hengliangshipindeyingyangchengfenshi，yaocedingdanbaizhihanliang

，danyouyudanbaizhizuchengjiqixingzhidefuzaxing，zaishipinfenxizhong，tongchangyongshipindezongdanliangbiaoshi，danbaizhishishipinhandanwuzhidezhuyaoxingshi，meiyidanbaizhidouyouqihengdingdehandanliang，yongshiyanfangfaqiudemouyangpinzhongdehandanlianghou，tongguoyidingdehuansuanxishu。jikejisuangaiyangpindedanbaizhihanliang。

    一般食品蛋白質含氮量為l0％如肉、蛋、豌豆

、玉米等，其換算係數為6.25
，小麥取5.70
，大米5.95、乳製品6.38
、大豆5.17
，動物膠5.55。

    一、目的與要求：

    掌握微量凱氏法測定蛋白質總氮量的原理及操作技術。包括樣品的消

化，蒸餾吸收及滴定與含氮量的計算。

    二、原理：

    凱氏定氮法：shipinjingjialiusuanxiaohuashidanbaizhifenjie

，qizhongdansuyuliusuanhuahechengliusuanan。ranhoujiajianzhengliushianyouli
，yongpengsuanyexishouhou
，zaiyongyansuanhuoliusuandidinggenjuyansuanxiaohaoliang
，zaichengyiyidingdeshuzhijiweidanbaihanliang，qihuaxuefanyingshiruxia。

    (1)  2NH₂(CH₂)₂COOH+13H₂S0₄    (NH₄)2S0₄+6C0₂+12S0₂+  16H₂

    (2)(NH₄)₂SO₄+2NAOH-----2NH₂+2H₂O+NA₂SO₄

    (3)2NH₃+4H₃BO₃----(NH₄)₂B₄O₇+5H₂O

(4)(NH₄)₂B₄0₇+H₂S0₄+5H₂0-(NH₄)₉SO₄+4H₂BO₂

三、試劑與儀器：

1
、硫酸鉀

2
、硫酸銅   

3、硫酸

4、2％硼酸溶液

5
、40％氫氧化鈉溶液

6、混合指示劑：把溶解於95％乙醇的0.l％溴甲酚綠溶液10毫升和溶於95％乙醇的0.l％甲基紅溶液2毫升混合而成．

    7、0.OINHCL標準溶液或0．01N硫酸標準溶液．

8、凱氏微量定氮儀一套。

9、定氮瓶100m1或50ml一隻。

10
、三角瓶150ml 3隻。

11
、量筒50ml、lOml、lOOml。

12
、吸量管10ml隻。

13、酸式滴定管1支。

14、容量瓶100毫升1隻。

15、小漏鬥1隻。

四、操作方法：

1
、  樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當氮30-40mg），移入幹燥的100ml或500ml定氮瓶中
，加入0.2g硫酸銅
，3g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻後於瓶口放一小漏鬥，將瓶以45度(du)角(jiao)斜(xie)支(zhi)於(yu)有(you)小(xiao)孔(kong)的(de)石(shi)棉(mian)網(wang)上(shang)，小(xiao)火(huo)加(jia)熱(re)，待(dai)內(nei)容(rong)物(wu)全(quan)部(bu)炭(tan)化(hua)
，泡(pao)沫(mo)完(wan)全(quan)停(ting)止(zhi)後(hou)，加(jia)強(qiang)火(huo)力(li)
，並(bing)保(bao)持(chi)瓶(ping)內(nei)液(ye)體(ti)微(wei)沸(fei)
，至(zhi)液(ye)體(ti)呈(cheng)藍(lan)綠(lv)色(se)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)後(hou)，再(zai)繼(ji)續(xu)加(jia)熱(re)0.5小時。取下放冷，小心加20ml水，放冷後，移入100ml容量瓶中
，並用少量水洗定氮瓶
，洗液並入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸銨同一方法做試劑空白試驗。

2、  按圖裝好定氮裝置
，於水蒸氣發生器內裝水約2/3處加甲基紅指示劑數滴及數毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數粒玻璃珠以防暴沸，用調壓器控製，加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。

3、  想接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示劑1滴
，並使冷凝管的下端插入液麵下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應室

，並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內
，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml 40%qingyanghuanarongyedaoruxiaobolibei，tiqibolisaishiqihuanmanliurufanyingshi，lijijiangboligaisaijin，bingjiashuiyuxiaobolibeiyifanglouqi。jiajinluoxuanjia，kaishizhengliu，zhengqitongrufanyingshishiantongguolengningguanerjinrujieshoupingnei
，zhengliu5min。移動接收瓶
，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然後用少量水衝洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N鹽酸標準溶液定至灰色或藍紫色為終點。

同時吸取10.0ml試劑空白消化液按3操作。

計算：

X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) +F*100　

X：樣品中蛋白質的含量，g；

V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積，ml；

V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準溶液的體積
，ml；

N：硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度；

0.014：1N硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當於氮克數；

m：樣品的質量（體積），g（ml）
；

F：氮換算為蛋白質的係數。

   注：

（1）       樣品應是均勻的，固體樣品應預先研細混勻，液體樣品應振搖或攪拌均勻。

（2）       樣品放入定氮瓶內時

，不要沾附頸上，萬一沾附可用少量水衝下，以免被檢樣消化不完全

，結果偏低。

（3）       消化時如不容易呈透明溶液
，可將定氮瓶放冷後
，慢慢加入30%過氧化氫2-3ml，促使氧化。

（4）       zaizhenggexiaohuaguochengzhong，buyaoyongqianghuo
，baochihehuandefeiteng，shihuolijizhongzaikaishipingdibu
，yimianfuzaibishangdedanbaizhizaiwuliusuancunzaideqingkuangxia。shidanyousunshi。

（5）       ruliusuanqueshao，guoduodeliusuanjiahuiyinqiandesunshi，zheyanghuixingchengliusuanqingjia，erbuyuanzuoyong，yincidangliusuanguoduodebeixiaohaohuoyangpinzhongzhifanghanliangguogaoshi
，yaozengjialiusuandeliang。

（6）       加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點
，硫酸銅為催化劑，硫酸銅在蒸餾時作堿性反應的指示劑。

（7）       混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠
，可單獨使用0.1%甲基紅乙醇溶液。

（8）       氨是否完全蒸餾出來
，可用PH試紙試餾出液是否為堿性。

（9）       吸收葉也可以用0.01當量的酸代表硼酸，過剩的酸液用0.01N堿液滴定，計算時，A為試劑空白消耗堿液數，B為樣品消耗堿液數
，N為堿液濃度
，其餘均相同。

（10）   以硼酸為氨的吸收液，可省去標定堿液的操作，且硼酸的體積要求並不嚴格，亦可免去用移液管，操作比較簡便。

（11）   向(xiang)蒸(zheng)餾(liu)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)濃(nong)堿(jian)時(shi)，往(wang)往(wang)出(chu)現(xian)褐(he)色(se)沉(chen)澱(dian)物(wu)，這(zhe)是(shi)由(you)於(yu)分(fen)解(jie)促(cu)進(jin)堿(jian)與(yu)加(jia)入(ru)的(de)硫(liu)酸(suan)銅(tong)反(fan)應(ying)，生(sheng)成(cheng)氫(qing)氧(yang)化(hua)銅(tong)，經(jing)加(jia)熱(re)後(hou)又(you)分(fen)解(jie)生(sheng)成(cheng)氧(yang)化(hua)銅(tong)的(de)沉(chen)澱(dian)。有(you)時(shi)銅(tong)離(li)子(zi)與(yu)氨(an)作(zuo)用(yong)，生(sheng)成(cheng)深(shen)蘭(lan)色(se)的(de)結(jie)合(he)物(wu)[Cu(NH₃)₄]⁺⁺