1、色譜柱“堵”的表現
“堵”的(de)表(biao)現(xian)現(xian)象(xiang)就(jiu)是(shi)柱(zhu)壓(ya)異(yi)常(chang)升(sheng)高(gao),直(zhi)接(jie)原(yuan)因(yin)就(jiu)是(shi)流(liu)路(lu)不(bu)暢(chang)。堵(du)塞(sai)的(de)主(zhu)要(yao)位(wei)置(zhi)就(jiu)是(shi)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)前(qian)端(duan),最(zui)主(zhu)要(yao)原(yuan)因(yin)就(jiu)是(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)裏(li)有(you)雜(za)質(zhi),雜(za)質(zhi)的(de)主(zhu)要(yao)來(lai)源(yuan)就(jiu)是(shi)細(xi)菌(jun)。
2、色譜柱“堵”的原因分析
原因1:配製流動相時細菌汙染
shouxianwomenyaorenshidao,yibandeguochanjiachunqishibuxuyaoewaiguolvchuli,zhijieshiyongmeiyouwenti。jishishiyouxiegutaiweilizazhi,yenengzaiyexiangliuluxitongzuiqianduandeguolvtoushangpaichu,zhenzhengrongyiyinqiwentide,shishuizhongdexijun。jiejuetadefangfahenjiandan,jiushiquebaoshuidekekaoxing。zheliyouliangzhongfangshituijian:
(1)使用實驗室專用純水機,既方便又可靠,質量也放心。
(2) 成箱購買市售品牌純淨水,先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗,待菌落數合格方可使用。
原因2:使用流動相時的細菌汙染
流動相剛開始沒有長菌,在使用時卻產生了細菌汙染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。舉最簡單的例子:50%的甲醇水流動相,有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起,另一種方式是在流路A放純甲醇,流路B放純水。
從單純實驗效果來說,後一種有明顯的優點:首先是簡單,不需要實驗者另個計算配比混合,其次就是比例準確,能得到保留時間重複性極好的實驗效果。
但是,它有一個致命的缺陷,就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,而是用緩衝鹽溶液,本身就是優質肥料,細菌長得更迅速),一旦有細菌柱子就壞得很快。
所以,寧可犧牲小小的保留時間的重複性,也不要用純水溶液作為流動相的一組。可用10%的甲醇水代替純水溶液,這樣可以有效排除長細菌的隱患,既可作流動相,也可衝柱。
原因3:不適當操作
常見問題有以下幾種:
(1)在更換零件時選擇的型號有誤,接口不是很匹配,在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液淨化得不幹淨,長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
(3)在使用手動六通閥時,有些人可能由於手勁小的原因,轉動的不到位,於是造成流路形成了死堵,壓力快速升高超過警戒值。
(4)在zai使shi用yong金jin屬shu管guan路lu作zuo出chu廢fei液ye管guan時shi,應ying當dang注zhu意yi最zui好hao廢fei液ye瓶ping中zhong先xian放fang一yi些xie水shui,並bing把ba廢fei液ye管guan的de出chu口kou端duan放fang在zai液ye麵mian下xia。如ru果guo位wei於yu在zai液ye相xiang上shang且qie實shi驗yan使shi用yong較jiao高gao濃nong度du的de緩huan衝chong鹽yan溶rong液ye,在zai停ting機ji時shi可ke能neng在zai出chu口kou端duan結jie晶jing成cheng塊kuai並bing造zao成cheng堵du塞sai。這zhe種zhong情qing況kuang不bu常chang見jian,但dan卻que的de確que發fa生sheng過guo。
“堵”的原因講了不少,現介紹查堵的方法。
3、查堵的方法及處理措施
在發生“堵”的現象後,就需要找出原因,主要是什麼位置發生了“堵”。注意,絕大多數情況下,整個係統隻會有一個地方發生堵塞。
查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開,仔細觀察壓力數值,如果某一個部件(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大,可發展變化判斷。至於柱的堵塞,可以通過換同樣規格的柱的壓力是否一致來判斷。具體檢測步驟:
(1)首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管裏充滿液體,使PEEK管低於溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水衝洗幹淨。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,在檢查;
(2)打開衝洗閥(purge閥),使流動相不經過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾白頭堵塞。處理方法:將過濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下,過濾白頭正常,在檢查;
(3)把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩衝鹽堵塞,則用95%的水衝至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞,則要用比現在流動相更強的流動相衝至壓力正常。假如按上麵的方法長時間衝洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上,用流動相衝洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,隻有換柱子入口篩板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。
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