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先進、高gao效xiao的de實shi驗yan室shi分fen析xi方fang法fa搭da配pei高gao精jing尖jian的de科ke學xue儀yi器qi得de出chu的de實shi驗yan結jie果guo必bi然ran是shi越yue來lai越yue精jing確que。其qi實shi，要yao得de到dao高gao質zhi量liang的de檢jian測ce數shu據ju，實shi驗yan用yong試shi劑ji起qi著zhe決jue定ding性xing意yi義yi。比bi如ru超chao純chun水shui就jiu是shi起qi決jue定ding性xing作zuo用yong的de實shi驗yan材cai料liao。
近幾年來，實驗室分析技術有了很大的改進。與此同時，檢測儀器設備也越來越精密、靈敏，這就要求所使用的試劑、稀釋劑和水要達到很高的質量標準。在高效液相色譜法分析中，水質的重要性到底如何呢?
fanxiangsepudetiduxituozuinengshuomingwenti。yinweifanxiangsepuzhongdeduogesepuzhuxuyaodaliangdeshuizhirongji，ershuizhirongjideyoujiwuranwuhuibeisepuzhuduanbusuoxifu，zaihouxudetidutuoxiguochengzhonghuichengweitidutuoxidefengzhi。
在高效液相色譜法中，反相HPLC法fa是shi最zui常chang采cai用yong的de分fen離li方fang法fa，但dan也ye麵mian臨lin著zhe一yi些xie可ke能neng影ying響xiang數shu據ju質zhi量liang的de風feng險xian。所suo以yi要yao最zui大da程cheng度du的de避bi免mian交jiao叉cha汙wu染ran的de可ke能neng性xing。這zhe些xie交jiao叉cha汙wu染ran可ke能neng來lai自zi樣yang本ben中zhong，也ye可ke能neng是shi實shi驗yan用yong玻bo璃li器qi皿min中zhong的de未wei被bei洗xi脫tuo成cheng分fen造zao成cheng了le在zai流liu動dong相xiang汙wu染ran。另ling外wai，係xi統tong磨mo損sun產chan生sheng的de微wei粒li、色譜柱上沉積的雜質都有可能成為汙染源。
根據研究，在液相分析中最困難的就是實驗用超純水中雜質帶來的汙染。我們可以通過假峰數量是否增加、基線是否不平等現象來判斷其是否被汙染。
有經驗的實驗員會在進液相色譜之前，先對色譜用水進行過濾，脫氣。但常常有一點還是被忽略，色譜用瓶裝超純水TOC含量可能高達幾百ppb。在調查有機物對HPLC的汙染影響時進行了兩個實驗。
在(zai)第(di)一(yi)個(ge)實(shi)驗(yan)中(zhong)，在(zai)預(yu)置(zhi)柱(zhu)中(zhong)對(dui)溶(rong)劑(ji)進(jin)行(xing)濃(nong)縮(suo)，然(ran)後(hou)一(yi)步(bu)步(bu)的(de)在(zai)分(fen)析(xi)柱(zhu)中(zhong)洗(xi)脫(tuo)。在(zai)第(di)二(er)個(ge)實(shi)驗(yan)中(zhong)，利(li)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)對(dui)藥(yao)品(pin)混(hun)合(he)物(wu)進(jin)行(xing)洗(xi)提(ti)分(fen)離(li)。對(dui)混(hun)合(he)物(wu)進(jin)行(xing)了(le)1310次的超純水添加，以便能夠對用作稀釋劑的瓶裝超純水或新鮮超純水長時間內的使用結果給予評判。
圖2 用預置柱處理的HPLC瓶裝超純水和新鮮超純水進行色譜分析得到的色譜圖(a)254nm和(b)214nm，後一種超純水得到的基線更加清晰、準確。請注意a圖和b圖中的高度差異。
實驗結果討論
第一個實驗期望得到的結論是：通過一級前置濃縮使得水中的各種有機汙染物被前置柱端部所吸附。在洗脫時，有機物被色譜柱所洗脫，並表現為色譜圖中的峰值。圖2所示為HPLC用瓶裝水有機物汙染的色譜圖。在圖2a(254nm)中、圖2b(214nm)中可以看到，所使用的HPLC瓶裝水帶來了多個峰值，最大的峰值比前置濃縮處理的新鮮超純水的峰值要高15倍。
第二個試驗的結果在圖3中表示，是第50、290、530、770、1010和1310次ci添tian加jia超chao純chun水shui時shi的de情qing況kuang。基ji線xian漂piao移yi有you著zhe明ming顯xian的de差cha異yi。雖sui然ran都dou是shi梯ti度du脫tuo洗xi，尤you其qi是shi在zai低di波bo長chang的de梯ti度du脫tuo洗xi中zhong，基ji線xian漂piao移yi有you著zhe明ming顯xian的de不bu同tong，可ke以yi觀guan察cha到dao是shi隨sui著zhe時shi間jian的de增zeng加jia，HPLC瓶裝水中汙染物在色譜柱上積累的結果(圖3a)。而使用新鮮的超純水得出的實驗結果(見圖3b)則看不到基線漂移。
圖3 使用HPLC瓶裝超純水處理藥品混合物溶劑的(254nm)色譜圖(a)和使用新鮮生產出來的超純水作為水質溶劑的色譜圖(b)。作為有機溶劑使用的是Acetontril。峰值曲線：1-對乙酰氨基酚;2-乙酰唑胺;3-鎮靜安眠劑;4-卡馬西平;5-苯丙氨酸;6-司可巴比妥;7-萘丁美酮。
圖4a 通過HPLC用瓶裝水作為含水溶劑中的藥物混合物的色譜圖(214nm)。作為有機溶劑HPLC級乙腈中。峰1 :乙酰氨基酚，2:乙酰唑胺，3:苯巴比妥，4:卡馬西平，5:苯妥英鈉，6 :司可巴比妥，7:萘丁酮。圖4b.色譜圖(214 nm)的藥物混合物與新鮮製備超純水作為含水溶劑。作為有機溶劑HPLC級乙腈中。峰1 ：乙酰氨基酚，2：乙酰唑胺，3：苯巴比妥，4 ：卡馬西平，5：苯妥英鈉，6 ：司可巴比妥，7：萘丁酮。
在對兩種不同水質的試驗對比中，使用HPLC瓶(ping)裝(zhuang)水(shui)能(neng)觀(guan)察(cha)到(dao)異(yi)常(chang)峰(feng)值(zhi)，這(zhe)也(ye)表(biao)明(ming)超(chao)純(chun)水(shui)導(dao)致(zhi)流(liu)動(dong)相(xiang)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。當(dang)分(fen)析(xi)樣(yang)本(ben)中(zhong)未(wei)知(zhi)成(cheng)分(fen)時(shi)，非(fei)常(chang)容(rong)易(yi)將(jiang)異(yi)常(chang)峰(feng)值(zhi)誤(wu)判(pan)為(wei)樣(yang)本(ben)的(de)組(zu)成(cheng)成(cheng)分(fen)之(zhi)一(yi)，導(dao)致(zhi)樣(yang)本(ben)量(liang)化(hua)分(fen)析(xi)出(chu)現(xian)錯(cuo)誤(wu)。在(zai)使(shi)用(yong)HPLC分析用瓶裝水時，色譜圖中第一個因汙染導致的異常峰值在254nm處(約5min後，加水編號770)和214nm處(約15min後，加水編號530)。圖3a中，異常峰值下的麵積為苯巴比妥峰值(峰值編號3)的三倍，是苯妥英鈉峰值的兩倍(峰值編號為5)。
每(mei)一(yi)次(ci)的(de)色(se)譜(pu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)前(qian)，都(dou)要(yao)將(jiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)平(ping)衡(heng)到(dao)初(chu)始(shi)條(tiao)件(jian)。一(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)至(zhi)少(shao)要(yao)用(yong)五(wu)倍(bei)到(dao)十(shi)倍(bei)的(de)純(chun)水(shui)流(liu)動(dong)相(xiang)進(jin)行(xing)平(ping)衡(heng)，一(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)這(zhe)至(zhi)少(shao)是(shi)樣(yang)本(ben)添(tian)加(jia)容(rong)積(ji)的(de)兩(liang)次(ci)方(fang)。在(zai)本(ben)文(wen)的(de)兩(liang)個(ge)試(shi)驗(yan)中(zhong)，平(ping)衡(heng)所(suo)用(yong)純(chun)流(liu)動(dong)相(xiang)容(rong)積(ji)是(shi)樣(yang)本(ben)容(rong)積(ji)的(de)200倍。經過這種消耗相當大的平衡後，流動相中的微量水質汙染物在在色譜圖中帶來的幹擾就可以忽略不計了。
當利用色譜進行譜圖峰值判別或微量元素的檢測分析時，由流動相交叉汙染引起的背景峰值現象會降低方法的精確度、準zhun確que性xing或huo靈ling敏min性xing，對dui峰feng值zhi數shu據ju的de判pan斷duan產chan生sheng影ying響xiang。最zui糟zao糕gao的de情qing況kuang下xia，會hui因yin基ji線xian的de嚴yan重zhong漂piao移yi和he眾zhong多duo的de異yi常chang峰feng值zhi使shi得de整zheng個ge色se譜pu圖tu完wan全quan無wu法fa使shi用yong。
實驗結果表明：
新鮮超純水是HPLC法中最合適的流動相試劑。超純水中的有機雜質的含量最少(大約5ppb)，生產廠家不同，瓶裝水中有機汙染物的含量也大不相同，但可利用在線TOC監控技術進行監測。某些經過測試的瓶裝超純水中有機碳總量TOC的含量高達777ppb。超純水的生產工藝、生產廠的灌裝條件和包裝環境、瓶子和瓶蓋材料以及使用前瓶裝水在倉庫中的存放時間長短等因素都會影響超純水的質量。
新生產的超純水總有機碳含量較低。逆向滲透可以有效去除80%~90%的有機汙染物含量，逆向滲透後的電去離子又能夠有效的清除沉積的雜質(無機、有機離子)。電(dian)去(qu)離(li)子(zi)能(neng)夠(gou)完(wan)全(quan)利(li)用(yong)逆(ni)向(xiang)滲(shen)透(tou)清(qing)除(chu)有(you)機(ji)汙(wu)染(ran)物(wu)，因(yin)為(wei)它(ta)能(neng)排(pai)除(chu)穿(chuan)過(guo)逆(ni)向(xiang)滲(shen)透(tou)膜(mo)的(de)有(you)機(ji)酸(suan)和(he)胺(an)。活(huo)性(xing)碳(tan)吸(xi)附(fu)有(you)機(ji)物(wu)是(shi)第(di)三(san)種(zhong)減(jian)少(shao)水(shui)質(zhi)有(you)機(ji)物(wu)含(han)量(liang)的(de)方(fang)法(fa)。
第四種方法是紫外線光氧化法。分子經兩種波長(185nm和254nm)水shui銀yin紫zi外wai線xian燈deng照zhao射she超chao純chun水shui，產chan生sheng羥qiang基ji自zi由you基ji，並bing生sheng成cheng氧yang。一yi般ban情qing況kuang下xia，紫zi外wai線xian光guang氧yang化hua是shi整zheng個ge超chao純chun水shui生sheng產chan工gong藝yi中zhong的de最zui後hou一yi步bu，經jing這zhe一yi步bu處chu理li之zhi後hou，超chao純chun水shui中zhong的de有you機ji物wu含han量liang基ji本ben達da到dao技ji術shu標biao準zhun的de要yao求qiu。通tong過guo上shang述shu不bu同tong超chao純chun水shui生sheng產chan工gong藝yi的de組zu合he，可ke以yi在zai超chao純chun水shui生sheng產chan係xi統tong中zhong生sheng產chan出chu質zhi量liang穩wen定ding的de、有機碳總量很低(約5ppb)的高效液相色譜用水。
結論
在C18預置柱中處理的HPLC用瓶裝超純水在隨後的梯度洗脫時會在色譜圖中產生多個異常峰值。所以可以得出結論：HPLC用的瓶裝超純水比新鮮的超純水含有更高的有機物含量。
在(zai)典(dian)型(xing)的(de)反(fan)相(xiang)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)，要(yao)用(yong)多(duo)於(yu)色(se)譜(pu)柱(zhu)容(rong)積(ji)多(duo)倍(bei)的(de)弱(ruo)極(ji)性(xing)水(shui)質(zhi)溶(rong)劑(ji)對(dui)色(se)譜(pu)柱(zhu)進(jin)行(xing)平(ping)衡(heng)，使(shi)其(qi)滿(man)足(zu)初(chu)始(shi)條(tiao)件(jian)。水(shui)質(zhi)溶(rong)劑(ji)中(zhong)的(de)有(you)機(ji)雜(za)質(zhi)會(hui)吸(xi)附(fu)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)端(duan)部(bu)，會(hui)對(dui)色(se)譜(pu)圖(tu)產(chan)生(sheng)嚴(yan)重(zhong)幹(gan)擾(rao)，出(chu)現(xian)基(ji)線(xian)漂(piao)移(yi)和(he)異(yi)常(chang)峰(feng)，比(bi)如(ru)使(shi)用(yong)HPLC瓶裝超純水作為水質溶劑時。
研究證明：新鮮的超純水有著較低的有機碳總量，保證了基線的均勻穩定、也把異常峰出現概率減小到最低，可以用作HPLC檢測的流動相。
文章（文字）來源：嘉峪檢測網。
