第一法   抽提法

一、目的與要求：

1、熟悉掌握粗脂肪的測定方法。

2、熟悉與掌握重量分析的基本操作
，包括樣品處理，烘幹，恒重等。

二
、原理：

本法為重量法
，用脂肪溶劑將脂肪提出後進行稱量
，該法適用於固體和液體樣品。通常將樣品浸於脂肪溶劑
，為乙醚或沸點30℃至60℃的石油醚
，借助於索氏提取器進行循環抽提。用本法提取的脂肪性物質為脂肪類物質的混合物，其中含有脂肪遊離脂肪酸
、磷脂\酯、固醇、芳香油某些色素及有機酸等。因此
，稱為粗脂肪。

三、試劑及儀器：

(1)無水乙醚

(2)海砂

(3)索氏提取器

(4)恒溫水浴鍋

(5)烘箱

(6)脫脂棉花

(7)脫脂濾紙

四
、操作步驟

(一)樣品的準備

    稱取樣品的重量根據材料中脂肪的含量而定,通常脂肪含量在10％以下的
，稱取樣品10-12克;脂肪含量為50-60％的，則稱取樣品2-4克，(可以用測定水分後的樣品)。

    將樣品在80-100℃烘箱去水分。一般烘4小(xiao)時(shi)，烘(hong)幹(gan)時(shi)要(yao)避(bi)免(mian)過(guo)熱(re)。冷(leng)卻(que)後(hou)
，準(zhun)確(que)地(di)稱(cheng)取(qu)一(yi)定(ding)量(liang)樣(yang)品(pin)，必(bi)要(yao)時(shi)，拌(ban)以(yi)精(jing)製(zhi)海(hai)砂(sha)


，無(wu)損(sun)地(di)移(yi)入(ru)濾(lv)紙(zhi)筒(tong)內(nei)
，用(yong)脫(tuo)脂(zhi)棉(mian)塞(sai)嚴(yan)
，將(jiang)濾(lv)紙(zhi)筒(tong)放(fang)人(ren)索(suo)氏(shi)提(ti)取(qu)器(qi)的(de)提(ti)取(qu)管(guan)內(nei)，注(zhu)意(yi)勿(wu)使(shi)濾(lv)紙(zhi)筒(tong)高(gao)於(yu)提(ti)取(qu)管(guan)的(de)虹(hong)吸(xi)部(bu)分(fen)。

    (二)抽取   

    將洗淨的提取瓶在1.5℃烘箱內烘幹至恒重,加乙醚約達到提取瓶容積的1／2-2／3，然後將提取器各部分按圖連接，注意不能漏氣。

    加熱提取時，應在電熱恒溫水浴中進行(水浴溫度約為40-50℃)也可以使用燈泡或電爐加熱的水浴鍋，嚴禁用火焰直接加熱索氏提取器。

zaijiareshiyimizhengfa

，yimizhengqiyoulianjieguanshangshengzhilengningqi，ningjiechengyetidirutiquguanzhong，cishiyangpinneidezhifangweiyimiyemianchaoguohongxiguangaoduhourongyouzhifangdeyimihongxiguanliurutiquping

，weicixunhuanchouti，tiaojieshuiyuwendu，shiyimimeixiaoshixunhuan3－5次，提出時間視樣品的性質而定，一般需6－12小(xiao)時(shi)，樣(yang)品(pin)含(han)有(you)脂(zhi)肪(fang)是(shi)否(fou)提(ti)取(qu)完(wan)全(quan)

，可(ke)以(yi)用(yong)濾(lv)紙(zhi)來(lai)粗(cu)略(lve)判(pan)斷(duan)
，從(cong)提(ti)取(qu)管(guan)內(nei)吸(xi)取(qu)少(shao)量(liang)的(de)乙(yi)醚(mi)並(bing)滴(di)在(zai)淨(jing)的(de)濾(lv)紙(zhi)上(shang)，待(dai)乙(yi)醚(mi)幹(gan)後(hou)，濾(lv)紙(zhi)上(shang)不(bu)留(liu)有(you)油(you)脂(zhi)的(de)半(ban)點(dian)則(ze)表(biao)示(shi)已(yi)經(jing)提(ti)取(qu)完(wan)全(quan)。

提取完全後，再將乙醚蒸到提取管內
，待乙醚液麵達到虹吸管的最高處以前
，取下提取管。

五、稱重和計算

將提取瓶中的乙醚全部蒸幹，洗淨外壁
，置於105℃烘箱幹燥至恒重，按下式計算樣品的促脂肪百分含量。

脂肪（﹪）=( W₁-W₀)/W×100

W₁：接受瓶和脂肪重量（克）。

W：樣品重量（克）。

W₀：接受瓶重量（克）。

六、注意事項

(1)樣品應幹燥後研細，裝樣品的濾紙筒一定要緊密，不能往外漏樣品
，否則重做。

（2）放入濾紙筒的高度不能超過回流彎管，否則乙醚不易穿透樣品，脂肪不能全部提出
，造成誤差。

（3）碰到含多量糖及糊精的樣品，要先以冷水處理
，等其幹燥後聯通濾紙一起放入提取器內。

（4）提取時水浴溫度不能過高，一般使乙醚剛開始沸騰即可（約45℃左右）。回流速度以每8-12次／時為宜。

    (5)所用乙醚必須是無水乙醚
，如含有水分則可能將樣品中的糖以及無機物抽出，造成誤差。

(6)用於樣品測定脂肪，可按下式計算原來樣品脂肪的含量．

脂肪（﹪）=( W₁-W₀)/W*(100-A)

 脂肪(％)= 物的耐鹽性得到不同程度提高。其中Ｚｈａｎｇ和Ｂｌｕｍｗａｌｄ(2001)、Ｚｈａｎｇ等(2001)報告的轉ＡｔＮＨＸ1基因番茄可耐200ｍｍｏｌ/Ｌ的氯化鈉,並把吸收的鈉鹽積累在葉片中,而果實的品質不受影響。這些研究預示著在提高植物耐鹽性方麵,離子的選擇吸收和跨膜運輸的基因工程是植物耐鹽性種質改良的有效途徑。

    A-100克樣品水分的含量(克)．

    (7)冷leng凝ning管guan上shang端duan最zui好hao連lian接jie一yi個ge氯lv化hua鈣gai幹gan燥zao管guan
，這zhe樣yang不bu僅jin可ke以yi防fang止zhi空kong氣qi中zhong水shui分fen進jin入ru，而er且qie還hai可ke以yi避bi免mian乙yi醚mi揮hui發fa在zai空kong氣qi中zhong，這zhe樣yang可ke防fang止zhi實shi驗yan室shi微wei小xiao環huan境jing空kong氣qi的de汙wu染ran。如ru無wu此ci裝zhuang置zhi
，塞sai一yi團tuan幹gan脫tuo脂zhi棉mian球qiu亦yi可ke。

    (8)如果沒有無水乙醚可以自己製備

，製備方法如下：在1000毫升乙醚中，加入無水石膏50克，振搖數次

，靜置1 0小時以上蒸餾
，收集35℃以下的餾液
，即可應用。

    (9)將提取瓶放在烘箱內幹燥時

，瓶口向一側傾斜45℃放置使揮發物乙醚易與空氣形成對流，這樣幹燥迅速。

    (10)樣品及醚提出物在烘箱內烘幹時間不要過長
，因為一些很不飽和的脂肪酸，容易在加熱過程中被氧化成不溶於乙醚的物質；中等不飽和脂肪酸，受熱容易被氧化而增加重量．在沒有真空幹燥箱的條件下
，可以在100-105℃幹燥1.5-3小時。

    (11)如果沒有乙醚或無水乙醚時，可以用石油醚提取，石油醚沸點30-60℃為好。

    (12)使用揮發乙醚或石油醚時，切忌用直接火加熱。應用電熱套電水浴，電燈泡等．

實驗法(二)   酸水解法

一
、原理：

樣品經酸水解後用乙醚提取，除去溶劑即得遊離及結合脂肪總量。

    二、試劑與儀器：

    1、鹽酸  

    2、95％乙醇

    3
、乙醚

    4、石油醚

    5
、100毫升具塞刻度量筒

    三
、操作方法：

    1、樣品處理

    (1)固體樣品：精密稱取約2克水

，混勻後再加重。毫升鹽酸。置於50毫升大試管內，加8毫升

(2)液體樣品：稱取10.0克，置於50毫升大試管內，加工0毫升鹽酸，  

    2
、將試管放70-80℃水浴中
，每隔5-10分鍾以玻璃棒攪拌一次
，至樣品消化完全為止，約40-50分鍾。

    3、取出試管，加人10毫升乙醇，混合。冷卻後將混合物移於100毫升具塞量筒中
，以25毫升乙醚分次洗試管
，一並倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒後，加塞振搖1分鍾，小心開塞，放出氣體
，再塞好。靜置12分鍾，小心開塞，並用石油醚-乙醚等量混合液衝洗塞及筒口附著的脂肪。靜置10-20分鍾，待上部液體清晰
，吸出上清液於已恒重的錐形瓶內
，再加5毫升乙醚於具塞量筒內，振搖
，靜置後，仍將上層乙醚吸出，放入原錐形瓶內。將錐形瓶置水浴上蒸幹，置95-105℃烘箱中幹燥2小時，取出放入幹燥器內冷卻0.5小時後稱重。

  計算：  

X=(m₁-m₀)/m₂     

X：樣品中脂肪的含量％；

m₁：接受瓶與脂肪的質量，g
；

m₂：接受瓶的質量，g。