，liziduishiruheqizuoyongde，shiliziduishijidefeijixingduanrongjiezaitianliaodefeijixingduanli，jieliduanshenxiangliudongxiang，duihananhuaheqilizijiaohuanzuoyong，haishiyangpinyuliziduishengchengjinmidejiehewu，liziduishijiyanzanghuahewuzhongdejixingjituan，haishizhezhongjiehewushizaijieliyujiehededongtaipinghengzhizhong？
答：首(shou)先(xian)離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑(ji)的(de)解(jie)離(li)端(duan)和(he)目(mu)標(biao)離(li)子(zi)形(xing)成(cheng)離(li)子(zi)締(di)合(he)物(wu)，降(jiang)低(di)其(qi)極(ji)性(xing)，這(zhe)樣(yang)就(jiu)能(neng)較(jiao)好(hao)的(de)在(zai)柱(zhu)子(zi)上(shang)保(bao)留(liu)。再(zai)者(zhe)，根(gen)據(ju)疏(shu)水(shui)效(xiao)應(ying)理(li)論(lun)，離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑(ji)的(de)疏(shu)水(shui)端(duan)是(shi)很(hen)容(rong)易(yi)和(he)C18鏈(lian)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)的(de)，這(zhe)樣(yang)更(geng)容(rong)易(yi)在(zai)柱(zhu)子(zi)上(shang)保(bao)留(liu)，所(suo)以(yi)我(wo)認(ren)為(wei)離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑(ji)作(zuo)用(yong)是(shi)混(hun)合(he)保(bao)留(liu)機(ji)製(zhi)，即(ji)純(chun)粹(cui)的(de)反(fan)相(xiang)保(bao)留(liu)和(he)離(li)子(zi)對(dui)保(bao)留(liu)機(ji)製(zhi)共(gong)同(tong)作(zuo)用(yong)。
24.四烷基季銨鹽（如，四丁基硫酸氫銨、四丁基溴化銨、四丁基氫氧化銨等）在水中電離後，也形成了類似N＋H(CH2CH3)3的結構N＋(CH2CH2CH2CH3)4，這種結構也能有效的與Si－O－產生較強的靜電作用，此類離子對用的比較少，但它的作用僅是掩藏Si－O－ma，taduiwuzhidebaoliuxingnengyouheyingxiang，shiyanzhongfaxianjianceanhuawushi，liudongxiangzhongjiarulinsuanhuanchongyanyouzengjiawuzhibaoliudequshi，erjiarusanyianzehuijiangdiwuzhidebaoliunengli？
答：qianmiantidaodesidingjiqingyanghuaandengliziduishijiqueshiburuxinhuangsuannadengjixingjishiyinlizideliziduishijiyongdepubian，yuanyinshisuanleijixingwuzhihenrongyitongguojiangdipH值的方法提高在反相色譜中的保留能力，降低pH可抑製酸的電離，使酸處於中性狀態而與疏水碳鏈的作用力增強。而堿類分析物則受矽膠基質pH上限的嚴重影響（以前上限是8，後來抬到10，直到最近雜化矽膠才將pH上限提到12左右）。
anyanleiliziduishijiqueshiyouxinhuangsuannadengsuobujuyoudepingbiguichunjizuoyong，danqizhuyaozuoyonghaishishushuiduanheshushuigudingxiangjiehe，wailudeyangliziqinshuiduanhesuanyinlizizuoyong，congertigaoqibaoliunengli。dangrantongyanghaiyoudierzhongjieshijili，liziduishijixianhefenxiwujiehe，yanzangjixingji，congertigaojixingfenxiwuzaifanxiangsepuzhongdebaoliunengli。erqiedingjibixinjishushuixingcha，zhezhongqingkuangxia，renweihoumiandejiehejilizhanshangfengdekenengxinggengda。
檢測胺類化合物，加入三乙胺預先和矽醇基結合，胺和矽醇基作用被三乙胺取代，保留下降是肯定的。
25.同一根色譜柱在分析完三聚氰胺後，再分析苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時為什麼保留時間會提前？
答：色譜柱被強保留物質汙染後，保留時間提前和滯後的情況都有，具體要看汙染物的性質，還要看分析物、gudingxianghewuranwusanzhegongtongzuoyongdeqingkuang，qingkuangbijiaofuza，youshihoubijiaonanyuceshitiqianhaishizhihou。buguonipingshiweihudeshihou，zhuyizaicedinghoujiangwuranwuyongyoujirongjifanchongqingxi，jiukeyijianqinghuobimianzhezhongqingkuangdechuxian。jianyimeigefenxifangfayongzhuanmendesepuzhu，changyuankan，zheyanggengjieshengsepuzhudefeiyong。
26.HPLC柱前衍生和柱後衍生的相關問題？1）為什麼要衍生？2）衍生化的分類？3）進行衍生，適用的化合物有哪些？4）進行衍生化的要求有哪些？5）柱前衍生和柱後衍生的優缺點？
答：色譜技術中的化學衍生法係指在色譜過程中用特殊的化學試劑（一般稱為衍生化試劑或標記試劑）使樣品成分轉變相應的衍生物之後進行分離檢測或進行檢測的方法。
目的為：
1.將紫外—可見強吸收功能基團引入被檢測對象或將其轉變為熒光衍生物，以提高檢測靈敏度；2.提高對分析樣品的分離和選擇性。
從是否與HPLC係統聯機的角度，化學衍生法分為在線online）與離線∣Offline）兩種。從發生衍生化的場合，分為柱前衍生法pre-columnderivatization）與柱後衍生法（post-columnderivatization）兩種。目前，在HPLC中，以離線的柱前衍生法（簡稱柱前衍生法）與在線的柱後衍生法（簡稱柱後衍生法）使用居多。
27.多個樣品不好分離的時候，請問該怎麼通過選擇合適的柱子來提高分離度？
答：提高分離度可從三個主要影響因素來考慮，柱效、選擇性和保留因子。可通過減小填料粒徑和增加柱長提高柱效；選擇性和固定相選擇以及pH條件有關，通過選擇合適的色譜柱和合適的pH，可以提高選擇性；有時候適當延長出峰時間增加保留因子，也可提高分離度。
28.苯基柱，氰基柱該什麼時候考慮用？
答：苯基柱用於含苯環的芳香族化合物的測定時，具有較高的選擇性。CN柱可作為一個保留能力最弱的反相柱使用，也可作為一個活性降低的正相柱使用（保留時間比矽膠柱和氨基柱低很多）。
29.同樣類型柱子還有長度，粒徑等差異，這些該怎麼去選擇？
答：長度和粒徑都是用來改變柱效的，選擇原則是夠用就好。
30.我前幾天剛剛裝上一個新的C18柱，在進樣之前我用100%dejiachunchonglebangeduoxiaoshi。gangcaikandaoshangmianxiedeyaohuohuashenmede？buzhidaowozhichongxibanxiaoshijiukaishiyongduizhuziyoumeiyouyingxiang？duichufengshenmedeyoumeiyouyingxiangne？
答：不(bu)是(shi)所(suo)有(you)的(de)測(ce)定(ding)，都(dou)需(xu)要(yao)對(dui)新(xin)柱(zhu)子(zi)用(yong)所(suo)測(ce)樣(yang)品(pin)老(lao)化(hua)。但(dan)先(xian)按(an)方(fang)法(fa)程(cheng)序(xu)進(jin)樣(yang)幾(ji)針(zhen)，觀(guan)察(cha)到(dao)峰(feng)麵(mian)積(ji)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)不(bu)再(zai)有(you)明(ming)顯(xian)變(bian)化(hua)，再(zai)開(kai)始(shi)正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)，這(zhe)是(shi)一(yi)個(ge)好(hao)習(xi)慣(guan)。按(an)你(ni)現(xian)在(zai)的(de)做(zuo)法(fa)，如(ru)果(guo)第(di)一(yi)針(zhen)和(he)第(di)二(er)針(zhen)的(de)峰(feng)麵(mian)積(ji)、保留時間沒有變化，就繼續做沒影響吧。
31.現在色譜柱和儀器的接口還沒有標準化嗎，除了檢測池的出入管較小外，色譜柱的接口與peek頭不匹配的有哪個型號的色譜柱，以後使用的時候需要注意一點。同時發現使用過金屬接頭的色譜柱再換成PEEK頭，常易漏液，這是因為金屬頭易使色譜柱接口變形嗎？
答：色譜柱接頭其實大都不是色譜柱廠商自己生產的，供貨商有多個，VICI，Upchurch，Parkerdeng，tamendebiaozhunxianghuzhijianbutongyi，nasepuzhujietoudebiaozhunjiutongyibuqilai。buguoyibanzhegewentiyebunanjiejuede，huangejietoujiukeyile，erqiexianzaiyoulewanyongjietou，keyipeisuoyoubutongleixingdezhutou，buxielu，lianjiesitijiyouhenxiao。
32.普通的C18柱(zhu)能(neng)作(zuo)為(wei)正(zheng)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)使(shi)用(yong)嗎(ma)？正(zheng)相(xiang)色(se)譜(pu)體(ti)係(xi)中(zhong)最(zui)常(chang)用(yong)也(ye)最(zui)普(pu)通(tong)的(de)是(shi)那(na)種(zhong)色(se)譜(pu)柱(zhu)。正(zheng)相(xiang)柱(zhu)在(zai)使(shi)用(yong)過(guo)程(cheng)中(zhong)與(yu)反(fan)向(xiang)柱(zhu)相(xiang)比(bi)有(you)什(shen)麼(me)需(xu)要(yao)注(zhu)意(yi)的(de)地(di)方(fang)？
答：普通C18柱作為正相柱使用，我還沒聽說過。正相色譜分離模式是指固定相的極性比流動相的極性大，反過來，流動相極性大就是反相。C18固定相屬於疏水性相對比較強的，疏水性強就是極性很弱，應該找不出極性比它更弱的流動相了。
正相體係常見的柱子有：矽膠柱、氨基柱、CN基柱和Diol二er醇chun基ji柱zhu，最zui普pu通tong的de應ying該gai就jiu是shi矽gui膠jiao柱zhu。正zheng相xiang柱zhu和he反fan相xiang柱zhu比bi，最zui需xu要yao注zhu意yi的de是shi水shui分fen，正zheng相xiang柱zhu對dui水shui分fen非fei常chang敏min感gan，流liu動dong相xiang中zhong水shui分fen含han量liang的de些xie微wei變bian化hua對dui保bao留liu時shi間jian影ying響xiang很hen大da，因yin此ci正zheng相xiang柱zhu測ce定ding前qian平ping衡heng時shi間jian需xu要yao幾ji個ge小xiao時shi甚shen至zhi更geng長chang。
33.色譜柱的柱頭類型與不鏽鋼毛細管接頭有6種連接方式（在講義裏麵提到），那(na)麼(me)我(wo)們(men)用(yong)戶(hu)一(yi)般(ban)是(shi)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)儀(yi)是(shi)固(gu)定(ding)某(mou)一(yi)個(ge)廠(chang)家(jia)，而(er)是(shi)根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)檢(jian)測(ce)需(xu)要(yao)更(geng)換(huan)不(bu)同(tong)類(lei)型(xing)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)，那(na)麼(me)怎(zen)麼(me)判(pan)斷(duan)我(wo)所(suo)購(gou)買(mai)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)是(shi)否(fou)與(yu)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)毛(mao)細(xi)管(guan)是(shi)否(fou)匹(pi)配(pei)呢(ne)，我(wo)之(zhi)前(qian)隻(zhi)是(shi)知(zhi)道(dao)安(an)捷(jie)倫(lun)和(he)waters都dou有you規gui定ding他ta們men自zi己ji家jia的de柱zhu子zi與yu自zi己ji家jia的de儀yi器qi配pei套tao是shi最zui合he適shi的de，而er其qi他ta廠chang家jia的de色se譜pu柱zhu都dou很hen少shao提ti及ji，在zai不bu知zhi道dao的de情qing況kuang下xia，我wo們men該gai怎zen麼me選xuan擇ze？月yue旭xu的de色se譜pu柱zhu柱zhu頭tou類lei型xing屬shu於yu哪na一yi種zhong類lei型xing呢ne？
答：不bu鏽xiu鋼gang毛mao細xi管guan接jie頭tou有you個ge缺que點dian，用yong過guo一yi次ci後hou卡ka匝za位wei置zhi和he距ju離li毛mao細xi管guan末mo端duan的de長chang度du就jiu固gu定ding死si了le。如ru果guo下xia次ci用yong的de色se譜pu柱zhu的de柱zhu頭tou接jie口kou深shen度du和he原yuan來lai的de不bu同tong，就jiu容rong易yi產chan生sheng死si體ti積ji和he泄xie漏lou。產chan生sheng的de死si體ti積ji一yi般ban不bu大da，如ru果guo隻zhi引yin起qi柱zhu效xiao的de稍shao微wei下xia降jiang而er沒mei引yin起qi拖tuo尾wei，這zhe個ge問wen題ti就jiu容rong易yi被bei忽hu略lve。引yin起qi大da家jia關guan注zhu的de是shi泄xie漏lou，如ru果guo用yong了le新xin柱zhu子zi，發fa現xian和he毛mao細xi管guan的de接jie口kou處chu有you泄xie漏lou，就jiu可ke以yi判pan斷duan是shi接jie頭tou的de匹pi配pei問wen題ti。最zui好hao的de判pan斷duan方fang法fa還hai是shi：詢問一下廠商色譜柱柱頭的類型和柱頭接口的深度，然後和毛細管接頭的規格比較。
如果用peek接頭，發生問題的情況就大大減少，因為，peek接頭卡匝位置是不固定的。
接頭與色譜柱的匹配，並沒有在實際色譜應用中造成很大的問題，有很多人都沒有關注到這個問題。一方麵原因是使用peek接頭的情況很普遍，另外，如果發現不匹配，換個毛細管接頭還是非常方便的。
34.相對於氣相色譜，液相的優勢在哪裏？做防腐劑分析時，流動相加入乙酸銨才可以出峰，原理是什麼？
答：液相和氣相相比的優勢有很多,我認為主要在於應用範圍更廣。氣相隻限於容易氣化的低分子量物質的分析測定，對象大部分是基礎化工原材料；而任何能溶解於某溶劑的物質都能用液相分析，適用對象是分子量從幾十到幾萬的廣大範圍。在製藥、化工、環保、食shi品pin和he刑xing偵zhen等deng諸zhu多duo重zhong要yao領ling域yu，液ye相xiang都dou已yi成cheng為wei主zhu導dao的de分fen析xi分fen離li工gong具ju。也ye有you兩liang者zhe都dou能neng應ying用yong的de交jiao叉cha情qing況kuang，但dan液ye相xiang的de製zhi樣yang更geng簡jian單dan。液ye相xiang色se譜pu的de出chu現xian克ke服fu了le氣qi相xiang色se譜pu不bu能neng直zhi接jie用yong於yu難nan揮hui發fa、熱不穩定及高分子化合物的弱點。
35.您提到“磷酸鹽緩衝鹽滲透力強，有加快矽膠溶解的副作用，它的存在會降低pH使用範圍。”，既然這樣，經常使用，柱子壽命是否也下降的快呀？
答：經jing常chang用yong磷lin酸suan鹽yan，在zai其qi它ta條tiao件jian差cha不bu多duo一yi樣yang的de情qing況kuang下xia，柱zhu子zi壽shou命ming肯ken定ding比bi不bu用yong磷lin酸suan緩huan衝chong鹽yan相xiang對dui短duan一yi些xie，但dan，用yong磷lin酸suan鹽yan也ye有you不bu可ke取qu代dai的de優you點dian吧ba，否fou則ze不bu可ke能neng現xian在zai大da部bu分fen人ren還hai在zai用yong。
36.CN柱(zhu)的(de)保(bao)存(cun)需(xu)要(yao)在(zai)低(di)溫(wen)條(tiao)件(jian)，但(dan)是(shi)，又(you)不(bu)能(neng)太(tai)低(di)，使(shi)固(gu)定(ding)相(xiang)凍(dong)結(jie)，怎(zen)麼(me)控(kong)製(zhi)這(zhe)個(ge)溫(wen)度(du)？怎(zen)麼(me)判(pan)斷(duan)固(gu)定(ding)相(xiang)是(shi)否(fou)被(bei)凍(dong)結(jie)？固(gu)定(ding)相(xiang)凍(dong)結(jie)後(hou)會(hui)是(shi)什(shen)麼(me)樣(yang)的(de)現(xian)象(xiang)？
答：所謂低溫儲存，就是放到陰涼處或者放到冰箱的冷藏室。儲存液隻要不是純水，冰點都比較低，純甲醇的冰點是零下90度以下了。
37.我(wo)們(men)測(ce)試(shi)樣(yang)品(pin)時(shi)，經(jing)常(chang)會(hui)關(guan)心(xin)柱(zhu)壓(ya)是(shi)否(fou)太(tai)高(gao)，但(dan)是(shi)在(zai)購(gou)買(mai)色(se)譜(pu)柱(zhu)時(shi)，並(bing)沒(mei)有(you)說(shuo)每(mei)一(yi)根(gen)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)最(zui)大(da)使(shi)用(yong)壓(ya)力(li)是(shi)多(duo)少(shao)？針(zhen)對(dui)這(zhe)樣(yang)的(de)情(qing)況(kuang)，用(yong)戶(hu)怎(zen)麼(me)判(pan)斷(duan)柱(zhu)壓(ya)是(shi)否(fou)超(chao)過(guo)該(gai)柱(zhu)的(de)極(ji)限(xian)？
答：裝柱時的壓力比使用時高很多，所以柱壓對色譜柱本身在使用時沒有極限問題存在，倒是一般儀器有個40Mpa的上限。如果色譜分離度還能滿足分析方法要求，柱壓隻要儀器能承受就OK吧。
38.使用緩衝液不當，使矽膠溶解並重新形成粉末後，會出現什麼樣的異常情況？怎麼處理？
答：出現異常就是柱壓升高。小xiao粉fen末mo在zai流liu動dong相xiang不bu斷duan衝chong洗xi帶dai動dong下xia，最zui後hou會hui聚ju集ji在zai柱zhu子zi出chu口kou端duan，沉chen積ji在zai後hou篩shai板ban。處chu理li方fang法fa隻zhi有you拆chai下xia後hou篩shai板ban進jin行xing清qing洗xi或huo更geng換huan，但dan這zhe樣yang做zuo會hui影ying響xiang到dao柱zhu床chuang，處chu理li後hou柱zhu效xiao會hui下xia降jiang。
39.今天才知道濾膜的材質分了這麼幾種：再生纖維素、聚四氟乙烯、硝酸纖維和醋酸纖維等，之前隻知道有有機係和水係之分？各種不同材質的濾膜適合於什麼樣的樣品？
答：再生纖維素膜：具有蛋白質吸收低，適用於水溶性樣品和有機溶劑；
聚四氟乙烯：適用於所有有機溶劑，酸和鹽；
尼龍66：適用於絕大多數有機溶劑和水溶液，可用於強酸，70%的乙醇，二氯甲烷，不適用與二甲基甲酰胺；
醋酸纖維：不適用有機溶劑，特別適用水基溶液。
40.我wo原yuan來lai遇yu到dao個ge這zhe樣yang的de問wen題ti，一yi直zhi不bu知zhi道dao原yuan因yin。剛gang拿na柱zhu子zi做zuo，色se譜pu條tiao件jian是shi成cheng熟shu的de，絕jue對dui沒mei問wen題ti，但dan是shi該gai條tiao件jian下xia保bao留liu的de物wu質zhi變bian的de不bu被bei保bao留liu，比bi如ru，本ben來lai保bao留liu時shi間jian15分鍾卻怎麼調比例都是2～3分鍾就出峰了，維護後，下次再使用又正常了，什麼樣原因啊？
答：最大可能是發生相塌陷了。C18柱和高密鍵合封尾的C8柱，在高含水流動相下會發生相塌陷，後果就是保留能力大幅下降。用有機相比例較高的流動相衝洗後，又可恢複正常性能。
41.UPLC色譜柱可以反衝嗎？HPLC的色譜柱可以簡單反衝，但是，UPLC的色譜柱.也是一樣的嗎？如果壓力偏高，該怎麼辦？
答：如果兩端篩板孔徑對稱，UPLC柱應該也是可以反衝的。發現壓力偏高，當然也可以用反衝清洗的方法維護，UPLC柱和普通色譜柱比，隻是壓力高一點，不應該有什麼特殊吧。
42.常規LC的柱子粒度小，柱效高，現在有3.5μm的常規柱，不知道用3.5μm*250的壓力與4.6μm的壓力相差多少？
答：一般柱子4.6mm×250mm指的是其內徑和長度。粒徑才用μm的單位，但一般標的是5μm，也有3.5μm的。其它條件一樣，光粒徑是3.5μm和5μm的柱壓差別，理論上3.5μm柱子的柱壓是5μm柱子的(5/3.5)平方倍數，即，2.04倍，簡單說就是2倍。
43.因為，不知道流動相已走完，液相色譜柱空走了大概一晚上，請問這種情況下柱子還能用嗎？如果可以應該如何再生？
答：能用的！可ke能neng柱zhu子zi裏li會hui有you氣qi泡pao進jin去qu，但dan之zhi後hou，多duo用yong流liu動dong相xiang衝chong衝chong，看kan到dao基ji線xian穩wen定ding，就jiu沒mei問wen題ti了le。用yong色se譜pu柱zhu的de保bao存cun液ye低di流liu速su長chang時shi間jian衝chong洗xi，然ran後hou，再zai檢jian測ce一yi下xia柱zhu效xiao，看kan柱zhu子zi是shi否fou恢hui複fu，液ye相xiang最zui好hao設she置zhi一yi下xia最zui低di壓ya限xian，這zhe樣yang就jiu不bu怕pa流liu動dong相xiang走zou光guang而er會hui損sun傷shang色se譜pu柱zhu。
44.在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)時(shi)候(hou)，如(ru)果(guo)整(zheng)個(ge)時(shi)間(jian)程(cheng)序(xu)越(yue)長(chang)，保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)越(yue)差(cha)，尤(you)其(qi)是(shi)後(hou)出(chu)的(de)峰(feng)重(zhong)現(xian)性(xing)差(cha)更(geng)明(ming)顯(xian)，我(wo)猜(cai)估(gu)計(ji)是(shi)流(liu)量(liang)本(ben)身(shen)的(de)誤(wu)差(cha)引(yin)起(qi)的(de)，但(dan)是(shi)怎(zen)麼(me)盡(jin)量(liang)避(bi)免(mian)這(zhe)種(zhong)情(qing)況(kuang)的(de)出(chu)現(xian)，使(shi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)重(zhong)現(xian)性(xing)更(geng)好(hao)？
答：這個要控製好環境溫度和柱溫，易揮發的流動相要適當密封，同時，保留時間的漂移與儀器的精度也有關係。
45.我對聚苯乙烯-二乙烯苯柱很有興趣，主要是它耐高溫、耐酸堿、但有關這方麵的文獻很少，但對於他的分離效能我一直心裏沒底，我的問題有三：
1）分離效果與ODS比較，是相當呢，還是更勝一籌，或是更差？
2）我原以為它是整體住，但看過資料後發現也是顆粒的比如，5μ，請問該類型的柱是否符合速率理論、是不是粒徑越小分離效果會幾何級的增加？
3）問什麼沒有1.7μ的這種柱出現呢？
答：聚合物基質色譜柱的優點你已經提到了，它的缺點有：對(dui)小(xiao)分(fen)子(zi)分(fen)離(li)的(de)柱(zhu)效(xiao)相(xiang)對(dui)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質(zhi)色(se)譜(pu)柱(zhu)要(yao)低(di)，表(biao)麵(mian)衍(yan)生(sheng)化(hua)修(xiu)飾(shi)也(ye)沒(mei)有(you)在(zai)矽(gui)膠(jiao)表(biao)麵(mian)豐(feng)富(fu)，機(ji)械(xie)強(qiang)度(du)低(di)耐(nai)壓(ya)性(xing)不(bu)好(hao)，還(hai)有(you)碰(peng)到(dao)某(mou)些(xie)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)會(hui)溶(rong)脹(zhang)等(deng)。。。
聚合物基質柱當然也符合速率理論！tazhuxiaodizhuyaoshiyinwei，fenxiwuzaijuhewugudingxiangzhongdechuanzhisudubizaiguijiaobiaomiangudingxiangzhongmanhenduo。buguolijingyuexiaozhuxiaojihejizengjiadeguilvhaishiyoude。1.7μm的矽膠基質填料也是最近幾年才商品化，1.7μmdejuhewujizhimeichulaiyezhengchang，huoxuyongyuandoubuchulaile，yinwei，juhewunaiyacha，lijingzuozhemexiao，tagenbenchengshoubulezhegegaoyaba，danyuanyihouhuiyounengkanggaoyadejuhewutianliaoyanjiuchulai。
46.我wo之zhi前qian有you了le解jie過guo手shou性xing色se譜pu柱zhu，之zhi前qian買mai過guo大da賽sai璐lu的de手shou性xing柱zhu，其qi手shou性xing柱zhu價jia格ge相xiang比bi普pu通tong反fan相xiang色se譜pu柱zhu，要yao高gao出chu很hen多duo倍bei，不bu知zhi道dao是shi本ben身shen柱zhu子zi裝zhuang填tian技ji術shu的de難nan度du大da還hai是shi其qi他ta什shen麼me原yuan因yin？它ta的de主zhu要yao技ji術shu關guan鍵jian在zai什shen麼me方fang麵mian？
答：shouxingzhujishuguanjianzaiyushouxingtianliaodekaifa，dasailugongsizaishouxingtianliaodeshengchanjishufangmianshenqinglezhuanlibaohu，biedechangshangbunengshengchan，daozhishouxingzhujiagejugaobuxia。qianjinianchuanshuogaigongsidezhuanlibaohuqixiankuaidaole，guojiguoneiyouxiegongsijiuxiangzhefangzhishengchan。houlaiyoutingshuozhuanlihaimeidaoqi，qingkuangbuming。
47.“樣品與離子對生成緊密的結合物，離子對試劑掩藏化合物中的極性基團”這句話是什麼意思？離子對怎麼樣掩蔽化合物中極性基團？不就是通過靜電引力的作用形成離子締合物，來降低其極性的嗎？
答：離子對色譜是解決強極性物質在反相色譜中保留能力不足的一個有效的途徑。有些堿性極性物質，即使用100%水相做流動相，且無論在色譜柱能承受的pH範圍內怎麼去調節pH，保bao留liu能neng力li都dou不bu夠gou。如ru果guo需xu要yao分fen離li的de組zu分fen中zhong全quan是shi可ke以yi離li子zi態tai存cun在zai的de，那na還hai可ke以yi選xuan擇ze離li子zi交jiao換huan色se譜pu進jin行xing分fen離li。不bu然ran的de話hua，就jiu隻zhi有you選xuan擇ze離li子zi對dui色se譜pu方fang法fa了le，盡jin管guan它ta有you流liu傳chuan的de那na麼me多duo副fu作zuo用yong存cun在zai。
離子對試劑含親水基和疏水基，很像表麵活性劑，所以一開始離子對色譜也稱為“皂色譜”。離(li)子(zi)對(dui)作(zuo)用(yong)的(de)機(ji)理(li)有(you)兩(liang)種(zhong)解(jie)釋(shi)，你(ni)上(shang)麵(mian)都(dou)已(yi)經(jing)提(ti)到(dao)了(le)。到(dao)底(di)是(shi)哪(na)種(zhong)解(jie)釋(shi)對(dui)，尚(shang)無(wu)定(ding)論(lun)，實(shi)際(ji)上(shang)也(ye)沒(mei)必(bi)要(yao)去(qu)定(ding)論(lun)，反(fan)正(zheng)兩(liang)種(zhong)解(jie)釋(shi)都(dou)通(tong)就(jiu)可(ke)以(yi)了(le)。主(zhu)流(liu)的(de)解(jie)釋(shi)也(ye)是(shi)你(ni)先(xian)提(ti)到(dao)的(de)機(ji)理(li)，下(xia)麵(mian)示(shi)意(yi)圖(tu)更(geng)直(zhi)觀(guan)：
我個人認為，兩種機理都可能存在，要看離子對試劑、固(gu)定(ding)相(xiang)和(he)分(fen)析(xi)物(wu)這(zhe)三(san)者(zhe)本(ben)身(shen)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)。如(ru)果(guo)離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑(ji)的(de)疏(shu)水(shui)端(duan)和(he)固(gu)定(ding)相(xiang)之(zhi)間(jian)的(de)結(jie)合(he)力(li)相(xiang)對(dui)更(geng)強(qiang)，示(shi)意(yi)圖(tu)的(de)作(zuo)用(yong)機(ji)理(li)會(hui)占(zhan)上(shang)風(feng)。反(fan)之(zhi)，離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑(ji)親(qin)水(shui)端(duan)和(he)分(fen)析(xi)物(wu)導(dao)致(zhi)掩(yan)藏(zang)極(ji)性(xing)端(duan)的(de)作(zuo)用(yong)力(li)更(geng)強(qiang)，你(ni)後(hou)麵(mian)提(ti)到(dao)的(de)機(ji)理(li)更(geng)可(ke)能(neng)。總(zong)之(zhi)，要(yao)看(kan)你(ni)用(yong)的(de)什(shen)麼(me)離(li)子(zi)對(dui)試(shi)劑(ji)，是(shi)何(he)種(zhong)的(de)分(fen)析(xi)物(wu)等(deng)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)不(bu)同(tong)而(er)不(bu)同(tong)吧(ba)。
48.我(wo)們(men)在(zai)用(yong)的(de)氨(an)基(ji)柱(zhu)時(shi)，有(you)時(shi)候(hou)峰(feng)型(xing)突(tu)然(ran)變(bian)寬(kuan)，有(you)拖(tuo)尾(wei)，用(yong)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)就(jiu)又(you)好(hao)了(le)，不(bu)明(ming)白(bai)是(shi)什(shen)麼(me)原(yuan)因(yin)造(zao)成(cheng)的(de)，如(ru)果(guo)要(yao)再(zai)生(sheng)氨(an)基(ji)柱(zhu)的(de)時(shi)候(hou)應(ying)該(gai)怎(zen)麼(me)做(zuo)呢(ne)？是(shi)像(xiang)您(nin)先(xian)前(qian)回(hui)答(da)的(de)問(wen)題(ti)中(zhong)提(ti)到(dao)的(de)，用(yong)一(yi)定(ding)比(bi)例(li)的(de)氨(an)水(shui)衝(chong)洗(xi)嗎(ma)？氨(an)基(ji)柱(zhu)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)用(yong)純(chun)水(shui)衝(chong)洗(xi)嗎(ma)？記(ji)得(de)當(dang)時(shi)買(mai)的(de)氨(an)基(ji)柱(zhu)那(na)個(ge)使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)上(shang)說(shuo)不(bu)能(neng)用(yong)純(chun)水(shui)衝(chong)？是(shi)這(zhe)樣(yang)的(de)嗎(ma)？如(ru)果(guo)可(ke)以(yi)衝(chong)的(de)話(hua)，一(yi)般(ban)衝(chong)多(duo)久(jiu)？
答：氨基柱的矽膠孔內的氨基濃度非常高（大約有1mol/L），在有水存在的時候，在孔內形成一個pH=10左右甚至超過10的很強的堿性小環境，並會導致矽膠基體慢慢溶解。不過矽膠基體的溶解會生成酸性的矽醇基，又會降低孔內的pH值(zhi)，延(yan)緩(huan)矽(gui)膠(jiao)基(ji)體(ti)的(de)溶(rong)解(jie)進(jin)程(cheng)。一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)後(hou)，兩(liang)個(ge)相(xiang)反(fan)的(de)過(guo)程(cheng)會(hui)達(da)成(cheng)一(yi)個(ge)動(dong)態(tai)平(ping)衡(heng)，從(cong)而(er)穩(wen)定(ding)下(xia)來(lai)。對(dui)你(ni)問(wen)題(ti)提(ti)到(dao)的(de)這(zhe)個(ge)現(xian)象(xiang)，我(wo)想(xiang)到(dao)的(de)是(shi)這(zhe)個(ge)原(yuan)因(yin)。
氨基柱，要看氨基柱的應用模式，是正相還是HILIC？這兩種模式的情況是大不相同的。正相使用，一般很怕有水，但HILIC模式應用，一般流動相是乙腈/水，是不怕水的。buguo，jianheanbingjijituanfeichangrongyishuijie，suoyiyibananjizhubushiyibaocunyoushuiderongjizhong。zuoweizhengxiangyingyongshi，liudongxiangzhongyaoqiuyidiandoubunenghanshui，danqingxizhuzishangdewuranwuzhi，shikeyihanshuide，yinwei，shuiyouqiangjixing，zaizhengxiangsepushangxituonenglijiqiang，dangranbubiyong100%純水。氨基柱具體衝洗方法，正相條件按照正相矽膠柱的清洗方法，HILIC模式按C18柱的清洗方法。
49.采用國標用C18柱測定辣椒精辣度，將辣椒精中添加吐溫係列乳化劑做成水溶辣椒精，請問乳化劑對C18柱是否有影響？
答：乳化劑和離子對試劑類似，有極性端和非極性端，肯定會對C18柱有影響。不過，如果辣椒精是極性物質，乳化劑的存在可以提高其在C18柱上的保留能力。
50.gongsianzhaoguobiaocedinglajiaohongsesuzhongsudanhonghanliang，biaopinfenlihenhao，fengyebucuo，danshi，lajiaohongsesuyouyugensudanhongxingzhihenxiangsi，qieyansejiaoshen，fenlixiaoguohencha，shoudelvhendi，cedingjieguopianchahenda。gairuhechuliyangpin？sesushifouhuijiangdizhuxiao？
答：色素不會降低柱效，但，辣椒紅色素主峰濃度過大，會影響與臨近雜質峰的分離。可考慮稀釋樣品或試試用柱效更高的柱子。
51.通常我們在分析天然藥物成分的時候結構複雜，無法考察組分的PKa值，哪我們如何去選擇最合適的流動相或者是拖尾該怎麼改善呢？
答：如果天然產物中沒有易電離的極性基團，就不需要用緩衝鹽調節pH。如果，天然產物中既有酸性基團，也有堿性基團，譬如，有pKa=6.2的羧基和pKa=9.0的氨基的兩性物質，建議將pH用磷酸鹽緩衝鹽控製在2.4（如果是，諸如月旭的Ultimate LP-C18這樣的耐酸色譜柱，還可以調得更低）。
如果pH控製在6.2～9.0之間，兩個基團都處於離子態，保留能力最差，是最不可取的。如果不清楚複雜物質中含有什麼基團，也請將pH調到2.4或更低。因為pH調低，起碼抑製了酸性基團的電離而處於中性分子狀態，而增加酸性基團這個部分在反相色譜中的保留能力；另外，低pH還抑製了矽醇基的活性，有利於獲取對稱的峰形。
情況不明時候，為什麼不建議調高pH呢？一方麵一般色譜柱都不能承受pH=9以上的條件。
52.記得以前拿到C18zhu，huiyongjiachuncongxiaoliuliangdaodaliuliangmanmanhuohua，zheyangzuodemudeshishenmene？shixianyongrongjihuohuama？ranhouzaiyongyangpin？haiyoucedingduantaizongshichongchulai，gaizenmejiejuene？jiushiherongjifengchuzaiyiqi，huozhechuzairongjifengzhiqian。
答：C18柱(zhu)，會(hui)用(yong)甲(jia)醇(chun)從(cong)小(xiao)流(liu)量(liang)到(dao)大(da)流(liu)量(liang)慢(man)慢(man)活(huo)化(hua)，因(yin)為(wei)，色(se)譜(pu)柱(zhu)到(dao)達(da)用(yong)戶(hu)手(shou)中(zhong)時(shi)，時(shi)間(jian)長(chang)短(duan)不(bu)一(yi)，在(zai)存(cun)儲(chu)和(he)運(yun)輸(shu)的(de)過(guo)程(cheng)中(zhong)，可(ke)能(neng)存(cun)儲(chu)液(ye)有(you)些(xie)揮(hui)發(fa)，低(di)流(liu)速(su)的(de)甲(jia)醇(chun)可(ke)以(yi)很(hen)好(hao)的(de)浸(jin)潤(run)固(gu)定(ding)相(xiang)，使(shi)鍵(jian)合(he)相(xiang)很(hen)好(hao)的(de)伸(shen)展(zhan)，用(yong)溶(rong)劑(ji)平(ping)衡(heng)好(hao)係(xi)統(tong)後(hou)，可(ke)以(yi)采(cai)取(qu)多(duo)次(ci)進(jin)樣(yang)或(huo)者(zhe)加(jia)大(da)進(jin)樣(yang)量(liang)的(de)方(fang)式(shi)以(yi)更(geng)快(kuai)的(de)獲(huo)得(de)重(zhong)現(xian)的(de)色(se)譜(pu)圖(tu)，這(zhe)樣(yang)用(yong)樣(yang)品(pin)將(jiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)中(zhong)的(de)活(huo)化(hua)點(dian)飽(bao)和(he)，就(jiu)不(bu)會(hui)出(chu)現(xian)異(yi)常(chang)色(se)譜(pu)現(xian)象(xiang)的(de)情(qing)況(kuang)。
53.C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性環境中，會對柱子有什麼損壞嗎？pH在2左右。
答：pH=2左右容易使鍵合在矽膠基質上的固定相水解流失，包括：C18hefengweishijideshuijie，fengweishijixiangduigengrongyishuijie。buzhidaonibaocundesuanxinghuanjingshibushihanyouhuanchongyan，ruguo，buhanhuanchongyan，zhishiduanqijitianbaocunzaisuanxingliudongxiangzhong，yebubiguofendanxin，zuiduoxiangdangyuzhejitianyizhizaishiyongzhegensepuzhu，yincijianshaojitiandeshiyongshoumingba；有緩衝鹽就麻煩一點，保存期間水分揮發可能會導致緩衝鹽結晶在柱內析出，對柱子損傷很大。
54.色譜柱的安裝有什麼技巧嗎？隻要保證不漏就行了嗎？還有所謂的死體積怎麼測定呢？
答：色(se)譜(pu)柱(zhu)安(an)裝(zhuang)技(ji)巧(qiao)不(bu)多(duo)，隻(zhi)要(yao)接(jie)頭(tou)和(he)柱(zhu)頭(tou)匹(pi)配(pei)，確(que)實(shi)擰(ning)緊(jin)不(bu)漏(lou)就(jiu)可(ke)以(yi)了(le)，但(dan)也(ye)要(yao)注(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)擰(ning)得(de)太(tai)緊(jin)以(yi)至(zhi)於(yu)損(sun)傷(shang)螺(luo)紋(wen)。所(suo)謂(wei)死(si)體(ti)積(ji)就(jiu)是(shi)完(wan)全(quan)不(bu)保(bao)留(liu)的(de)物(wu)質(zhi)出(chu)峰(feng)時(shi)從(cong)進(jin)樣(yang)到(dao)流(liu)過(guo)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)總(zong)體(ti)積(ji)，一(yi)般(ban)用(yong)極(ji)性(xing)非(fei)常(chang)強(qiang)的(de)尿(niao)嘧(mi)啶(ding)的(de)出(chu)峰(feng)來(lai)測(ce)定(ding)。死(si)體(ti)積(ji)包(bao)括(kuo)柱(zhu)體(ti)積(ji)（色譜柱內溶劑能占據的空腔體積）和柱外體積兩部分。
你從廠商這裏買到色譜柱，柱體積已經是固定了，你能盡量避免減少的是柱外體積。進樣器內死體積、毛細管長度、毛(mao)細(xi)管(guan)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)連(lian)接(jie)緊(jin)湊(cou)與(yu)否(fou)，保(bao)護(hu)柱(zhu)或(huo)在(zai)線(xian)濾(lv)器(qi)產(chan)生(sheng)的(de)死(si)體(ti)積(ji)大(da)小(xiao)，都(dou)對(dui)這(zhe)個(ge)有(you)影(ying)響(xiang)。樣(yang)品(pin)在(zai)柱(zhu)內(nei)，除(chu)擴(kuo)散(san)外(wai)，還(hai)有(you)和(he)填(tian)料(liao)作(zuo)用(yong)引(yin)起(qi)的(de)組(zu)分(fen)分(fen)離(li)；但樣品在柱外，那就隻有擴散這個使柱效下降的因素了。所以，要取得好的分離效率，柱外體積應該是越小越好。
fengyoushihouqianyan，youshihoutuowei，yibanbushisepuzhudewenti，yinggaishiyangpinhesepuzhutianliaodezuoyongwenti，keyishuoruguosepuzhuleixingxuanzemeiwenti，guanjianjiushiseputiaojiandexuanze。baokuojinyangliang、樣品溶劑、流動相組成（包括：添加劑）、流動相pHyijizhuwen，douduifengxingyouyingxiang。lingwai，cedingfenziliangjiaodadeduotai，yongyangpinlaohuapinghengsepuzhuhenzhongyao，fenziliangyuedadewuzhi，xuyaopinghengshijianyuechang。ruguozhuzimeipinghenghao，fengxingyekenenghuibuzhengchang。suoyizuihaobanijutidecedingtiaojianyelieyixia，yebianyuyouzhenduixingdefenxiyuanyin。
55.測ce定ding多duo肽tai樣yang品pin時shi，十shi幾ji肽tai或huo者zhe二er十shi幾ji肽tai時shi，有you時shi峰feng前qian延yan的de比bi較jiao厲li害hai，有you時shi峰feng拖tuo尾wei比bi較jiao厲li害hai，這zhe是shi什shen麼me原yuan因yin呢ne？是shi樣yang品pin的de問wen題ti還hai是shi柱zhu子zi的de問wen題ti？
答：fengyoushihouqianyan，youshihoutuowei，yibanbushisepuzhudewenti，yinggaishiyangpinhesepuzhutianliaodezuoyongwenti，keyishuoruguosepuzhuleixingxuanzemeiwenti，guanjianjiushiseputiaojiandexuanze，baokuo：進樣量、樣品溶劑、流動相組成（包括：添加劑）、流動相pHyijizhuwen，douduifengxingyouyingxiang，lingwai，cedingfenziliangjiaodadeduotai，yongyangpinlaohuapinghengsepuzhuhenzhongyao，fenziliangyuedadewuzhi，xuyaopinghengshijianyuechang。ruguozhuzimeipinghenghao，fengxingyekenenghuibuzhengchang。suoyizuihaobanijutidecedingtiaojianyelieyixia，yebianyuyouzhenduixingdefenxiyuanyin。
56.柱子的平衡時間跟填料關係大嗎？哪種最快，哪種最慢？因為我在做離子交換柱的時候平衡是相當的慢!
答：根據色譜速率理論，粒徑越小，柱效越高，而且當粒徑小到亞2微米左右時，線速度的提高，其分離度就不再降低，從而，改變了許久以來人們不得不在 “速度和分離度之間取舍”的局麵。
57.關於配置流動相，有機相我們可以甲醇乙腈同時用，這個是基於什麼考慮的？是不是根據甲醇乙腈選擇性不同、樣品在這個兩者的溶解度的差異以及調節洗流動相脫能力來考慮的？
答：甲醇和乙腈同時用，可以獲得單純的甲醇或者乙腈不一樣的選擇性，而且洗脫能力也會改變，根據多元流動相的強度因素Sab.....=Saψa+Sbψb=...Sa和Sb純溶劑a和b的溶劑強度因素；ψa、ψb分別為a和b的體積分數，所以，在藥典中有很多體係都使用甲醇乙腈體係。
58.三乙胺磷酸鹽緩衝液作流動相，柱壓一天比一天高，該怎麼樣解決？
答：把柱子再生下，再生的方法搜一下有很多反衝對絕大部分色譜柱都是可行的，效果不錯。
59.新出廠液相色譜柱，保護溶劑一般是什麼？怎樣進行平衡清洗比較好，一般要平衡多長時間比較好？
答：柱子類型不同，保存溶劑也會不一樣吧，具體要看說明書的說明。對於反相柱，一般用甲醇（乙腈）保存，也有用80%左右甲醇濃度的甲醇/水保存的。一般用流動相平衡衝洗10～20個柱體積即可。（注意：柱體積不等於空柱管體積，4.6×250mm的色譜柱空柱管體積是4.15mL，而柱體積隻有約2.5mL）
60.據說液相色譜柱柱壓達到一定高度就不能使用了，請問一般達到多高，用甲醇和乙腈是不是不一樣？
答：柱壓不是色譜柱不能使用的唯一因素，分離度才是最重要的。柱壓隻要沒高到儀器不能承受的地步，例如，超過300bar，就jiu可ke以yi一yi直zhi使shi用yong。甲jia醇chun的de粘zhan度du比bi乙yi腈jing高gao，同tong樣yang狀zhuang況kuang的de柱zhu子zi，如ru果guo用yong甲jia醇chun做zuo流liu動dong相xiang，柱zhu壓ya可ke能neng超chao了le，換huan用yong乙yi腈jing會hui使shi柱zhu壓ya下xia降jiang不bu少shao，儀yi器qi還hai能neng承cheng受shou。不bu過guo盡jin管guan柱zhu壓ya還hai沒mei上shang升sheng到dao接jie近jin400Bar的限定，如果，發現柱壓上升速度較快，也需要及早對柱子進行清洗維護，從根本上排除導致柱壓上升的源頭。
61.柱塞板可不可拆下用超聲波清洗，會有什麼不良後果？
答：不(bu)建(jian)議(yi)將(jiang)柱(zhu)篩(shai)板(ban)拆(chai)下(xia)清(qing)洗(xi)，因(yin)為(wei)，拆(chai)下(xia)承(cheng)壓(ya)的(de)柱(zhu)篩(shai)板(ban)會(hui)導(dao)致(zhi)柱(zhu)床(chuang)發(fa)生(sheng)變(bian)化(hua)，影(ying)響(xiang)色(se)譜(pu)性(xing)能(neng)。應(ying)該(gai)對(dui)汙(wu)染(ran)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)先(xian)進(jin)行(xing)清(qing)洗(xi)維(wei)護(hu)，維(wei)護(hu)沒(mei)有(you)效(xiao)果(guo)，再(zai)把(ba)拆(chai)洗(xi)柱(zhu)篩(shai)板(ban)作(zuo)為(wei)最(zui)後(hou)的(de)手(shou)段(duan)。
62.一般正常使用一個C18柱能用多長時間？
答：柱壽命一般不按時間計算，按持續進樣針數比較科學。一般正常使用維護，不超過pH和溫度等範圍，C18柱能達到500～2000針進樣的壽命，視樣品幹淨程度的不同而不同。
63.超高壓快速高分離度色譜柱是不是未來液相色譜柱普及應用的一個發展趨勢？
答：這(zhe)是(shi)個(ge)大(da)話(hua)題(ti)，今(jin)後(hou)使(shi)用(yong)，會(hui)越(yue)來(lai)越(yue)多(duo)是(shi)肯(ken)定(ding)的(de)，但(dan)是(shi)否(fou)會(hui)替(ti)代(dai)普(pu)通(tong)壓(ya)力(li)的(de)液(ye)相(xiang)還(hai)有(you)爭(zheng)議(yi)。超(chao)高(gao)壓(ya)也(ye)有(you)使(shi)用(yong)上(shang)的(de)不(bu)便(bian)，譬(pi)如(ru)容(rong)易(yi)堵(du)，對(dui)設(she)備(bei)硬(ying)件(jian)要(yao)求(qiu)高(gao)等(deng)。有(you)機(ji)會(hui)我(wo)再(zai)談(tan)談(tan)超(chao)高(gao)壓(ya)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)方(fang)麵(mian)詳(xiang)細(xi)的(de)一(yi)些(xie)情(qing)況(kuang)。
64.如果液相色譜譜圖基線漂移很大是不是柱子的問題？波長越小的越大，270nm的還不怎麼能看出來，230nm的就非常厲害了，有可能是什麼原因造成的？
答：有可能是你的流動相的問題，230可能已經快到你流動相的截止波長了，當然，紫外吸收強，基線漂移厲害。
65.我們有一台waters1525色(se)譜(pu)儀(yi)，最(zui)近(jin)基(ji)線(xian)總(zong)是(shi)呈(cheng)現(xian)波(bo)浪(lang)形(xing)很(hen)有(you)規(gui)律(lv)，波(bo)長(chang)越(yue)小(xiao)越(yue)明(ming)顯(xian)，梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)向(xiang)上(shang)飄(piao)逸(yi)而(er)且(qie)後(hou)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)呈(cheng)現(xian)波(bo)浪(lang)形(xing)，很(hen)影(ying)響(xiang)分(fen)析(xi)，我(wo)想(xiang)問(wen)一(yi)下(xia)，是(shi)不(bu)是(shi)柱(zhu)子(zi)的(de)原(yuan)因(yin)，用(yong)的(de)是(shi)C18上海安普的？
答：應該是流動相組成變引起吸收本底變化造成的，特別是在波長小的時候，乙腈的截止波長低於200nm，但dan甲jia醇chun和he水shui相xiang對dui比bi較jiao高gao，在zai低di波bo長chang時shi，甲jia醇chun和he水shui有you一yi定ding的de本ben底di吸xi收shou。梯ti度du進jin行xing時shi，隨sui著zhe不bu同tong本ben底di的de組zu分fen含han量liang的de變bian化hua，基ji線xian也ye會hui有you相xiang應ying的de波bo動dong。
66.我是做農藥殘留分析的，用的是UV2487檢測器，想問一下，C18色譜柱用什麼緩衝液比較好，我以前做三聚氰胺是用檸檬酸，辛烷磺酸鈉，也用農藥檢測行不行？還有用HLB柱能不能去除蔬菜和水果中的雜質？
答：C18色譜柱用用磷酸鹽，醋酸鹽就比較好啊，離子對試劑不是個好東東，你要慎用。我們做三聚氰胺用三氯乙酸。
67.液相色譜柱一般使用壽命多長？不同類型的色譜柱是否壽命也不一樣？液相色譜柱與氣相的柱子有何區別呢？
答：液相色譜柱一般使用壽命多長！我有一根柱子，用了大約1年nian半ban左zuo右you，發fa現xian同tong樣yang濃nong度du的de樣yang品pin它ta的de峰feng展zhan寬kuan了le。說shuo明ming柱zhu效xiao下xia降jiang。但dan是shi不bu影ying響xiang結jie果guo。因yin為wei峰feng麵mian積ji還hai是shi接jie近jin。所suo以yi做zuo色se譜pu之zhi前qian先xian做zuo下xia柱zhu子zi性xing能neng測ce試shi。第di一yi次ci的de圖tu譜pu要yao保bao留liu。 測試C18RP柱，一般用到萘作為柱子的柱效判斷。一般是18000片，對稱性（usp）0.95～1.05間。
68.①“水相”指的是什麼？純水？②我們實驗室的CN基柱保存在40%的乙腈裏麵，這個有不良後果嗎？
答：水相就是純水。CN基不適合保存在中等極性的溶劑中，除了可以低溫保存在極性較大的純水中外，還有可以保存在非極性溶劑如正己烷中。40%乙腈水，屬於中等極性溶劑，短期過夜保存可能問題不大，長期保存不太好，後果就是可能會發生柱床坍塌。
69.CN基柱應該怎樣維護才好呢？比如，做完實驗用什麼流動相衝柱子、短期用什麼溶劑保存、長期用什麼溶劑保存等。
答：CN可作正相柱，也可作反相柱用，除了保存溶劑有特殊要求外，其它維護辦法和一般正相和反相柱沒有多大區別。
70.我們是waters的分析儀，用其他家的柱子可不可以？
答：你用Waters的儀器，而開始也用的是Waters柱zhu子zi，如ru果guo是shi用yong不bu鏽xiu鋼gang接jie頭tou，匝za扣kou的de位wei置zhi就jiu固gu定ding了le。如ru果guo用yong其qi他ta家jia的de柱zhu子zi，可ke以yi把ba固gu定ding匝za扣kou位wei置zhi的de那na段duan剪jian掉diao，換huan一yi個ge新xin的de匝za扣kou就jiu可ke以yi重zhong新xin固gu定ding匝za扣kou位wei置zhi。當dang然ran，如ru果guo你ni已yi換huan成chengpeek接頭，問題就不會很大。
71.色譜柱的接頭，出口處用的是peek接頭，請問都用peek接頭不行麼，為什麼？
答：都用peek接頭我認為都可以的，當然，peek接頭的質量要過關。有人認為peek接頭不耐壓，估計是針對品質不好的產品說的。
72.我們的液相，為了節約成本我們自己填保護柱，用廢的同型號柱子填。但填完以後做標樣定量分析有所改變。請問其原因。
答：不(bu)建(jian)議(yi)自(zi)己(ji)填(tian)保(bao)護(hu)柱(zhu)柱(zhu)芯(xin)，填(tian)得(de)不(bu)好(hao)的(de)柱(zhu)芯(xin)會(hui)影(ying)響(xiang)分(fen)離(li)效(xiao)果(guo)，也(ye)會(hui)影(ying)響(xiang)定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)結(jie)果(guo)。你(ni)不(bu)知(zhi)道(dao)廢(fei)柱(zhu)子(zi)裏(li)的(de)填(tian)料(liao)是(shi)不(bu)是(shi)受(shou)了(le)汙(wu)染(ran)，另(ling)外(wai)你(ni)填(tian)的(de)柱(zhu)芯(xin)肯(ken)定(ding)沒(mei)有(you)廠(chang)商(shang)填(tian)得(de)好(hao)，如(ru)果(guo)影(ying)響(xiang)到(dao)峰(feng)形(xing)，峰(feng)麵(mian)積(ji)積(ji)分(fen)結(jie)果(guo)有(you)所(suo)改(gai)變(bian)是(shi)可(ke)能(neng)的(de)。
73.請問怎麼測柱效？（柱子填料是Sino Chrom ODS-BP 5μm，規格4.6mm×200mm）
答：測定柱效不同公司不一樣，有用甲苯，也有用萘的。一般柱子裏麵有檢測報告，你按照報告裏的方法做一遍就可以。
74.我wo用yong苯ben試shi了le一yi下xia，峰feng性xing大da大da好hao，但dan是shi，不bu知zhi道dao理li論lun塔ta板ban數shu，不bu知zhi道dao怎zen麼me評ping價jia，感gan覺jiao不bu大da好hao，對dui稱cheng性xing不bu好hao，有you點dian前qian延yan，柱zhu子zi才cai用yong了le四si個ge月yue，是shi什shen麼me原yuan因yin呢ne？是shi不bu是shi塌ta陷xian了le呢ne？有you什shen麼me補bu救jiu的de辦ban法fa嗎ma？
答：yonglesigeyuefengxingtuoweishihenzhengchangde，xuyaoweihuqingxiyixiasepuzhuyiqingchuyinqituoweidezhutouwuran。ruguozhutoutaxian，zebuhaoban，congqitafeizhuziliqudiantianliaotianbutaxian，keyiyishi，danxiaoguobuyidinghao。sepuzhushihaocai，cedingjinyangzhenshuruguodadao500以上了，也算是物有所值，物盡其用了，報廢了也不可惜。
75.liudongxianglizhiqianyousuande，zuowanhoudanchunyongyijingchongxi，nengbasuanchongxiganjingma？zhiqian，tamenshizheyangchongde，xianzaihuaiyizhuzitaxianle，huibuhuishichangshijianzaisuanxinghuanjingzhongzaochengdene？
答：流動相裏有酸，應該先用純水或80：20的水/乙腈溶劑衝洗吧。如果，一直在酸性環境，固定相容易流失，造成保留時間前移和其它色譜性能下降。
76.我前一段時間做三聚氰胺用C18色譜響應值很小，幾乎無法檢測，可是檢測標準就是用的C18，後來我用RP18結果響應值很好，不知道什麼原因，請問這兩個柱子不都是反相色譜柱麼？他倆之間有什麼不同？
答：RP18就是C18吧，不過C18柱之間也有區別，測定三聚氰胺一般要用極性比較大的水性C18柱。
77.磺化交聯的苯乙烯-二乙烯基共聚物為填充劑的色譜柱在儲存過程未注意放在冰箱中，導致發黴後，柱效急劇下降，能何種方法將此色譜柱修複好？
答：聚合物柱子因為不怕酸堿，就直接用強酸強堿清洗。如果是H型，用1M硫酸衝洗；如果是Ca型，可以先用1M硫酸衝洗，再用EDTA鈣鹽轉換回Ca型柱；如果是中性的聚合物反相柱，直接用1M的NaOH衝洗。
78.我有一個標準的穩定性檢測分析方法它是建立在某一供應商的碳18柱上我知道有另一個廠家生產同樣的碳18柱但價錢是它的一半如果我更換柱子會不會影響到分析方法。。。
答：要看這一分析方法的具體要求。如果方法中有說明“使用某一色譜柱或與其同樣的柱子，”那麼，就可以使用別的柱子來替換。但要注意，不能光看一個柱子標為碳18柱，或是其宣傳等價於某某柱，就認為該柱適用於所有方法。必須要驗證色譜柱的等價性。
我(wo)們(men)需(xu)要(yao)考(kao)查(zha)使(shi)用(yong)新(xin)柱(zhu)子(zi)時(shi)，係(xi)統(tong)適(shi)應(ying)性(xing)是(shi)否(fou)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)驗(yan)證(zheng)。如(ru)果(guo)可(ke)以(yi)獲(huo)得(de)係(xi)統(tong)適(shi)用(yong)性(xing)測(ce)試(shi)中(zhong)所(suo)要(yao)求(qiu)的(de)保(bao)留(liu)值(zhi)，分(fen)離(li)度(du)以(yi)及(ji)其(qi)它(ta)參(can)數(shu)等(deng)，就(jiu)可(ke)以(yi)使(shi)用(yong)該(gai)柱(zhu)。推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)係(xi)統(tong)適(shi)用(yong)性(xing)測(ce)試(shi)樣(yang)品(pin)以(yi)及(ji)其(qi)它(ta)的(de)典(dian)型(xing)樣(yang)品(pin)來(lai)進(jin)行(xing)考(kao)查(zha)，以(yi)保(bao)證(zheng)雜(za)質(zhi)和(he)降(jiang)解(jie)物(wu)在(zai)正(zheng)確(que)的(de)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)出(chu)峰(feng)並(bing)給(gei)出(chu)正(zheng)確(que)的(de)濃(nong)度(du)響(xiang)應(ying)；並且在新柱子上獲得的分析結果要等價於在原柱子上的結果。
79.請問我做一種藥的分析查美國藥典規定使用100mm×40mm，8μm的色譜柱流速3mL/min可現在市場上已不容易找到這種規格的產品於是我按USP中色譜柱比較的數據庫的指引選了一款選擇性一致的等價色譜柱其規格是100mm×46mm，3μm的色譜柱當選用3mL/min的流速時發現柱壓超高請問我如何對方法進行調整以滿足USP的要求？
答：流速調整原則是流動相通過柱子的線速度一致，等價柱的截麵積大了，流速也應增加才能保持相同的線速度。新流速計算結果是：（4.6/4.0）2×3.0=4.0mL/min。但3mL/min流速都已導致柱壓太高，4.0mL/min明顯不行。好在USP還有個允許±50%的流速調整指導原則，這樣將流速調至2.0mL/min既符合USP規定，又能使柱壓降到可接受的範圍，但這種改變不能引起其它不好後果。
這個例子中，等度分析中，流速改變會引起塔板數和峰寬的改變，但不會影響峰的選擇性。3μm粒徑色譜柱柱效比8μm的高很多，可考慮縮短柱長以補償或部分補償流速降低造成的測定時間增加。所以，更佳選擇是50mm×4.6mm，3μm的柱子，2.0ml/min的流速運行，可以在符合USP規定的情況下，又得到更快速的測定分離。
80.最近我非常的沮喪，按照藥典上的色譜條件和方法做某藥物的分析，卻始終得不到滿意的結果。有人建議我對色譜條件，如進樣量、流動相pH和溫度等，進行微調以得到良好的峰形和分離效果，可按公司規定我不能這樣做，怎麼辦？
答：如果你心裏老有這個思維定勢“按規定，我不能......”，然後什麼也不敢做，那真是不好辦！zhiyouquzuole，qushizhegaibiantiaojiankankandedaoshenmejieguo，nicainengfaxianwentisuozai。ruguogaibiantiaojianhou，rengdebudaohaojieguo，jiuyaoquzhaoseputiaojianyiwaideyuanyin，ru，sepuzhu、色譜儀器以及樣品和製樣過程中的是否存在問題？不管通過微調你是否取得了好結果，你也有了向領導彙報問題和解決方案的依據。
而且，絕對不能調整藥典規定色譜條件的說法通常是不對的。美國藥典USP說(shuo)的(de)是(shi)如(ru)果(guo)改(gai)變(bian)藥(yao)典(dian)方(fang)法(fa)需(xu)要(yao)重(zhong)新(xin)做(zuo)方(fang)法(fa)驗(yan)證(zheng)，但(dan)方(fang)法(fa)調(tiao)整(zheng)或(huo)者(zhe)稱(cheng)微(wei)調(tiao)以(yi)符(fu)合(he)係(xi)統(tong)適(shi)應(ying)性(xing)的(de)要(yao)求(qiu)是(shi)允(yun)許(xu)的(de)，是(shi)不(bu)需(xu)要(yao)重(zhong)新(xin)做(zuo)方(fang)法(fa)驗(yan)證(zheng)的(de)。USP列了調整的幾條指導原則，如，±50%的流速調整，±10°C的溫度調節等等（詳見"Chapter621，Chromatography，”，UnitedStates Pharmacopeia No.31-NF 26，(2008).）。當然既然是指導原則，這些規定都不是絕對的，如溫度調整±10°C，對有些方法適用，對另外的方法則±5°C的調整都會有問題，我們應該依據具體情況作出明智的科學判斷。
81.請問下HibarRT250-4這個柱子很特殊麼？為什麼很多藥典中的藥物分離都用它做柱子，因為才開始做藥，不知道hi，bar的柱子特點是什麼？
答：HibarRT250-4是Merk的一個品牌，不是很了解。大概是共用柱頭，可更換的柱管。
82.在堿性條件下矽膠溶解，又生成矽羥基的機理是什麼？反應方程式如何寫？
答：二氧化矽溶解的反應式是：
SiO2+2OH-=Si032-+H2O或者表示成水解的形式：SiO2+H2O=Si032-+2H+
這(zhe)說(shuo)明(ming)矽(gui)膠(jiao)會(hui)在(zai)堿(jian)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)溶(rong)解(jie)而(er)生(sheng)成(cheng)矽(gui)酸(suan)根(gen)，但(dan)，我(wo)們(men)這(zhe)裏(li)說(shuo)的(de)是(shi)矽(gui)膠(jiao)顆(ke)粒(li)表(biao)麵(mian)的(de)部(bu)分(fen)溶(rong)解(jie)，含(han)有(you)鍵(jian)合(he)固(gu)定(ding)相(xiang)的(de)矽(gui)膠(jiao)原(yuan)表(biao)麵(mian)溶(rong)解(jie)脫(tuo)落(luo)後(hou)，自(zi)然(ran)會(hui)生(sheng)成(cheng)新(xin)鮮(xian)的(de)矽(gui)膠(jiao)表(biao)麵(mian)，而(er)新(xin)鮮(xian)的(de)矽(gui)膠(jiao)表(biao)麵(mian)結(jie)構(gou)一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)含(han)有(you)矽(gui)羥(qiang)基(ji)的(de)。矽(gui)膠(jiao)基(ji)本(ben)結(jie)構(gou)單(dan)元(yuan)是(shi)Si-O-Si鍵，在OH-離子的作用下，Si-O鍵斷裂，在表麵形成Si-O-H矽羥基的結構單元。
必須指出的是，在氨基柱的孔內，並沒有單獨加入OH-離子，偏堿小環境的形成是由於氨基易和水電離生成的氫陽離子結合造成的遊離OH-離子的過剩。從第一個方程式角度解釋，遊離的OH-離子用完，矽膠就不再繼續溶解；從第二個水解形式方程式角度解釋：當矽膠水解生成的H+離子足夠用來和氨基結合時，水解過程就會變慢或停止。
83.同樣都是C18柱子，液相色譜柱和SPE他們之間有什麼區別，能具體講一下麼？
答：HPLC柱子和SPE小柱的對比：
對比項目 HPLC SPE
柱管 不鏽鋼管 塑料管
粒徑（um） 3，5，10 40-300
顆粒形狀 球形 一般為無定形
柱效（塔板數） 20-25000 <100
分離機理 連續洗脫 數字式開關洗脫
售價（元） 1000-4000 10-40
使用方式 可重複使用 一次性使用
操作成本 較高 低
設備成本 高 低
※對於C18固定相，為了提高回收率，SPE裏用的C18填料一般載碳量相對更高。
84.我從上麵了解到RP18和C18的區別是極性強一些，能問一下他們在分析農藥是可不可以通用？C18適用於那些農藥的分析？我查材料看到苯醚甲環唑都是用C18分析的，可我用C18分析發現響應值很小，沒法分析能幫忙分析一下原因麼？
答：RP18和普通C18，肯定有其不同的適應性，農藥種類這麼多，可能大部分農藥兩者都能用，有些就不一定。你問的C18shiyongyunaxienongyao，yinggaicongxiangguannongyaofenxifangmiandeshujishoucezhongkeyizhadaojutishenmenongyaoyongshenmeseputiaojianheshi，qizhonglimiankendingyouxuanzeshenmeleixingzhuzi，wozhebianmeibanfayiyilieju。yexiangsepuzhong，60%以上的分析物可以用C18柱，我想也應該有60%以上的農藥可以用C18柱。
如(ru)果(guo)手(shou)冊(ce)或(huo)文(wen)獻(xian)中(zhong)查(zha)不(bu)到(dao)，你(ni)把(ba)農(nong)藥(yao)作(zuo)為(wei)普(pu)通(tong)分(fen)析(xi)物(wu)來(lai)對(dui)待(dai)，然(ran)後(hou)按(an)照(zhao)一(yi)般(ban)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)選(xuan)擇(ze)和(he)方(fang)法(fa)建(jian)立(li)原(yuan)則(ze)來(lai)做(zuo)就(jiu)可(ke)以(yi)，選(xuan)擇(ze)決(jue)定(ding)因(yin)素(su)應(ying)該(gai)也(ye)是(shi)農(nong)藥(yao)分(fen)子(zi)的(de)結(jie)構(gou)。苯(ben)醚(mi)甲(jia)環(huan)唑(zuo)，應(ying)該(gai)含(han)有(you)極(ji)性(xing)基(ji)團(tuan)，可(ke)以(yi)試(shi)試(shi)極(ji)性(xing)強(qiang)的(de)C18柱。
85.我在用乙腈作流動相時，隻要那個乙腈比例稍高一點，比如，20%，即使，測量波長高於乙腈截止波長比較多，也會產生比較大的溶劑峰，這怎麼回事？
答：ruguochuxianrongjifeng，duinidefenxijieguomeirenheyingxiang，najiurangrongjifengzainaerhaole，huozheniyongguidingderongjirongjietiquyangpinhou，zaiyongliudongxiangxishiyixiayangpin，ruguo，xishihoujiancexiannengdadaodehua。
86.我在做一個模擬胃內容物中藥物反應試驗，需要動態測定某藥品含量變化。分析時碰到一個棘手問題，進樣量同樣用20μL，用對照品pin進jin樣yang時shi色se譜pu峰feng形xing不bu錯cuo，進jin樣yang品pin時shi卻que一yi直zhi不bu能neng得de到dao好hao的de峰feng形xing。後hou來lai分fen析xi是shi模mo擬ni胃wei內nei容rong物wu樣yang品pin的de酸suan度du過guo高gao的de因yin素su，可ke我wo通tong過guo稀xi釋shi的de方fang法fa讓rang樣yang品pin酸suan度du和he流liu動dong相xiang接jie近jin，雖sui然ran峰feng形xing沒mei問wen題ti了le，卻que發fa現xian因yin稀xi釋shi導dao致zhi分fen析xi物wu在zai樣yang品pin中zhong含han量liang下xia降jiang，低di於yu最zui低di檢jian測ce限xian了le，如ru何he是shi好hao呢ne？
答：稀xi釋shi很hen方fang便bian，但dan靈ling敏min度du更geng高gao的de檢jian測ce器qi不bu容rong易yi找zhao，不bu過guo還hai是shi有you個ge簡jian單dan的de解jie決jue方fang案an。當dang用yong流liu動dong相xiang稀xi釋shi樣yang品pin時shi，隻zhi要yao稀xi釋shi後hou樣yang品pin中zhong有you機ji相xiang含han量liang比bi流liu動dong相xiang中zhong的de有you機ji相xiang比bi例li低di10個百分點以上（如，流動相中甲醇含量是40%，則樣品中甲醇含量一定要低於30%），樣品流動會被色譜柱進口端延緩或阻擋，稱為“柱上富集”。由於“柱上富集”作用的存在，這種情況下進行大體積樣品進樣，可避免樣品溶劑組成和流動相一樣時進樣量過大產生的“峰展寬”。針對你提的這個實例，可用稀的NaOH溶液調節樣品pH和流動相匹配，並將樣品最終稀釋一倍。將進樣量提高一倍到40μL，就可達到最低檢測限的要求。
87.峰形後拖尾是什麼原因造成的？
答：
[柱物理損壞]
色譜柱有物理損壞是造成峰形拖尾的根源。唯一的解決方法就是更換新柱。
[柱內填料汙染]
流動相和樣品中的雜質是色譜柱主要汙染源。
流動相所用的各種溶劑至少是分析純，盡量使用色譜純試劑。流動相所用的水最好是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45μm溶劑微孔過濾（器）過guo濾lv，除chu去qu可ke能neng存cun在zai的de微wei粒li。流liu動dong相xiang建jian議yi現xian用yong現xian配pei，對dui於yu含han鹽yan的de溶rong液ye尤you其qi注zhu意yi長chang置zhi會hui產chan生sheng細xi菌jun或huo出chu現xian沉chen澱dian。此ci外wai還hai得de保bao證zheng儲chu存cun流liu動dong相xiang的de容rong器qi清qing潔jie。
複雜樣品可選用0.45μm溶劑微孔過濾（器）huoyangpinyuchulizhuduiyangpinjinxingyuchuli，quebaoyangpinzhongbuhanweilizazhi。ruoyangpinbubianchuli，yaoshiyongbaohuzhu。zhuneitianliaowuranshi，kejiangzhutouluosixiexia，yongzhuanyonggongjuwachuzhuneiqianduanbeiwurantianliao，zaiyixiangtongdetianliaozhongxintianru，xiufu，huoyinengrongjiewuranwudeliudongxiangansepuzhushiyongdexiangfanfangxiang，chongxisepuzhu（約20至30倍柱體積，或視具體情況而定；另外，此時不能接檢測器），將汙染物衝出色譜柱，再按色譜柱標明的使用方向使用。
[柱進口處有異物]
當斷定是柱進口處有異物時，可將柱頭螺絲卸下，取出濾帽並將其置於20%硝酸溶液中，用超聲波清洗約20分鍾，再置於超純水中，並用超聲波清洗約10分鍾，重新裝入色譜柱內即可。
[樣品濃度過高致使柱超載]
樣品在柱上超載能引起峰展寬，拖尾（或伸舌）。
適當減小進樣量或樣品濃度（需要時，可提高檢測器靈敏度）直至峰形和保留時間不再改變，便可消除這種不良影響。減小進樣量還能改善其分離度。正常情況下，樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進樣量保持在3～50μg範圍內，不會引起明顯超載。
[樣品溶劑不對]
選擇合適的樣品溶劑，以排除不必要的幹擾，最好選用流動相溶解樣品。
[柱外效應]
柱外效應（即進樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過長、直徑過粗、管路接頭不匹配、有死體積）是(shi)影(ying)響(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)柱(zhu)效(xiao)的(de)主(zhu)要(yao)因(yin)素(su)之(zhi)一(yi)，所(suo)以(yi)，在(zai)可(ke)能(neng)的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)兩(liang)端(duan)連(lian)接(jie)管(guan)路(lu)要(yao)盡(jin)可(ke)能(neng)短(duan)，連(lian)接(jie)管(guan)內(nei)徑(jing)盡(jin)可(ke)能(neng)細(xi)小(xiao)，切(qie)口(kou)務(wu)必(bi)平(ping)整(zheng)光(guang)滑(hua)，盡(jin)可(ke)能(neng)的(de)減(jian)小(xiao)死(si)體(ti)積(ji)，以(yi)防(fang)止(zhi)因(yin)樣(yang)品(pin)擴(kuo)散(san)造(zao)成(cheng)不(bu)能(neng)反(fan)映(ying)色(se)譜(pu)柱(zhu)真(zhen)實(shi)柱(zhu)效(xiao)等(deng)情(qing)況(kuang)發(fa)生(sheng)。
[緩衝不足或不合適]
在緩衝不好或離子強度過低的分離中，也會出現保留時間重現性差和峰形拖尾。增加緩衝濃度（與樣品大小相匹配）能改善此情況。
[矽醇基團作用]
仔細分析色譜柱內填料表麵性質可知：反(fan)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)填(tian)料(liao)的(de)表(biao)麵(mian)大(da)約(yue)被(bei)鍵(jian)合(he)相(xiang)覆(fu)蓋(gai)了(le)一(yi)半(ban)，其(qi)餘(yu)的(de)就(jiu)是(shi)未(wei)被(bei)鍵(jian)合(he)的(de)矽(gui)醇(chun)基(ji)團(tuan)。所(suo)謂(wei)的(de)保(bao)留(liu)是(shi)指(zhi)樣(yang)品(pin)分(fen)子(zi)與(yu)鍵(jian)合(he)相(xiang)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)的(de)結(jie)果(guo)。但(dan)是(shi)，酸(suan)性(xing)或(huo)堿(jian)性(xing)化(hua)合(he)物(wu)與(yu)矽(gui)膠(jiao)表(biao)麵(mian)殘(can)存(cun)的(de)矽(gui)醇(chun)基(ji)團(tuan)或(huo)金(jin)屬(shu)雜(za)質(zhi)之(zhi)間(jian)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)而(er)引(yin)起(qi)雙(shuang)重(zhong)保(bao)留(liu)機(ji)理(li)，因(yin)此(ci)，發(fa)生(sheng)了(le)峰(feng)形(xing)拖(tuo)尾(wei)。
為了減小峰形拖尾，通常可在流動相加入25mM三乙胺（抑製劑）。三san乙yi胺an能neng與yu矽gui醇chun基ji團tuan發fa生sheng強qiang烈lie的de相xiang互hu作zuo用yong，從cong而er降jiang低di或huo阻zu斷duan樣yang品pin分fen子zi與yu矽gui醇chun基ji團tuan的de作zuo用yong，以yi保bao證zheng保bao留liu機ji理li正zheng常chang進jin行xing，並bing大da大da緩huan解jie了le峰feng形xing拖tuo尾wei。使shi用yong長chang鏈lian的de矽gui醇chun基ji抑yi製zhi劑ji，雖sui起qi效xiao較jiao慢man，但dan，持chi續xu力li較jiao三san乙yi胺an長chang。因yin為wei抑yi製zhi劑ji分fen子zi中zhong除chu了le胺an基ji與yu矽gui醇chun基ji團tuan發fa生sheng極ji性xing作zuo用yong外wai，大da分fen子zi中zhong非fei極ji性xing部bu分fen與yu固gu定ding相xiang也ye會hui發fa生sheng反fan相xiang作zuo用yong而er產chan生sheng保bao留liu現xian象xiang。如ru果guo，將jiang抑yi製zhi劑ji加jia至zhi樣yang品pin中zhong，效xiao果guo會hui顯xian著zhu。
[柱內金屬汙染]
柱內金屬汙染（Fe，Ni等）keyinqimouyinxiehuahewufengxingtuowei。jinshukeyoutianliaobenshendaijin，yekeyoufushixingliudongxianghuanmanrongjiezhujinkoudejinshulvpian，suiliudongxiangchenjidaozhutianliaozhong，liru，C18柱填料被金屬汙染後，造成酸性/堿性樣品拖尾，可用堿洗/酸洗後再鍵合的填料，得到的峰是尖銳且對稱的。
88.流動相與柱子如何才能做到匹配，達到最好的分離效果。目前我們實驗室有購買好的色譜柱，可是對樣品的分離效果不是很好。
答：不bu同tong填tian料liao的de色se譜pu柱zhu都dou有you自zi己ji的de選xuan擇ze性xing，相xiang同tong填tian料liao不bu同tong廠chang家jia以yi及ji相xiang同tong廠chang家jia不bu同tong品pin牌pai之zhi間jian的de選xuan擇ze性xing都dou是shi不bu一yi樣yang的de，一yi般ban情qing況kuang下xia根gen據ju物wu質zhi的de性xing質zhi將jiang分fen離li的de大da方fang向xiang如ru：正(zheng)相(xiang)分(fen)析(xi)或(huo)者(zhe)反(fan)相(xiang)分(fen)析(xi)，確(que)定(ding)後(hou)，一(yi)般(ban)可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)調(tiao)節(jie)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)能(neng)得(de)到(dao)好(hao)的(de)色(se)譜(pu)峰(feng)形(xing)，這(zhe)方(fang)麵(mian)的(de)資(zi)料(liao)論(lun)壇(tan)當(dang)中(zhong)很(hen)多(duo)，但(dan)是(shi)也(ye)有(you)些(xie)色(se)譜(pu)柱(zhu)不(bu)管(guan)怎(zen)麼(me)調(tiao)整(zheng)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)都(dou)不(bu)行(xing)，表(biao)麵(mian)這(zhe)款(kuan)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)選(xuan)擇(ze)性(xing)不(bu)適(shi)合(he)該(gai)樣(yang)品(pin)的(de)選(xuan)擇(ze)。
89.我用的是C18柱，後麵黑色的是我以前跑的圖，前麵是我現在跑的圖形，完全一樣的東西，隻是流動相不是一批配的（流動相的成分沒變），中間柱子別人用過了，峰型怎麼發生了這麼大的變化啊？可能的原因是什麼啊？是不是柱子出了問題啊？
答：從兩個圖對比很明顯可以看出是柱效嚴重下降，且伴有肩峰。不同時間配的流動相，如果成分和pH沒變的話，肯定不會造成這個結果。估計是別人用柱子過程中，造成了柱頭塌陷、柱頭汙染以及固定相流失等嚴重問題，如樣品太髒，流動相或樣品pH太高或太低，都會造成這個結果。
nikeyishizheyongsepuzhuqingxihezaishengdefangfafanchongweihuyixia，danbunengbaozhengyidingnenghuidaoyuanlaidexiaoguo。zaishengruguobuxing，kaolvwabuzhutoutianliao，shizaibuxing，zhuziyezhinengbaofei。jianyizhuzizuihaohaishizhuanmenyongyuyizhongfangfabijiaohao，xiangnizhezhongqingkuang，dougaobuqingbierenzenmeyongzhuzide，fenxijiejuewentijiuxiangdangnan。
90.柱子的柱效影響大嗎？一般柱子的柱效規定是多少的呀！理論塔板數一般要達到多少呢？主要有那些因素影響它。
答：zhuxiaoshizhuzixingnenghaohuaideyigezhongyaotixianzhibiao。zhuxiaohuiyingxiangfenlidu，dangranshifengxingyuejianrui，zhuxiaoyuegao，heqitafengyuerongyifenkai。lingwaizhuxiaogaofengxingjianrui，duifengmianjidejifenwuchajiuxiao，shenzhikeyiyongfenggaolaidingliang。
一般C18柱，在測定甲苯等不易拖尾的小分子中性不電離物質時，5μm的填料，每米的柱效能達到80000以上的塔板數，就算合格吧。在實際分析物的測定時，一般藥典有規定最低柱效是2000～3000，yibanxinzhuzidezhuxiaodougaoyuzhegeshu。danzhuzizaishiyonghou，youyugudingxiangliushidengyuanyin，zhuxiaohuizhubuxiajiang，dangxiajiangdaobufuheyaodianzuidizhuxiaoyaoqiu，huozhedaozhifenlidubugoushi，sepuzhujiusuanshoumingdaole。dancongzhuxiaozhubuxiajiangzhegejiaodukan，zhuxiaogaodesepuzhuxiangduishiyongshouminggengchang。
影響柱效的因素有粒徑、粒徑和孔徑分布、固定相鍵合密度、柱外體積和溫度等，柱子裝填緊密、柱床均勻一致也對提高柱效有好處。這些影響因素中，很多是和生產廠商有關，你這邊能做的是盡量減少柱外連接體積。
91.流動相中加入四氫呋喃對柱子有損害嗎?我現在分析一樣品流動相中用到20%的四氫呋喃才能把峰分到基線.但柱子隻能用一個星期分離效果就不好了.請問是四氫呋喃損壞了柱子嗎?
答：四氫呋喃（THF）是反相色譜中洗脫能力極強的溶劑，比甲醇和乙腈都強很多。在流動相中加入THF能改善某些難分離的物質對的分離度，但，THF不穩定，容易降解生成具有很強反應活性的過氧化物，能與分析物反應生成新化合物，導致拖尾、峰分裂和鬼峰產生。高反應活性的過氧化物還可以和填料固定相發生化學作用，THF對柱子有損傷這點是無疑的，而且這種損傷是隨時間累積的。THF保質期一般規定是6個月，放得越久，裏麵產生的過氧化物含量越大，你應該避免使用生產日期已很久的THF溶劑，而且最好將THF冷藏、幹燥和避光保存，使用前最好能檢測一下過氧化物的含量。
92.在用液相色譜同時分離多種組分時，怎麼通過條件色譜條件使各個峰達到比較理想的分離效果！
答：這是方法開發的大問題。方法開發建立，要做的就是：針對分析物和基體的情況不同，選擇色譜柱類型和分析條件，包括流動相溶劑類型、組成比例、pH值、溫度和流速等參數的確定。這方麵的問題，要講起來內容非常多。
93.是樣品過載問題,按藥典檢測方法檢驗一些藥品有關物質時,都要注入高濃度的供試液,這樣往往使得柱過載而峰變形,按老師的方法減小濃度和注入量均是不允許的,怎麼處理這問題?
答：yaodianfangfazhongzhurugaonongdugongshiyecedingyouguanwuzhi，tigaozhurunongdushiweilebazazhifengdexinhaozengqiang。youshihouweilebazazhifengxianxianchulai，zhufengyinguozaiyousuobianxing，ruzaiyunxufanweinei，yenengjieshou。danqiantishizazhifengheyangpinzhufengfenkai，ruguoyinguozaiershiliangfengmeiyoudedaoxuyaodefenlidu，zazhifengxinhaozaiqiangyeshiquleyiyi。worenweiyaodianguidingdetiaojianshiyunxuzaiyidingfanweineijinxingtiaojiede，yinweiyaodianmeiyouguidingjutishiyongsepuzhudepinpai，erbutongpinpaidezhuzi，shangyangliangshiyouchayide。duiseputiaojianweitiao，bingqudedaolehenhaodefenxijieguo，ruguoguidingbuyunxu，nanishouxianyaohuaiyizhegeguidingshifouheli，huozheshifouduiguidingdelijieyouwenti。
94.哪些原因會造成色譜峰變寬、峰高變低，有哪些解決辦法？
答：確實是這樣，如果其它色譜條件沒有改變，柱效下降是導致峰變寬的主要原因。對於易電離的極性物質，如果流動相pH選擇不合適，分析物既有中性分子態存在，又有離子態存在，峰也會變寬變矮。
色(se)譜(pu)柱(zhu)使(shi)用(yong)後(hou)柱(zhu)效(xiao)逐(zhu)步(bu)下(xia)降(jiang)是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)，如(ru)突(tu)然(ran)降(jiang)低(di)則(ze)屬(shu)異(yi)常(chang)。柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)原(yuan)因(yin)有(you)很(hen)多(duo)，但(dan)柱(zhu)效(xiao)快(kuai)速(su)下(xia)降(jiang)則(ze)多(duo)半(ban)是(shi)使(shi)用(yong)不(bu)當(dang)，造(zao)成(cheng)填(tian)料(liao)特(te)性(xing)或(huo)柱(zhu)床(chuang)結(jie)構(gou)改(gai)變(bian)所(suo)致(zhi)。如(ru)超(chao)過(guo)使(shi)用(yong)pH範圍造成的固定相和矽膠基體的流失、柱床塌陷等；還有強保留物質吸附在填料表麵，形成非特異性吸附層，完全改變了原有固定相的表麵活性和分離性能，使柱效下降；另外進樣時的壓力脈衝，也會破壞柱床結構影響柱效。
95.我以前做蘇丹紅用的是安捷倫的SB-C18柱，峰形什麼都很好，最近發現4個標樣峰後都帶有一個小峰，一開始以為是標樣問題，後來換XDB-C18後標樣又正常了。可是用SB-C18柱做其他用正常，不知怎麼回事？還有，像這種C18柱如果壓力過高能不能反衝，該如何衝洗？一般做獸殘、農殘什麼的，而且感覺三聚氰胺做後壓力更易增高，且容易引發進樣器漏等問題，請問做完三聚氰胺需對係統做特殊清洗嗎？
答：用SB柱(zhu)，標(biao)樣(yang)後(hou)帶(dai)一(yi)小(xiao)峰(feng)，而(er)且(qie)是(shi)隻(zhi)對(dui)蘇(su)丹(dan)紅(hong)標(biao)樣(yang)測(ce)定(ding)時(shi)有(you)，估(gu)計(ji)和(he)蘇(su)丹(dan)紅(hong)標(biao)樣(yang)的(de)測(ce)定(ding)方(fang)法(fa)和(he)其(qi)它(ta)樣(yang)品(pin)測(ce)定(ding)方(fang)法(fa)不(bu)同(tong)有(you)關(guan)。最(zui)好(hao)能(neng)把(ba)譜(pu)圖(tu)貼(tie)上(shang)來(lai)看(kan)看(kan)，是(shi)什(shen)麼(me)樣(yang)的(de)小(xiao)峰(feng)？才(cai)能(neng)判(pan)斷(duan)是(shi)溶(rong)劑(ji)峰(feng)還(hai)是(shi)雜(za)質(zhi)峰(feng)。XDB柱和SB柱是有區別的，XDB鍵合度高，封尾良好，反相保留能力強；而SB柱，未進行封尾，對極性物質選擇性好。有可能你的蘇丹紅標樣分解了，有極性雜質生成，SB柱能把雜質分開，而XDB柱不能。
這zhe兩liang款kuan柱zhu子zi壓ya力li大da了le，可ke以yi反fan衝chong。有you正zheng常chang維wei護hu時shi的de反fan衝chong衝chong洗xi和he再zai生sheng時shi的de強qiang溶rong劑ji衝chong洗xi兩liang種zhong，衝chong洗xi方fang法fa在zai在zai線xian講jiang座zuo裏li也ye寫xie了le，你ni再zai回hui到dao本ben貼tie的de前qian麵mian看kan看kan就jiu可ke以yi了le。
sanjuqinganhesanyianleisi，benshenrongyiheguichunjizuoyongerxifuzaitianliaobiaomian，lingwaisanjuqingancedingdeyangpinjitihandanbaileideqiangbaoliuwuzhijiaoduo，rongyiwuransepuzhuzhutouyinqitianliaojianxidusaizhuyashenggao，zuihaomeicizuowanyanghou，douyongjiachunhuoyijingfanxiangqingxiweihuyixia。ruyoudanbaileidewuran，yedingshiyongbenjiangzuozhongtidaodeqingxifangfazuoyixiaweihu。
96.我是做農藥殘留分析的，不同的基質雜質含海量是不同的，我用C18分析時有可能一次就汙染了，我用高流速，和反向衝洗都解決不了，是不是這根柱子就廢了，有沒有其他的辦法？
答：高gao流liu速su反fan向xiang衝chong洗xi是shi對dui的de，關guan鍵jian你ni用yong了le什shen麼me溶rong劑ji衝chong洗xi呢ne？用yong原yuan來lai的de流liu動dong相xiang衝chong洗xi肯ken定ding不bu管guan用yong，要yao不bu然ran就jiu不bu會hui累lei積ji在zai柱zhu子zi上shang了le。你ni應ying該gai用yong流liu動dong相xiang中zhong的de強qiang溶rong劑jiB衝洗，如果不行，就需要啟用再生的程序，當然再生時用的溶劑更強。
100％甲醇——100％乙晴——75％乙晴/25％異丙醇——100％異丙醇——100％二氯甲烷——100％正己烷。
用每種溶劑衝洗至少10個柱體積，對於250mm×4.6mm的分析柱，合適的衝洗流速是1～2mL/min。最後，用10柱體積的異丙醇過渡，然後回到原來的流動相體係。
再(zai)生(sheng)還(hai)不(bu)解(jie)決(jue)問(wen)題(ti)，最(zui)後(hou)一(yi)招(zhao)就(jiu)是(shi)挖(wa)補(bu)柱(zhu)頭(tou)填(tian)料(liao)，把(ba)柱(zhu)頭(tou)汙(wu)染(ran)的(de)填(tian)料(liao)挖(wa)掉(diao)，用(yong)幹(gan)淨(jing)填(tian)料(liao)填(tian)補(bu)進(jin)去(qu)。挖(wa)補(bu)填(tian)料(liao)，破(po)壞(huai)原(yuan)有(you)柱(zhu)床(chuang)結(jie)構(gou)，挖(wa)補(bu)後(hou)柱(zhu)效(xiao)也(ye)不(bu)可(ke)能(neng)有(you)新(xin)柱(zhu)水(shui)平(ping)，或(huo)許(xu)能(neng)再(zai)維(wei)持(chi)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)，但(dan)不(bu)會(hui)長(chang)久(jiu)。
97.還有溶劑中的金屬過濾頭生鏽了，會有什麼影響？會不會影響到柱子的壽命，金屬離子和柱子有沒有什麼反應？
答：我覺得你就把鏽當成顆粒物汙染的一種，會導致拖尾、柱壓上升等。溶解的金屬離子一般在反相柱上沒有什麼保留能力，馬上就會被衝出柱子，不會和固定相或者和矽膠基質反應。
98.如果在溶劑過濾時把水膜當成有機膜了溶解了而且這樣的溶劑又做有機相用了，造成C18柱壓由1000升到3000，流動相是乙腈和水，問一下這樣的柱子還能用麼？有沒有什麼補救方法？
答：溶解的膜作為了顆粒物堵塞篩板，引起柱壓上升，也隻有反衝一下，如果能把堵在篩板上的膜殘渣衝走，柱壓下降了就OK了；如(ru)果(guo)，殘(can)渣(zha)進(jin)入(ru)了(le)柱(zhu)子(zi)內(nei)部(bu)的(de)填(tian)料(liao)間(jian)隙(xi)，會(hui)難(nan)衝(chong)一(yi)點(dian)，也(ye)隻(zhi)能(neng)多(duo)衝(chong)一(yi)會(hui)吧(ba)，實(shi)在(zai)不(bu)行(xing)，你(ni)又(you)舍(she)不(bu)得(de)把(ba)色(se)譜(pu)柱(zhu)報(bao)廢(fei)，就(jiu)隻(zhi)有(you)挖(wa)補(bu)柱(zhu)頭(tou)填(tian)料(liao)和(he)換(huan)篩(shai)板(ban)了(le)。
99.保護柱和預柱的作用是不是一樣的，如果不一樣有什麼區別麼？保留時間漂移多少為可以接受的範圍？
答：保護柱一般帶填料，相當於一根縮短了的色譜柱（一般是1～2cm長度），卡套裏可更換的柱芯，柱管、shaibanhetianliaodouyou。baohuzhulidezhuxinhaoxiangshizaiqianmiankailudesaoleibudui，liudongxiangheyangpinliruyoushenmesunhaizhuzidewuranwu，baohuzhujiuzijichengshoulexialai。
而(er)預(yu)柱(zhu)，現(xian)在(zai)一(yi)般(ban)指(zhi)的(de)就(jiu)是(shi)接(jie)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)之(zhi)前(qian)的(de)在(zai)線(xian)過(guo)濾(lv)器(qi)。在(zai)線(xian)過(guo)濾(lv)器(qi)和(he)保(bao)護(hu)柱(zhu)的(de)最(zui)大(da)區(qu)別(bie)是(shi)不(bu)帶(dai)填(tian)料(liao)，隻(zhi)有(you)可(ke)更(geng)換(huan)的(de)篩(shai)板(ban)。預(yu)柱(zhu)隻(zhi)能(neng)保(bao)護(hu)色(se)譜(pu)柱(zhu)免(mian)受(shou)顆(ke)粒(li)物(wu)質(zhi)的(de)汙(wu)染(ran)，而(er)不(bu)能(neng)阻(zu)擋(dang)溶(rong)解(jie)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)的(de)強(qiang)保(bao)留(liu)物(wu)質(zhi)。
保留時間是液相色譜中一個很有用的診斷分離問題的工具。保留時間受流動相組成、溫度、pH、流速、固gu定ding相xiang流liu失shi和he柱zhu老lao化hua等deng很hen多duo因yin素su的de影ying響xiang，如ru果guo所suo有you這zhe些xie參can數shu保bao持chi不bu變bian，保bao留liu時shi間jian也ye保bao持chi恒heng定ding。但dan在zai實shi際ji操cao作zuo中zhong，不bu可ke能neng對dui每mei個ge色se譜pu參can數shu進jin行xing很hen完wan美mei的de控kong製zhi，如ru即ji便bian加jia了le柱zhu溫wen箱xiang，溫wen度du還hai是shi會hui有you波bo動dong；流動相組成會因組分揮發性不同而改變。
所以，保留時間有上下0.02～0.05min的變動是非常正常的，對某些方法有0.1min上(shang)下(xia)變(bian)動(dong)也(ye)屬(shu)正(zheng)常(chang)。保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)有(you)大(da)的(de)變(bian)化(hua)，預(yu)示(shi)著(zhe)係(xi)統(tong)和(he)方(fang)法(fa)存(cun)在(zai)問(wen)題(ti)。流(liu)路(lu)裏(li)有(you)氣(qi)泡(pao)存(cun)在(zai)，泵(beng)閥(fa)有(you)泄(xie)漏(lou)，會(hui)因(yin)流(liu)量(liang)降(jiang)低(di)而(er)導(dao)致(zhi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)增(zeng)加(jia)。梯(ti)度(du)混(hun)合(he)比(bi)例(li)閥(fa)故(gu)障(zhang)也(ye)是(shi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)變(bian)化(hua)原(yuan)因(yin)之(zhi)一(yi)。
100.液相色譜柱與氣相的柱子有何區別呢？
