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HPLC法在研究中的應用就是含量測定了，HPLC法應用於含量測定時哪些需要注意的問題？外標法含量計算方式有哪些注意事項是必知的？今天就和小編一起看看吧。
除鑒別和有關物質檢查外，HPLC法在化學藥物中的應用就是含量測定了，另外在製劑的含量均勻度、溶出度、釋放度檢驗項目中，HPLC法也發揮著越來越重要的作用，但其本質與含量測定一樣，都是準確定量的測定方法，因此，含量測定也包括含量均勻度、溶出度、釋放度等定量檢測項目。
1、HPLC法應用於含量測定時需要注意的問題 在建立一個新的HPLC法含量測定方法時，方法建立以及方法學驗證方案需要特別考慮下述多種因素對分析結果的影響。
（1）流動相緩衝鹽的pH值 流動相緩衝鹽的pH值對藥物的保留行為有影響，甚至會顯著改變某些堿性藥物的保留行為。見下圖1，當流動相中緩衝溶液的pH為3.0時，出峰順序為利多卡因、苯甲酰胺、酮洛芬，當流動相中緩衝溶液的pH為10.0時，三種藥物的出峰順序為酮洛芬、苯甲酰胺、利多卡因二即使是梯度洗脫，流動相中緩衝溶液的pH值仍然對藥物的保留行為產生影響。
(2)色譜柱 色譜柱的差異也會影響藥物的保留行為，即使是柱長、內徑、粒徑相同的色譜柱，由於填料性質的差異，藥物的保留時間、峰型有時會有較大差異。
(3)流動相組成 以多元維生素製劑的含量測定為例，某製劑中含有4種維生素：煙酰胺、維生素B6、維生素B2和維生素B1。如圖2所示，當流動相中己烷磺酸鈉和庚烷磺酸鈉的相對比例由1:1變為4:6時，不僅各組分的保留時間、峰形有變化，甚至峰3、峰4沒有實現分離。 2、含量的計算方式 HPLC的(de)定(ding)量(liang)方(fang)法(fa)可(ke)以(yi)分(fen)為(wei)內(nei)標(biao)法(fa)和(he)外(wai)標(biao)法(fa)。在(zai)儀(yi)器(qi)發(fa)展(zhan)的(de)初(chu)期(qi)，由(you)於(yu)進(jin)樣(yang)重(zhong)複(fu)性(xing)差(cha)。為(wei)了(le)保(bao)證(zheng)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)采(cai)用(yong)內(nei)標(biao)法(fa)較(jiao)多(duo)。隨(sui)著(zhe)自(zi)動(dong)進(jin)樣(yang)裝(zhuang)置(zhi)的(de)發(fa)展(zhan)，進(jin)樣(yang)的(de)重(zhong)複(fu)性(xing)已(yi)經(jing)足(zu)夠(gou)精(jing)密(mi)，從(cong)90年代開始，大部分的內標法已經被外標法取代。
但是，在藥典製劑品種中還有一定數量的HPLC含han量liang測ce定ding方fang法fa采cai用yong內nei標biao法fa。除chu了le尚shang未wei修xiu訂ding以yi外wai，以yi前qian擔dan心xin的de進jin樣yang重zhong複fu性xing已yi經jing不bu是shi采cai用yong內nei標biao法fa的de原yuan因yin，主zhu要yao是shi因yin為wei藥yao品pin製zhi劑ji含han量liang測ce定ding中zhong樣yang品pin回hui收shou率lv或huo樣yang品pin製zhi備bei方fang法fa的de回hui收shou率lv影ying響xiang，供gong試shi品pin溶rong液ye在zai萃cui取qu、離(li)心(xin)處(chu)理(li)或(huo)其(qi)他(ta)樣(yang)品(pin)溶(rong)液(ye)製(zhi)備(bei)過(guo)程(cheng)中(zhong)不(bu)能(neng)保(bao)證(zheng)樣(yang)品(pin)的(de)完(wan)全(quan)提(ti)取(qu)，以(yi)及(ji)輔(fu)料(liao)對(dui)低(di)含(han)量(liang)藥(yao)物(wu)的(de)吸(xi)附(fu)作(zuo)用(yong)，采(cai)用(yong)內(nei)標(biao)法(fa)可(ke)避(bi)免(mian)因(yin)供(gong)試(shi)品(pin)前(qian)處(chu)理(li)及(ji)進(jin)樣(yang)體(ti)積(ji)誤(wu)差(cha)對(dui)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)的(de)影(ying)響(xiang)。
3、外標法含量計算方式注意事項 外標法含量計算公式：含量=m對*P*A樣*V樣/（m樣*A對*V對）*100%
（1）樣品稱樣量 a、稱(cheng)量(liang)方(fang)式(shi)采(cai)用(yong)的(de)是(shi)加(jia)量(liang)法(fa)還(hai)是(shi)減(jian)量(liang)法(fa)，都(dou)是(shi)很(hen)有(you)講(jiang)究(jiu)的(de)。正(zheng)常(chang)情(qing)況(kuang)下(xia)，肯(ken)定(ding)要(yao)采(cai)用(yong)加(jia)量(liang)法(fa)，一(yi)次(ci)稱(cheng)取(qu)到(dao)位(wei)，這(zhe)樣(yang)才(cai)能(neng)得(de)到(dao)準(zhun)確(que)的(de)稱(cheng)樣(yang)量(liang)。 b、稱量操作稱量時，是否足夠小心，不會在轉移樣品時使樣品撒漏，這個是非常重要的。 c、樣品如果具有揮發性，直接稱樣時，必然會揮發一部分造成誤差；lingwai，ruguoyangpinbuwending，huozairongyezhongbuwending，nameshijishanglaijiang，yeshiyingxiangleyangpinliang。haiyou，yangpinyaobaozhengjunyun，gutibubishuo，yetiyangpinyaobaozhengshijunxiang，chengliangzhiqianyaoyaoyun。
（2）對照品含量 a、對照品質量對照品是否有合法來源，其含量值是否準確。
b、對dui照zhao品pin的de保bao存cun對dui照zhao品pin是shi否fou按an要yao求qiu保bao存cun，也ye是shi至zhi關guan重zhong要yao的de。因yin為wei如ru果guo對dui照zhao品pin沒mei有you按an照zhao規gui定ding保bao存cun，那na麼me其qi右you可ke能neng會hui發fa生sheng降jiang解jie，進jin而er影ying響xiang含han量liang值zhi；另(ling)外(wai)，如(ru)果(guo)對(dui)照(zhao)品(pin)是(shi)保(bao)存(cun)在(zai)冰(bing)箱(xiang)中(zhong)，稱(cheng)量(liang)時(shi)，應(ying)取(qu)出(chu)放(fang)在(zai)幹(gan)燥(zao)器(qi)中(zhong)回(hui)至(zhi)室(shi)溫(wen)再(zai)稱(cheng)量(liang)，否(fou)則(ze)其(qi)很(hen)有(you)可(ke)能(neng)會(hui)吸(xi)收(shou)空(kong)氣(qi)中(zhong)的(de)水(shui)分(fen)，影(ying)響(xiang)含(han)量(liang)值(zhi)。同(tong)理(li)，如(ru)果(guo)對(dui)照(zhao)品(pin)引(yin)濕(shi)性(xing)很(hen)強(qiang)的(de)話(hua)，長(chang)期(qi)暴(bao)露(lu)在(zai)空(kong)氣(qi)中(zhong)，也(ye)會(hui)使(shi)其(qi)P發生變化。
（3）樣品峰麵積 a、如果所用的分析方法可靠性不好，樣品峰麵積或保留時間容易變化，那麼檢測結果也是很重現性不好的。 b、如果儀器係統被汙染產生殘留，而本身峰麵積就不大的情況下，這個因素產生的誤差就更明顯了。 c、如果樣品峰形不夠好，或者分離度不夠好的情況下，積分就很重要。
（4）樣品的稀釋體積 a、容量瓶、移液管等體積是否準確。一般來說，新買的容量瓶體積是符合要求的，但是也難免會買到個別次品，這就需要進行校驗了。 b、容量瓶、移液管規格。這個是很重要的，一般大家都能注意這個問題，做到合理使用。 c、試驗習慣問題，容量瓶在使用時，不能使其至於高於40攝氏度的環境下，否則容量瓶會發生變形。 d、定量操作，這個包括容量瓶和移液管的使用，注意事項：
yishiyiyeguanxiyeshi，yemianbuyaogaokedutaiduo，fangyeshiqianwanbuyaoyongxierqiuchui，bingqiejinliangbaochimeicicaozuoshijiandouyiyang，zhandudaderongyeyouqixuyaoruci。 二er是shi觀guan察cha液ye麵mian時shi，要yao使shi容rong量liang瓶ping和he移yi液ye管guan保bao持chi垂chui直zhi，這zhe時shi很hen多duo人ren喜xi歡huan用yong三san根gen手shou指zhi捏nie住zhu，其qi實shi這zhe樣yang不bu容rong易yi保bao持chi垂chui直zhi，最zui好hao用yong兩liang根gen手shou指zhi，輕qing輕qing捏nie住zhu就jiu好hao。 三是注意接觸容量瓶移液管等的麵積越小越好，以免體溫加熱溶液。
e、如果對照品和樣品沒有用同一份稀釋劑稀釋的話，兩者就會有差異，受到溫度變化的影響也是不一樣的。比如，所用的稀釋劑為水：甲醇=50：50，duizhaorongyeyongdeshishangcipeihaode，ranhouyangpinyongdeshixinpeide，yinweishuihejiachunhunhehuifangre，qitijiyehuizengda，dengdaojinyangshi，yangpinrongyehuizhishiwen，tijijianxiao，jiuhuizaochengjiancejieguopiangao。 f、如果前後室溫變化的話，也會造成分析結果的誤差。比如，對照溶液進樣時，是正常上班時間，實驗室開了空調，溫度為20℃，而到樣品溶液進樣時，已經到下班時間了，實驗室人員下班時將空調關閉，實驗室溫度已經降為10℃，這時樣品溶液濃度肯定也會增大。 g、youyuduizhaopinxiangduibijiaoguizhong，yibanshiyanshidouhuibaocunyiduanshijian。ruguoxiacifenxishimeiyouhuizhishiwen，huocishishiwenyuduizhaopinrongyepeizhishidewenduyijingfashenglemingxiandebianhua，douhuizaochengfenxijieguodewucha。 h、youxierenpeihaoyangpinhou，xihuanyongshouquwozherongliangping，xixinguanchadejiuhuifaxianyihuizhihouyemianjiumingxiangaoyukedu。ruguocaozuozhemeiyouzhuyizhedian，youdeyangpinlijijinyang，youdepaiduiguoleyihuizaijinyang，jiuhuizaochengwucha。
