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（1）平板上有過多的水分；
（2）劃線時接種環未經反複灼燒；
（3）多區劃線，三區或四區劃線。
2、塗布和傾注的區別：
塗布利於觀察，但由於塗布棒上會帶有少量的菌液，可能影響計數的準確性；傾注更為準確，但不利於觀察菌落的狀態。
Beuchat和Matsuda等人分別對這兩種方法作了大量比較試驗後發現，對黴菌計數來說，塗抹法有以下幾方麵優越於傾注法：
①培養出的黴菌菌落數較多；
②培養所需的時間較短；
③黴菌孢子、菌落形態特征發育完全，便於鑒定。
這(zhe)是(shi)因(yin)為(wei)絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)黴(mei)菌(jun)是(shi)好(hao)氧(yang)的(de)，在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)生(sheng)長(chang)快(kuai)，發(fa)育(yu)好(hao)，而(er)混(hun)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)發(fa)育(yu)就(jiu)受(shou)影(ying)響(xiang)，而(er)且(qie)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)傾(qing)注(zhu)時(shi)黴(mei)菌(jun)孢(bao)子(zi)易(yi)受(shou)熱(re)損(sun)傷(shang)。
3、培養基的選擇：
培養基的選擇應根據實驗材料和檢驗目的來確定。目前國標方法中使用的培養基有：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)、孟加拉培養基(RBC)、高鹽察氏培養基(CAO)，其中PDA和RBC適合於一般的黴菌和酵母菌生長，而CAO則適合於高滲性黴菌生長，酵母菌幾乎不長。
在日常檢測中我們發現，有些常見的耐高滲性黴菌，如局限曲黴、謝瓦曲黴、赤曲黴、Wallemia等在PDA、RBC上生長非常緩慢或不長，而這些菌在高滲培養基如M40Y、DG18(M40Y瓊脂配方：蔗糖400g，麥芽提取汁20g，酵母提取汁5g，瓊脂20g，氯黴素50mg，蒸餾水1000ml；DG18瓊脂配方：葡萄糖10g，蛋白腖5g，KH2PO41g，MgSO4・7H2O 0.5g，氯黴素0.1g，0.2%二氯硝基苯胺1.0mL，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，PH6.5)上則正常生長。孢子、形態特征發育良好，而且酵母菌也能在M40Y、DG18上生長，因此，若能同時采用PDA和M40Y(或DG18)分離培養各類樣品中的黴菌，將能更全麵地反映出汙染黴菌的菌相。特別是對幹燥食品、高糖食品、淹漬食品等，更有必要同時采用M40Y或DG18。
由(you)於(yu)黴(mei)菌(jun)中(zhong)很(hen)多(duo)種(zhong)類(lei)不(bu)會(hui)產(chan)生(sheng)有(you)毒(du)的(de)黴(mei)菌(jun)毒(du)素(su)，危(wei)害(hai)較(jiao)小(xiao)，而(er)有(you)的(de)菌(jun)株(zhu)即(ji)使(shi)汙(wu)染(ran)數(shu)量(liang)不(bu)多(duo)，但(dan)其(qi)產(chan)生(sheng)的(de)黴(mei)菌(jun)毒(du)素(su)卻(que)危(wei)害(hai)較(jiao)大(da)，因(yin)此(ci)僅(jin)作(zuo)黴(mei)菌(jun)計(ji)數(shu)並(bing)不(bu)能(neng)全(quan)麵(mian)反(fan)映(ying)其(qi)危(wei)害(hai)程(cheng)度(du)，重(zhong)要(yao)的(de)是(shi)要(yao)知(zhi)道(dao)汙(wu)染(ran)菌(jun)的(de)菌(jun)相(xiang)，才(cai)能(neng)更(geng)好(hao)地(di)判(pan)斷(duan)被(bei)汙(wu)染(ran)食(shi)品(pin)的(de)安(an)全(quan)程(cheng)度(du)。
為此，國外有些研究者設計出各類選擇性培養基，可以識別產毒的黴菌。如AFPA培養基(配方：酵母提取汁20g,蛋白腖10g,檸檬酸鐵銨0.5g,0.2%二氯硝基苯胺1.0mL,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,PH5.6)用於分離黃曲黴毒素產生菌高汙染率的食品。產黃曲黴毒素的菌株黃曲黴和寄生曲黴在AFPA上30℃培養2~3天就形成背麵有亮橙黃色的特征性菌落，非常容易識別。有人利用該培養基分離黃曲黴高汙染食品花生、玉米等,取得了滿意的結果。因此,針對不同樣品,有目的地設計出相應的選擇性培養基,以篩選汙染菌中的危險菌群,將是一個值得探索的方向。
4、 培養基配製時應注意的問題：
(1)滅菌溫度要嚴格控製，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高，過高會導致糖分焦化，影響質量；
(2)瓊脂培養基不能反複溶化。反複溶化會破壞培養基中的營養成分；
(3)培養基不能反複滅菌，反複滅菌也會導致營養成分的破壞；
(4)含瓊脂的培養基滅菌後，要搖勻。
5、 平板的保存：
大多數平板如 VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色係列等要避光低溫保存。
6、 產品的保存：
(1) 幹粉培養基：避光幹燥，結塊後不能使用。
(2) 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，避免水浴加熱。
(3) 抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導致靈敏度的下降。
(4) 兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結果。
7、添加劑的添加：
（1）溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應太高。
（2）定量。過多會抑製一些目標菌，太少又導致雜菌的過度生長。
8、培養溫度的掌握：
（1）真菌類。25-28℃培養
（2）細菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養溫度在30℃左右。
（3）其他，一般在36℃左右。
9、接種方法：
常用的方法主要有劃線、三點接種、穿刺接種、傾注接種、塗布接種、液體接種。
10、革蘭氏染色方法：
染色時間的掌握、衝洗的方法。
11、生化實驗：
（1）接種的方法
（2）氧化型和發酵型實驗操作
（3）陽性菌種的對照
（4）接種前的純化。挑取單個菌落進行一係列的生化。
12、最適計數範圍
黴菌菌落由孢子和菌絲組成，相當擴散，在直徑9cmdepingminli，junluoshushaoduojiuxianghujiaochazhongdie，yingxiangjishu，danshuliangtaishaoyouhuichanshengjiaodadewucha，yincixuanzeshidangdexishidujishushibaozhengjieguozhunquedeguanjianhuanjiezhiyi。
我們對這方麵作了一些觀察研究，首先是將實驗菌株的斜麵培養物製成含有約106個/ml的孢子懸液，並用血球計數器在顯微鏡下準確計數，然後將孢子懸液作10-1~10-6倍稀釋，吸取不同稀釋度的稀釋液接種於PDA，25℃培養5天後計數。30種常見黴菌的兩種不同計數方法所得結果比較顯示，大部分菌株每平板含有10~50個菌落的稀釋度時的計數與顯微鏡計數結果最接近；有近一半的菌株，每個平板含50~100個菌落已較難計數，而大部分菌株，超過100個/平皿或小於10個/平皿的計數結果就與顯微計數結果存在較大差別，因此，應盡量選擇10~50個/平皿的稀釋度進行黴菌計數。
而對上述提及的菌絲很豐富、菌落特別擴散的毛黴、根黴、犁頭黴等菌株，則應在更少的範圍內計數(30個/平皿以內)。為控製黴菌的生長速度和菌落的生長範圍，可在培養基中添加少量抗生素，如氯黴素(50~100mg/L)，金黴素(20~100mg/L)，慶大黴素(50mg/L)，土黴素(100mg/L)等。
