一、切片前的準備:
1、恒溫水浴 鍋首先預熱至35℃—40℃。
2、lakuaizhengxiu,jianglakuaizuzhimiandeshilayongdaoxiuqu,shizuzhiquanbubaoluchuqiemianbingxiuping,yijianshaoqiepiandaodemosun。jiangzuzhikuaizuoyouliangcedeshilazaibusunshangzuzhijiyingxiangzhenduandeyuanzeshang,quanbuqiechu;否則切片容易皺褶。組織塊上下邊緣的石蠟視組織情況修齊修平;shilabuxuliudeguoduo,yingjinliangshaoliu,yibaochizuzhijianjudezuixiaoxiandu。zheyangqiexiadeqiepianjichengdaizhuang,yebuwanqu。pianjuxiao,zaitiepianshijiukexiangyingduotiepian,youliyujianzhazhenduan。xiuqielakuaishizhinengyidianyidiandiqiediaolabian,yaoshidapianxiuqieyishilakuaiduanlieluchuzuzhi;遇此情況應返入新蠟再次包埋。
3.載玻片應事先洗滌幹淨,無油膩和不透明現象,應將載玻片浸入酸缸內12小時後流水衝洗,再烤幹備用。根據切片需要張數,每片塗上一層極薄的蛋白甘油,插於載片板(或載片架)上備用。
蛋白甘油的配製:取新鮮雞蛋1份加甘油1份再加適量麝香草酚攪勻。此法主要是防止脫片,實際上一張很清潔的載玻片不塗蛋白甘油也不會脫片。
4、將鋒利的刀片裝入切片刀夾鉗內,調整角度和位置後隨即緊固,檢查切片刀的傾斜度是否正確,傾角過大、則切片上卷;傾角過小則切片皺起,以20°-30°為佳。
5、備用小型毛筆、小型無鉤鑷子、鉛筆。
二、切片的步驟:
1、將蠟塊固定於切片機頭上的夾座內,調整到稍離開切片能夠切到的位置上,注意蠟塊組織切麵與切片刀口要垂直平行。
2、再調整蠟塊組織切麵恰好與刀口接觸,旋緊刀架,固定好機頭。
3、根據需要調整切片厚度。
4、搖動切片機手輪先進行修整切片,直到切出完整的最大組織切麵後,再進行切製。
5、實踐中可用右手轉動切片機手輪,左手用毛筆托起蠟片,協調地進行切片操作。
6、切qie下xia的de切qie片pian帶dai,一yi端duan用yong鑷nie子zi輕qing輕qing拉la起qi,應ying盡jin可ke能neng將jiang切qie片pian帶dai拉la直zhi展zhan開kai,用yong毛mao筆bi將jiang切qie片pian帶dai從cong刀dao口kou向xiang上shang挑tiao起qi,拉la下xia切qie片pian帶dai,然ran後hou輕qing拖tuo鋪pu於yu恒heng溫wen水shui麵mian上shang。
三、切片的注意事項
1、qiepianzhiliangdehaohuai,chuyujishushulianchengduheqiepianjidehaohuaiyouguanwai,qiepiandaoshijuedingdeyinsu,suoyidaoyidingyaomodeshifenfengli。fouzezaiqiepianshihuizixingjuanqihuozhouqi,huojiangzuzhihuashangchuxiandaohen,gengbunengshunlidijiangqiepianqiechenglianxudichangtiaodaizhuang。qiepiandaoruyouquekoucunzai,jiangshizhichengdeqiepianduanlie、破碎,不完整,切片時應時時擦淨刀口。
2、切qie片pian機ji的de各ge個ge零ling件jian和he螺luo絲si應ying旋xuan緊jin,否fou則ze將jiang會hui產chan生sheng震zhen動dong。在zai每mei次ci更geng換huan蠟la塊kuai時shi,應ying習xi慣guan地di檢jian查zha一yi下xia組zu織zhi塊kuai是shi否fou夾jia緊jin,切qie片pian刀dao是shi否fou穩wen固gu,稍shao有you疏shu忽hu就jiu會hui影ying響xiang切qie片pian質zhi量liang,甚shen至zhi將jiang蠟la塊kuai全quan部bu切qie壞huai,造zao成cheng不bu可ke彌mi補bu的de後hou果guo。在zai切qie製zhi切qie片pian的de開kai頭tou階jie段duan如ru出chu現xian切qie製zhi不bu良liang與yu其qi他ta故gu障zhang,最zui常chang見jian的de原yuan因yin是shi蠟la塊kuai或huo切qie片pian刀dao的de鬆song動dong所suo致zhi。
3、在搖動切片機時,用力要求均勻一致,不宜過重過猛,否則可因用力過重而使機身震動,造成切片厚薄不均。遇有硬化過度的腦、肝、脾等組織時,更應該輕輕切削,以防組織由於震動形成空洞現象。
4、在夏秋季節進行切片時,應使用冰塊加強冷卻,這樣不僅可保持石蠟的硬度,同時也減少了切片的褶皺,給切片製作帶來方便。
四、貼片 :
1、將單張或數張切片,用鑷子夾住蠟片的一邊並提起,鋪於恒溫水中,(光亮的一麵朝下)立li即ji用yong毛mao筆bi輕qing輕qing拉la展zhan以yi切qie片pian無wu皺zhou褶zhe為wei最zui好hao。如ru有you皺zhou褶zhe時shi用yong鑷nie子zi細xi心xin地di逐zhu個ge輕qing輕qing撥bo開kai,注zhu意yi不bu可ke撥bo破po組zu織zhi。然ran後hou分fen開kai每mei張zhang切qie片pian,選xuan取qu其qi中zhong最zui完wan整zheng的de,沒mei有you皺zhou褶zhe的de切qie片pian。
2、待(dai)切(qie)片(pian)在(zai)恒(heng)溫(wen)水(shui)內(nei)充(chong)分(fen)攤(tan)開(kai)展(zhan)平(ping)後(hou),將(jiang)載(zai)玻(bo)片(pian)垂(chui)直(zhi)插(cha)入(ru)水(shui)中(zhong)以(yi)塗(tu)有(you)蛋(dan)白(bai)甘(gan)油(you)麵(mian)輕(qing)靠(kao)切(qie)片(pian),並(bing)用(yong)毛(mao)筆(bi)將(jiang)切(qie)片(pian)一(yi)邊(bian)撥(bo)於(yu)玻(bo)片(pian)上(shang),隨(sui)即(ji)將(jiang)玻(bo)片(pian)直(zhi)立(li)提(ti)起(qi),趁(chen)玻(bo)片(pian)上(shang)仍(reng)有(you)少(shao)量(liang)水(shui)份(fen)時(shi)用(yong)毛(mao)筆(bi),撥(bo)正(zheng)切(qie)片(pian)位(wei)置(zhi)。如(ru)組(zu)織(zhi)較(jiao)小(xiao),可(ke)在(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)多(duo)貼(tie)幾(ji)片(pian)或(huo)幾(ji)排(pai),但(dan)排(pai)列(lie)應(ying)密(mi)集(ji)、整齊。
3、用鉛筆在玻片一端的毛玻璃上寫上標本編號,字要寫得小而清楚、端正。
4、將附貼好的切片置於60℃恒溫箱 內幹燥2小時,蛋白質凝固後即可進行染色。
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