濾光係統
酶mei標biao儀yi最zui簡jian單dan的de是shi用yong濾lv光guang方fang式shi來lai劃hua分fen。一yi般ban來lai說shuo,可ke以yi分fen為wei濾lv光guang片pian型xing和he光guang柵zha型xing兩liang大da類lei。也ye有you一yi些xie酶mei標biao儀yi裏li麵mian同tong時shi裝zhuang上shang了le濾lv光guang片pian和he光guang柵zha。但dan是shi濾lv片pian和he光guang柵zha並bing不bu能neng同tong時shi完wan成cheng同tong一yi個ge檢jian測ce,本ben質zhi上shang還hai隻zhi是shi把ba濾lv片pian和he光guang柵zha放fang在zai了le一yi起qi,並bing沒mei有you使shi兩liang者zhe糅rou合he而er產chan生sheng新xin的de技ji術shu突tu破po。
guangzhaxinglvguangxitongjuyoushiyongfangbian,keyijinxingguangpusaomiao,linghuoxingdengyoudian。dangran,lvguangpianxitongyeyouqixianzhudeyoushi,lirujiagejiaoweibianyi,jiancelingmindugao,daikuandekexuanzexing,keyijinxingkuaisudelvguangpianqiehuan,kepeibeiyouzidongjiayangxitong,zaihuaxuefaguangjiancezhongguangxiandetouguolvgao。
目前,濾光片係統應用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。
測定波長
一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有最大吸收,當pH值降為L 0時,最大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光係數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有最大消光係數,如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定最常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nmbochangdelvguangpian,qitalvguangpiankegenjuzijidexuyaoxuanze。youshi,youdeshiyanshixiwangyongmeibiaoyizuoweiliangshenghuaceding,gumeibiaoyishengchanchangjiaduiqishengchandemeibiaoyikuozhanleziwaijiancegongneng,cishixuyaoyige340 nm波長濾光片。此時,酶標儀的測定波長範圍就成為340—750nm或800nm。
酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什麼情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定;而“雙波長”則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定,酶標儀最後打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自於板孔上諸如指紋、灰塵、髒物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長,且不必設空白孔。
測定的吸光度範圍
測定的吸光度範圍
通常,酶標儀的吸光度測定範圍在0~2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0~2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以(yi)上(shang),並(bing)且(qie)能(neng)保(bao)持(chi)很(hen)好(hao)的(de)精(jing)密(mi)度(du)與(yu)線(xian)性(xing)。因(yin)此(ci),對(dui)於(yu)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)範(fan)圍(wei)不(bu)必(bi)去(qu)刻(ke)意(yi)追(zhui)求(qiu)大(da)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)範(fan)圍(wei),主(zhu)要(yao)要(yao)看(kan)在(zai)一(yi)定(ding)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)範(fan)圍(wei)內(nei)的(de)線(xian)性(xing)和(he)精(jing)密(mi)度(du)如(ru)何(he)。
光學係統
酶標儀的光學係統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢(jian)測(ce),一(yi)般(ban)為(wei)矽(gui)光(guang)管(guan)或(huo)光(guang)導(dao)纖(xian)維(wei),除(chu)測(ce)定(ding)通(tong)道(dao)外(wai),有(you)的(de)酶(mei)標(biao)儀(yi)還(hai)有(you)一(yi)個(ge)參(can)比(bi)通(tong)道(dao),每(mei)次(ci)測(ce)定(ding)可(ke)進(jin)行(xing)自(zi)我(wo)校(xiao)準(zhun)。酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)光(guang)學(xue)係(xi)統(tong)功(gong)能(neng)如(ru)何(he),均(jun)可(ke)通(tong)過(guo)酶(mei)標(biao)儀(yi)測(ce)定(ding)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)範(fan)圍(wei)、線性度、精jing密mi度du和he準zhun確que度du等deng體ti現xian出chu來lai。光guang學xue係xi統tong好hao的de話hua,則ze上shang述shu指zhi標biao也ye應ying較jiao佳jia。測ce定ding的de精jing密mi度du與yu測ce定ding通tong道dao之zhi間jian的de均jun一yi性xing有you直zhi接jie關guan係xi。單dan通tong道dao可ke避bi免mian因yin通tong道dao不bu同tong所suo致zhi的de差cha異yi。
檢測速度
酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)檢(jian)測(ce)速(su)度(du)是(shi)指(zhi)其(qi)完(wan)成(cheng)比(bi)色(se)測(ce)定(ding)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)時(shi)間(jian)。檢(jian)測(ce)速(su)度(du)快(kuai),有(you)利(li)於(yu)提(ti)高(gao)檢(jian)測(ce)的(de)精(jing)密(mi)度(du),即(ji)避(bi)免(mian)由(you)於(yu)測(ce)定(ding)過(guo)程(cheng)中(zhong),因(yin)測(ce)定(ding)時(shi)間(jian)不(bu)同(tong)所(suo)致(zhi)的(de)各(ge)微(wei)孔(kong)間(jian)吸(xi)光(guang)度(du)間(jian)的(de)差(cha)異(yi)。目(mu)前(qian)市(shi)場(chang)上(shang)常(chang)見(jian)的(de)酶(mei)標(biao)儀(yi)檢(jian)測(ce)速(su)度(du)都(dou)非(fei)常(chang)快(kuai),通(tong)常(chang)在(zai)數(shu)秒(miao)鍾(zhong)內(nei)。
震板功能
酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISAbankongjinxingbisecedingqianduiqijinxingzhendanghunyun,shibankongneiyansejunyi。muqianshichangshangchangjiandemeibiaoyijunyouzhenbangongneng,suobutongdeshizhenbanfangshi,youdekeanshangxia、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節;有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀,在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑後,可不必振蕩混勻,直接放人酶標儀上測定即可。
溫育功能
溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動精確地控製儀器內部的溫度,使得ELISA測ce定ding中zhong微wei孔kong板ban條tiao的de溫wen育yu過guo程cheng可ke在zai儀yi器qi內nei部bu完wan成cheng,而er無wu需xu再zai外wai配pei溫wen箱xiang。目mu前qian,隻zhi有you少shao部bu分fen酶mei標biao儀yi具ju有you此ci種zhong功gong能neng,溫wen育yu功gong能neng隻zhi是shi酶mei標biao儀yi的de一yi個ge附fu加jia功gong能neng,是shi否fou具ju有you並bing不bu能neng說shuo明ming酶mei標biao儀yi檔dang次ci的de高gao低di及ji儀yi器qi的de優you劣lie。作zuo為wei實shi驗yan室shi是shi否fou選xuan擇ze,則ze可ke根gen據ju自zi己ji實shi驗yan室shi的de條tiao件jian及ji需xu要yao來lai決jue定ding。
軟件功能
軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學、紫(zi)外(wai)和(he)凝(ning)集(ji)等(deng)數(shu)據(ju)的(de)統(tong)計(ji)分(fen)析(xi)並(bing)報(bao)告(gao)結(jie)果(guo)的(de)功(gong)能(neng)。軟(ruan)件(jian)功(gong)能(neng)是(shi)中(zhong)高(gao)檔(dang)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)一(yi)個(ge)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)的(de)功(gong)能(neng)。如(ru)果(guo)硬(ying)件(jian)方(fang)麵(mian)區(qu)別(bie)不(bu)大(da),則(ze)軟(ruan)件(jian)就(jiu)成(cheng)為(wei)判(pan)定(ding)酶(mei)標(biao)儀(yi)優(you)劣(lie)的(de)惟(wei)一(yi)指(zhi)標(biao)。對(dui)於(yu)用(yong)戶(hu)來(lai)說(shuo),好(hao)的(de)軟(ruan)件(jian)功(gong)能(neng),對(dui)實(shi)際(ji)工(gong)作(zuo)會(hui)有(you)較(jiao)大(da)的(de)幫(bang)助(zhu)。ELISA定性測定,酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定“灰區”(即指測定吸光度處於cut—off周圍的一定區域,此區域內結果應為“可疑”)的(de)統(tong)計(ji)計(ji)算(suan)功(gong)能(neng),不(bu)但(dan)方(fang)便(bian)了(le)實(shi)驗(yan)室(shi)工(gong)作(zuo)人(ren)員(yuan),而(er)且(qie)在(zai)某(mou)些(xie)特(te)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia),有(you)很(hen)高(gao)的(de)實(shi)用(yong)價(jia)值(zhi)。因(yin)此(ci),如(ru)目(mu)的(de)是(shi)定(ding)量(liang)測(ce)定(ding),則(ze)在(zai)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)軟(ruan)件(jian)功(gong)能(neng)中(zhong),最(zui)好(hao)要(yao)有(you)這(zhe)種(zhong)曲(qu)線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程(cheng)計(ji)算(suan)分(fen)析(xi)功(gong)能(neng)。其(qi)他(ta)諸(zhu)如(ru)連(lian)點(dian)、直線等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用於微量生化測定,則此類回歸計算就很有必要。
此外,酶標儀兼做酶標動力學、ningjifanyingcedingsuoxuderuanjianshifouyingjubei,dangranyeyinggenjushiyongmudeerding。youyucileiruanjianyibandoujiaoweianggui,meibiaoyichanglingwaidanduanxupeibei,ruguobushishiyanshiteshuxuyao,jiububiqiangqiuzhezhongruanjiangongneng。
語言界麵
通(tong)常(chang)進(jin)口(kou)的(de)中(zhong)高(gao)檔(dang)酶(mei)標(biao)儀(yi)人(ren)機(ji)對(dui)話(hua)多(duo)采(cai)用(yong)英(ying)文(wen)。這(zhe)對(dui)於(yu)某(mou)些(xie)基(ji)層(ceng)實(shi)驗(yan)室(shi)可(ke)能(neng)會(hui)存(cun)在(zai)語(yu)言(yan)方(fang)麵(mian)的(de)困(kun)難(nan),從(cong)而(er)難(nan)以(yi)最(zui)大(da)限(xian)度(du)地(di)發(fa)揮(hui)酶(mei)標(biao)儀(yi)的(de)作(zuo)用(yong)。為(wei)解(jie)決(jue)這(zhe)方(fang)麵(mian)的(de)問(wen)題(ti),已(yi)有(you)一(yi)些(xie)酶(mei)標(biao)儀(yi)采(cai)用(yong)了(le)中(zhong)文(wen)界(jie)麵(mian)。這(zhe)樣(yang)就(jiu)大(da)大(da)方(fang)便(bian)了(le)廣(guang)大(da)基(ji)層(ceng)實(shi)驗(yan)室(shi)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)的(de)使(shi)用(yong)。
zongshangsuoshu,jinguanmeibiaoyidefazhanjiweikuaisu,zhongleifanduo,gongnengyebuduanjiaqiang,danqizuigenbendegongyongshibubiande,jibiseceding。dafanbiseceding,qijibenyaoqiujiushizaiyidingxiguangdufanweineiyaoyouhaodecedingzhunquexing、線性和精密性。同樣的吸光度範圍,測定的準確性、線性和精密性越好則酶標儀亦越佳。
而且,由於用於酶標儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條,為保證測定的孔間重複性,則測定速度也是一個較重要的性能指標。至於其他如震板、溫育及有關的軟件功能,則是選配功能,不影響酶標儀其他的使用性能。
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