一、色譜柱平衡

　　如果我們觀察到保留時間漂移
，首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相，但如果在流動相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長的時間來平衡色譜柱。

　　流動相汙染也可能是原因之一。溶於流動相中的少量汙染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時間的漂移。應注意：水是很容易汙染的流動相成分。

　　二
、固定相穩定性

　 　固定相的穩定性都是有限的，即使在推薦的PH範圍內使用，固定相也會慢慢水解。例如
，矽膠基質在pH4時水解穩定性最好。水解速度與流動相類型和配體有 關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定
；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。

　　經常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他矽膠基質鍵合相在水溶液環境中也可以發生水解
，如氨基鍵合相等。

　　三、色譜柱汙染

　　保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱汙染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾並吸附流動相攜帶的任何物質。汙染源可以是：流動相本身，流動相容器，連接管、泵
、進樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過實驗可判斷汙染的來源。

　 　樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分，就可能是使保留時間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白 及ji類lei脂zhi類lei化hua合he物wu，食shi品pin樣yang品pin中zhong的de澱dian粉fen
，環huan境jing水shui樣yang中zhong的de腐fu殖zhi酸suan等deng。通tong常chang樣yang品pin中zhong的de強qiang保bao留liu組zu分fen具ju有you較jiao高gao的de分fen子zi量liang，在zai此ci情qing況kuang下xia
，保bao留liu時shi間jian漂piao移yi的de同tong時shi或huo其qi後hou會hui有you反fan壓ya的de增zeng 加。可以通過使用固相提取（SPE）等樣品前處理方法來去除樣品基質的影響。

　　避免色譜柱汙染最簡單的方法是防患於未然。相比之下
，找到 問(wen)題(ti)的(de)所(suo)在(zai)並(bing)設(she)計(ji)有(you)效(xiao)的(de)清(qing)洗(xi)步(bu)驟(zhou)以(yi)去(qu)除(chu)汙(wu)染(ran)物(wu)要(yao)困(kun)難(nan)的(de)多(duo)。通(tong)常(chang)使(shi)用(yong)在(zai)給(gei)定(ding)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)下(xia)的(de)強(qiang)溶(rong)劑(ji)，但(dan)並(bing)非(fei)所(suo)有(you)汙(wu)染(ran)物(wu)都(dou)可(ke)以(yi)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)溶(rong)解(jie)。如(ru)THF可去除反相 色譜柱中的許多汙染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用於去除反相色譜柱中的蛋白。

　　使用保護柱是個非常有效的方法。反衝色譜柱僅是不得已時采用的辦法。

　　四
、流動相組成

　　流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因。如流動相中易揮發組分的揮發及循環使用流動相等。

　　五、疏水坍塌