一
、目的

掌握還原糖和總糖測定的基本原理，學習比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用。

二、原理

還hai原yuan糖tang的de測ce定ding是shi糖tang定ding量liang測ce定ding的de基ji本ben方fang法fa。還hai原yuan糖tang是shi指zhi含han有you自zi由you醛quan基ji或huo酮tong基ji的de糖tang類lei，單dan糖tang都dou是shi還hai原yuan糖tang，雙shuang糖tang和he多duo糖tang不bu一yi定ding是shi還hai原yuan糖tang

，其qi中zhong乳ru糖tang和he麥mai芽ya糖tang是shi還hai原yuan糖tang，蔗zhe糖tang和he澱dian粉fen是shi非fei還hai原yuan糖tang。利li用yong糖tang的de溶rong解jie度du不bu同tong
，可ke將jiang植zhi物wu樣yang品pin中zhong的de單dan糖tang、雙shuang糖tang和he多duo糖tang分fen別bie提ti取qu出chu來lai
，對dui沒mei有you還hai原yuan性xing的de雙shuang糖tang和he多duo糖tang
，可ke用yong酸suan水shui解jie法fa使shi其qi降jiang解jie成cheng有you還hai原yuan性xing的de單dan糖tang進jin行xing測ce定ding，再zai分fen別bie求qiu出chu樣yang品pin中zhong還hai原yuan糖tang和he總zong糖tang的de含han量liang（還原糖以葡萄糖含量計）。

還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定範圍內
，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關係
，利用分光光度計
，在540nmbochangxiacedingguangmiduzhi，zhaduibiaozhunquxianbingjisuan，biankeqiuchuyangpinzhonghaiyuantanghezongtangdehanliang。youyuduotangshuijieweidantangshi
，meiduanlieyigetangganjianxujiaruyifenzishui，suoyizaijisuanduotanghanliangshiyingchengyi0.9。


 

三、實驗材料、主要儀器和試劑

1. 實驗材料

小麥麵粉；精密pH 試紙。

2. 主要儀器

（1）具塞玻璃刻度試管：20mL×11

（2）大離心管：50mL×2

（3）燒杯：100mL×1

（4）三角瓶：100mL×1

（5）容量瓶：100mL×3

（6）刻度吸管：1mL×1
；2mL×2
；10mL×1

（7）恒溫水浴鍋

（8）沸水浴

（9）離心機

（10）扭力天平

（11）分光光度計

3. 試劑

（1）1mg/mL 葡萄糖標準液

準確稱取80℃烘至恒重的分析純葡萄糖100mg，置於小燒杯中，加少量蒸餾水溶解後

，轉移到100mL 容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL
，混勻，4℃冰箱中保存備用。

（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑

將6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解
，冷卻後加蒸餾水定容至1000mL，貯於棕色瓶中備用。

（3）碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶於100mL蒸餾水中。

（4）酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶於250mL70%乙醇中。

（5）6M HCl 和6M NaOH各100mL。

四、操作步驟

1. 製作葡萄糖標準曲線

取7支20mL 具塞刻度試管編號，按表1分別加入濃度為1mg/mL 的葡萄糖標準液、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑，配成不同葡萄糖含量的反應液。

                             表1 葡萄糖標準曲線製作

2. 樣品中還原糖和總糖的測定

（1）還原糖的提取

準確稱取3.00g 食用麵粉，放入100mL 燒杯中
，先用少量蒸餾水調成糊狀，然後加入50mL 蒸餾水
，攪勻
，置於50℃恒溫水浴中保溫20min
，使還原糖浸出。將浸出液（含沉澱）轉移到50mL 離心管中，於4000r/min下離心5min,沉澱可用20mL 蒸餾水洗一次，再離心
，將二次離心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。

（2）總糖的水解和提取

準確稱取1.00g食用麵粉

，放入100mL三角瓶中
，加15mL蒸餾水及10mL 6M HCl
，置沸水浴中加熱水解30min（水解是否完全可用碘-碘化鉀溶液檢查）。待三角瓶中的水解液冷卻後，加入1 滴酚酞指示劑，用6mol/LNaOH 中和至微紅色
，用蒸餾水定容在100mL容量瓶中，混勻。將定容後的水解液過濾，取濾液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混勻
，作為總糖待測液。

（3）顯色和比色

取4支20mL 具塞刻度試管

，編號，按表2 所示分別加入待測液和顯色劑，空白調零可使用製作標準曲線的0號管。加熱、定容和比色等其餘操作與製作標準曲線相同。

五、結果與計算：

計算出7
、8號管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值
，在標準曲線上分別查出相應的還原糖毫克數，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。