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方fang便bian快kuai捷jie的de分fen析xi過guo程cheng固gu然ran重zhong要yao，但dan是shi為wei了le多duo做zuo樣yang品pin而er忽hu略lve了le一yi些xie必bi不bu可ke少shao的de步bu驟zhou，往wang往wang得de不bu償chang失shi，哪na些xie操cao作zuo不bu能neng做zuo？哪na些xie懶lan兒er不bu能neng偷tou？那na些小概率的故障師傅沒教怎麼辦？液相使用過程中有哪四大關鍵因素要注意？
01
【流動相不過濾】
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
02
【使用後沒有及時清洗泵】
liudongxiangbuyinghanyourenhefushixingwuzhi，hanyouhuanchongyedeliudongxiangbuyingbaoliuzaibengnei，youqishizaitingbengguoyehuogengchangshijiandeqingkuangxia。ruguojianghanhuanchongyedeliudongxiangliuzaibengnei，youyuzhengfahuoxielou，shenzhizhishiyouyurongyedejingzhi，jiukenengxichuyandeweixijingti，zhexiejingtijiangheshangshugutiweiliyiyangsunhuaimifenghuanhezhusaideng。yinci，bixubengruchunshuijiangbengchongfenqingxihou，zaihuanchengshiheyusepuzhubaocunheyouliyubengweihuderongji（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
03
【流動相走空】
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦？
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
04
【壓力和流量不穩】
原因可能是氣泡，需要排除；或(huo)者(zhe)是(shi)單(dan)向(xiang)閥(fa)內(nei)有(you)異(yi)物(wu)，可(ke)卸(xie)下(xia)單(dan)向(xiang)閥(fa)，浸(jin)入(ru)丙(bing)酮(tong)內(nei)超(chao)聲(sheng)清(qing)洗(xi)。有(you)時(shi)可(ke)能(neng)是(shi)砂(sha)濾(lv)棒(bang)內(nei)有(you)氣(qi)泡(pao)，或(huo)被(bei)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)粒(li)或(huo)滋(zi)生(sheng)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)部(bu)分(fen)堵(du)塞(sai)，這(zhe)時(shi)，可(ke)卸(xie)下(xia)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)流(liu)動(dong)相(xiang)內(nei)超(chao)聲(sheng)除(chu)氣(qi)泡(pao)，或(huo)將(jiang)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)稀(xi)酸(suan)（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視。
PS：在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)對(dui)組(zu)分(fen)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)方(fang)法(fa)。在(zai)同(tong)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)，按(an)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)不(bu)斷(duan)改(gai)變(bian)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)比(bi)，稱(cheng)為(wei)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)。從(cong)而(er)可(ke)以(yi)使(shi)一(yi)個(ge)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)性(xing)質(zhi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)組(zu)分(fen)能(neng)按(an)各(ge)自(zi)適(shi)宜(yi)的(de)容(rong)量(liang)因(yin)子(zi)k達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
05
【梯度洗脫的流動相選擇不當】
yaozhuyirongjidehurongxing，buxianghunrongderongjibunengyongzuotiduxituodeliudongxiang。youxierongjizaiyidingbilineihunrong，chaochufanweihoujiubuhurong，shiyongshigengyaoyinqizhuyi。dangyoujirongjihehuanchongyehunheshi，haikenengxichuyandejingti，youqishiyonglinsuanyanshixutebiexiaoxin。
06
【忽略的空白梯度洗脫】
梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)所(suo)用(yong)的(de)溶(rong)劑(ji)純(chun)度(du)要(yao)求(qiu)更(geng)高(gao)，以(yi)保(bao)證(zheng)良(liang)好(hao)的(de)重(zhong)現(xian)性(xing)。進(jin)行(xing)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)前(qian)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)空(kong)白(bai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)，以(yi)辨(bian)認(ren)溶(rong)劑(ji)雜(za)質(zhi)峰(feng)，因(yin)為(wei)弱(ruo)溶(rong)劑(ji)中(zhong)的(de)雜(za)質(zhi)富(fu)集(ji)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)頭(tou)後(hou)會(hui)被(bei)強(qiang)溶(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)下(xia)來(lai)。用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)溶(rong)劑(ji)需(xu)徹(che)底(di)脫(tuo)氣(qi)，以(yi)防(fang)止(zhi)混(hun)合(he)時(shi)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。
07
【溶劑混合所帶來的粘度變化】
混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)的(de)粘(zhan)度(du)常(chang)隨(sui)組(zu)成(cheng)而(er)變(bian)化(hua)，因(yin)而(er)在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)常(chang)出(chu)現(xian)壓(ya)力(li)的(de)變(bian)化(hua)。例(li)如(ru)甲(jia)醇(chun)和(he)水(shui)粘(zhan)度(du)都(dou)較(jiao)小(xiao)，當(dang)二(er)者(zhe)以(yi)相(xiang)近(jin)比(bi)例(li)混(hun)合(he)時(shi)粘(zhan)度(du)增(zeng)大(da)很(hen)多(duo)，此(ci)時(shi)的(de)柱(zhu)壓(ya)大(da)約(yue)是(shi)甲(jia)醇(chun)或(huo)水(shui)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)的(de)兩(liang)倍(bei)。因(yin)此(ci)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)壓(ya)力(li)超(chao)過(guo)輸(shu)液(ye)泵(beng)或(huo)色(se)譜(pu)柱(zhu)能(neng)承(cheng)受(shou)的(de)最(zui)大(da)壓(ya)力(li)。
08
【六通閥的正確使用和維護】
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。
09
【色譜柱的使用和維護】
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
10
【調節流速太快】
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
11
【反衝色譜柱】
一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
12
【預柱和保護柱】
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以(yi)避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相(xiang)被(bei)破(po)壞(huai)。有(you)時(shi)可(ke)以(yi)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)前(qian)麵(mian)連(lian)接(jie)一(yi)預(yu)柱(zhu)，分(fen)析(xi)柱(zhu)是(shi)鍵(jian)合(he)矽(gui)膠(jiao)時(shi)，預(yu)柱(zhu)為(wei)矽(gui)膠(jiao)，可(ke)使(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)在(zai)進(jin)入(ru)分(fen)析(xi)柱(zhu)之(zhi)前(qian)預(yu)先(xian)被(bei)矽(gui)膠(jiao)“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
避bi免mian將jiang基ji質zhi複fu雜za的de樣yang品pin尤you其qi是shi生sheng物wu樣yang品pin直zhi接jie注zhu入ru柱zhu內nei，需xu要yao對dui樣yang品pin進jin行xing預yu處chu理li或huo者zhe在zai進jin樣yang器qi和he色se譜pu柱zhu之zhi間jian連lian接jie一yi保bao護hu柱zhu。保bao護hu柱zhu一yi般ban是shi填tian有you相xiang似si固gu定ding相xiang的de短duan柱zhu。保bao護hu柱zhu可ke以yi而er且qie應ying該gai經jing常chang更geng換huan。
四大關鍵因素需要注意
1、液相色譜儀本身
對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)一(yi)般(ban)不(bu)會(hui)有(you)問(wen)題(ti)，特(te)別(bie)是(shi)剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)新(xin)儀(yi)器(qi)。對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)最(zui)重(zhong)要(yao)的(de)就(jiu)是(shi)儀(yi)器(qi)的(de)校(xiao)驗(yan)，剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)儀(yi)器(qi)一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)由(you)賣(mai)家(jia)先(xian)對(dui)儀(yi)器(qi)做(zuo)係(xi)統(tong)的(de)確(que)認(ren)工(gong)作(zuo)（包括IQ、PQ、OQ），確(que)認(ren)順(shun)利(li)通(tong)過(guo)後(hou)，再(zai)請(qing)國(guo)家(jia)或(huo)省(sheng)級(ji)儀(yi)器(qi)檢(jian)定(ding)局(ju)的(de)來(lai)校(xiao)驗(yan)，檢(jian)定(ding)合(he)格(ge)後(hou)就(jiu)可(ke)以(yi)放(fang)心(xin)使(shi)用(yong)了(le)，除(chu)此(ci)之(zhi)外(wai)，一(yi)些(xie)做(zuo)得(de)好(hao)的(de)公(gong)司(si)每(mei)半(ban)年(nian)會(hui)對(dui)儀(yi)器(qi)進(jin)行(xing)一(yi)次(ci)的(de)內(nei)部(bu)校(xiao)驗(yan)，目(mu)的(de)就(jiu)是(shi)為(wei)了(le)保(bao)證(zheng)儀(yi)器(qi)的(de)正(zheng)常(chang)可(ke)運(yun)行(xing)狀(zhuang)態(tai)。
2、色譜條件
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。
色(se)譜(pu)柱(zhu)會(hui)因(yin)不(bu)同(tong)的(de)品(pin)種(zhong)而(er)有(you)不(bu)同(tong)的(de)要(yao)求(qiu)，但(dan)每(mei)根(gen)色(se)譜(pu)柱(zhu)都(dou)有(you)它(ta)的(de)清(qing)洗(xi)要(yao)求(qiu)，這(zhe)個(ge)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)說(shuo)明(ming)書(shu)上(shang)都(dou)可(ke)以(yi)找(zhao)到(dao)，一(yi)定(ding)要(yao)根(gen)據(ju)上(shang)麵(mian)的(de)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)，否(fou)則(ze)會(hui)造(zao)成(cheng)色(se)譜(pu)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)縮(suo)短(duan)，檢(jian)測(ce)波(bo)長(chang)也(ye)會(hui)因(yin)品(pin)種(zhong)的(de)不(bu)同(tong)有(you)不(bu)同(tong)的(de)要(yao)求(qiu)。這(zhe)裏(li)需(xu)要(yao)指(zhi)出(chu)的(de)是(shi)要(yao)注(zhu)意(yi)觀(guan)察(cha)檢(jian)測(ce)器(qi)氘(dao)燈(deng)能(neng)量(liang)的(de)變(bian)化(hua)，比(bi)如(ru)基(ji)線(xian)波(bo)動(dong)大(da)，活(huo)性(xing)成(cheng)分(fen)的(de)響(xiang)應(ying)值(zhi)突(tu)然(ran)變(bian)小(xiao)等(deng)，都(dou)有(you)可(ke)能(neng)是(shi)氘(dao)燈(deng)的(de)能(neng)量(liang)不(bu)足(zu)所(suo)引(yin)起(qi)的(de)，氘(dao)燈(deng)一(yi)般(ban)建(jian)議(yi)使(shi)用(yong)800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QCrenyuan，danshizuoweiyanfarenyuan，youshiweilemosuotiaojianhuojinxingfangfanaiyongxingyanzheng，huiduiliusujinxinggaibianyipingjiafangfadeshiyongxing。duiyujinyangliangyinbutongdepinzhongyeyoubutongguiding，jinyangliangzhekuaixianzaidoushiyongzidongjinyang，suoyijinyangjingmidudouhenhao，buxuqiangtiaoshenme。
3、操作人員
首(shou)先(xian)，作(zuo)為(wei)液(ye)相(xiang)操(cao)作(zuo)人(ren)員(yuan)，一(yi)定(ding)要(yao)認(ren)真(zhen)學(xue)習(xi)液(ye)相(xiang)的(de)說(shuo)明(ming)書(shu)，掌(zhang)握(wo)液(ye)相(xiang)硬(ying)件(jian)和(he)軟(ruan)件(jian)的(de)操(cao)作(zuo)，掌(zhang)握(wo)日(ri)常(chang)的(de)維(wei)護(hu)保(bao)養(yang)，掌(zhang)握(wo)最(zui)基(ji)礎(chu)故(gu)障(zhang)的(de)排(pai)除(chu)和(he)維(wei)修(xiu)。
yibanyexiangdecaozuoguichengyeshiyoucaozuorenyuanqicaode，suoyizhiyaoyangeanzhaocaozuoyaoqiujinxingcaozuo，yibanbuhuichuxianwenti。dangran啫lixuyaotebiezhichudeshiduiyuyexiangderichangweihubaoyanghenzhongyao，biruliudongxiangdeguolv、脫氣、泵密封墊的清洗、係統管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費時間。
其次，操作人員在配製液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差。
4、液相安裝環境
液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、電dian磁ci幹gan擾rao的de屋wu內nei的de台tai麵mian上shang，有you條tiao件jian的de話hua盡jin量liang將jiang液ye相xiang數shu據ju處chu理li係xi統tong分fen隔ge開kai，一yi個ge是shi防fang止zhi色se譜pu基ji線xian噪zao音yin偏pian大da，基ji線xian不bu穩wen等deng，一yi個ge是shi為wei減jian少shao對dui人ren體ti的de危wei害hai。
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