但反複操作難免有失誤,
所以說優秀的實驗員
都是從正確使用移液槍開始的。
我們一起來看看吧!
移液槍是實驗操作上不可缺少的工具,對於頂尖高手而言,重要的就是實驗的誤差最小,重複再現性好,那就要注意正確移液槍使用。
1.影響移液槍精度因素
(1)溫度:室溫低時,手溫較高,使得空氣膨脹,吸入冷溶液時往往發生誤差
(2)氣密性:tip和槍體的結合部,以及槍內柱體之間的長期磨損,造成誤差
(3)吸速:容易造成tip內氣泡產生,而且會汙染槍頭
(4)試劑的揮發:吸揮發性高的試劑時,蒸汽進入槍頭,內壓增高,結果在壓出液體時,壓力變大,而產生誤差。
解決辦法:反複抽吸4-5次就可改善。
2.具體使用方法
更換tip法:最精確。
A 調節旋鈕到所需刻度位置,訣竅:首先可略超過一些,再回旋至刻度。注意禁止超過最大刻度,避免人為誤差。
B 插上tip:無菌操作時,要注意動作迅速正確,不能用手碰tip,動作的力度要保持一致,禁止廢動作。普通操作時,可用拇指食指上緊,但手不能碰tip尖端處。
C 指壓到第一段,tip尖端接觸試劑。白色tip進到液麵1mm一下,黃色tip2-3mm,藍色tip2-4mm,避免液壓的影響造成的誤差。
D 緩慢吸試劑,禁止速度過快,液體進入槍頭。
E 移出tip後,先在容器內壁輕輕靠住,使tip外壁液體流下。
F 將tip貼在目標容器內壁,輕輕按到第一段,壓出液體。
G tip尖端在容器內壁略上滑動,保留尖端少量液體,移出目標容器,手指卸掉tip,注意不要使試劑濺出。
一隻tip分注法:不適用於揮發性,有毒性試劑。
(1)同上述A-D,移出液麵後,先緩慢按到第一段,再用力按到第二段,將試劑全壓出。
(2)同上述C,緩慢吸出液體。
(3)在目標容器液體上空,壓出試劑到第二段,注意壓的力度要和A相同,還應注意試劑不要四處飛濺。
(4)緩慢返回第一段,可重複上述操作。達到目標容器原有液體不汙染tip的目的。
轉移數μL的貴重試劑時的方法:
(1)同上述A-D,移出液麵後,在容器內壁輕按幾下,使外壁液體流下。白色tip進到液麵1mm以下,這最重要。
(2)tip尖端浸入目標容器的液麵下,緩慢壓到第一段。
(3)鬆開,返回到第一段,重新吸入液體,反複4-5次,洗淨tip內壁液體。
(4)將tip尖端移出液麵,在內壁輕輕靠住,壓出液體到第二段。
移液器套柄用力下壓,需要時小幅度旋轉即可。
錯誤操作:用力敲擊吸頭。此方法會帶來吸頭損壞甚至移液器套柄磨損,從而影響其密封性。
操作之前請先選擇正確的移液器,移液器可在10-100%量程範圍內操作,但在10%量程處操作對於移液技巧要求高,故推薦在35-100%量程範圍內操作。
量程調節:當由小量程調節至大量程時,朝所需量程方向連貫旋轉,旋轉到達超過所需量程1/3圈處再回調至所需量程。當由大量程調節至小量程時,直接連貫旋轉至所需量程。
用同一樣品重複吸液排液二至三次,潤洗為以後每次吸液提供相同的接觸麵,保證操作的一致性。
注意:高溫或者低溫液體請不要潤洗!
吸液時盡量保持垂直狀態,傾斜角度不能超過20°。
吸液後在液麵中保持一秒鍾再將吸頭平緩移開,這對於大容量移液器或者吸取粘性樣品尤為重要。
勻速連貫移液,控製好移液速度,太快會造成噴液,液體或者氣霧衝入移液器內部,汙染活塞等部件。
先將活塞按至第一檔排液,略作停頓後按至第二檔進行吹液。
排液四種方式:
移液器不宜長時間握在手裏,不用時最好將其掛在支架上或者掛在手上晾一下。
(1)吸取液體時一定要緩慢平穩地鬆開拇指,絕不允許突然鬆開,以防將溶液吸入過快而衝入取液器內腐蝕柱塞而造成漏氣。
(2)為獲得較高的精度,吸頭需預先吸取一次樣品溶液,然後再正式移液,因為吸取血清蛋白質溶液或有機溶劑時,吸頭內壁會殘留一層“液膜”,造成排液量偏小而產生誤差。
(3)濃度和粘度大的液體,會產生誤差,為消除其誤差的補償量,可由試驗確定,補償量可用調節旋鈕改變讀數窗的讀數來進行設定。
(4)可用分析天平稱量所取純水的重量並進行計算的方法,來校正取液器,1mL蒸餾水20℃時重0.9982g。
(5)移液器反複撞擊吸頭來上緊的方法是非常不可取的,長期操作會使內部零件鬆散而損壞移液器。
(6)移液器未裝吸頭時,切莫移液。
(7)在zai設she置zhi量liang程cheng時shi,請qing注zhu意yi旋xuan轉zhuan到dao所suo需xu量liang程cheng時shi,數shu字zi是shi否fou清qing清qing楚chu楚chu在zai顯xian示shi窗chuang中zhong,所suo設she量liang程cheng在zai移yi液ye器qi量liang程cheng範fan圍wei內nei不bu要yao將jiang按an鈕niu旋xuan出chu量liang程cheng,否fou則ze會hui卡ka住zhu機ji械xie裝zhuang置zhi,損sun壞huai了le移yi液ye器qi。
(8)移液器嚴禁吸取有強揮發性、強腐蝕性的液體(如,濃酸、濃堿、有機物等)。
(9)嚴禁使用移液器吹打混勻液體。
(10)不bu要yao用yong大da量liang程cheng的de移yi液ye器qi移yi取qu小xiao體ti積ji的de液ye體ti,以yi免mian影ying響xiang準zhun確que度du。同tong時shi,如ru果guo需xu要yao移yi取qu量liang程cheng範fan圍wei以yi外wai較jiao大da量liang的de液ye體ti,請qing使shi用yong移yi液ye管guan進jin行xing操cao作zuo。
zuoweiyeticaozuozhongzuichangyongdeshoudongketiaojingmiyiyeqi,zaishiyongguochengzhongyouxiecuowudecaozuohuigeicaozuobenshendailaiwucha,youxiehuizaochengjiqidesunhuaideng,zaizhelijiandanzongjieruxia:
錯誤:裝配吸頭時用移液器反複撞擊吸頭,以上緊
正確:插入吸頭,左右輕轉旋轉上緊吸頭
分析:撞擊會造成移液器內部齒輪組合的鬆動,長期操作會對移液器的精確性造成影響。
錯誤:吸頭與移液器不匹配,影響氣密性
正確:選用與移液器匹配的,有質量保證的吸頭
分析:吸頭的不匹配,主要表現為對氣密性的影響。會直接影響移液器的精確性,通常會移液操作會小於設定量。
錯誤:吸液時,移液器傾斜吸液
正確:垂直吸液
分析:傾斜的狀態會造成氣壓麵的改變。會對移液精度造成影響。
錯誤:吸頭內含有未打出的液體時,移液器平置於桌麵
正確:將移液器垂直掛在移液器支架上
分析:吸(xi)頭(tou)內(nei)含(han)有(you)未(wei)打(da)出(chu)液(ye)體(ti),移(yi)液(ye)器(qi)平(ping)放(fang)之(zhi)後(hou)液(ye)體(ti)有(you)可(ke)能(neng)會(hui)流(liu)到(dao)移(yi)液(ye)器(qi)體(ti)內(nei)部(bu),這(zhe)會(hui)對(dui)移(yi)液(ye)器(qi)內(nei)部(bu)組(zu)件(jian)造(zao)成(cheng)影(ying)響(xiang),嚴(yan)重(zhong)的(de)會(hui)造(zao)成(cheng)損(sun)壞(huai),較(jiao)差(cha)汙(wu)染(ran)等(deng)情(qing)況(kuang)的(de)發(fa)生(sheng)。
錯誤:用大量程的移液器移取小體積的液體
正確:移液體積需保證在移液器所提供的量程範圍之內才符合不準確度和不精確度的要求
分析:因為空氣墊的存在,是造成移液器不準確度的主要原因。移液器的選擇應該是最大量程,最接近目的液體轉移量的選型原則。
錯誤:吸取具有強揮發性的液體
正確:不建議用普通移液器做強揮發型液體轉移
分析:如果一定要移取強揮發性的液體,應該在移液結束後立刻拆開移液器,讓蒸汽揮發,同時,建議使用外置活塞式移液器。
錯誤:吸液速度和放液速度過快
正確:慢吸慢放
分析:快吸對於1mL及以上量程的移液器,很容易造成液體上衝。過快的放液會增加液體的殘留量。
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