培(pei)養(yang)基(ji)的(de)作(zuo)用(yong)是(shi)為(wei)微(wei)生(sheng)物(wu)提(ti)供(gong)生(sheng)長(chang)和(he)繁(fan)殖(zhi)所(suo)需(xu)的(de)營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)和(he)環(huan)境(jing)條(tiao)件(jian)。培(pei)養(yang)基(ji)的(de)質(zhi)量(liang)直(zhi)接(jie)關(guan)係(xi)到(dao)檢(jian)驗(yan)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)和(he)可(ke)靠(kao)性(xing),因(yin)此(ci)對(dui)於(yu)微(wei)生(sheng)物(wu)檢(jian)驗(yan)而(er)言(yan),培(pei)養(yang)基(ji)的(de)質(zhi)量(liang)控(kong)製(zhi)尤(you)為(wei)重(zhong)要(yao)。
培養基的主要作用有兩方麵:
①提供微生物生長所需的營養物質;
②培養基具有選擇性和差異性,可以選擇特定類型的細菌或真菌進行培養,並區分不同種類的微生物。
因此,在微生物檢驗中,必須對培養基進行嚴格的質量控製,隻有優質的培養基才能為微生物檢驗提供精準、可靠的檢測結果。
培養基的概述
培養基是用於保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質,按照物理性質可以分成液體培養基、固體培養基、半固體培養基和脫水培養基,按照化學性質可以分成天然培養基、組合培養基和半組合培養基,按照功能可以分成選擇性培養基、鑒別培養基。不同培養基要求不同,保存方式也不同。在受熱、吸潮後,培養基極易被微生物汙染或分解變質,需在避光、防潮、陰涼處儲存。
培養基的采購驗收
微生物檢驗需使用大量培養基。為提高檢驗效率,實驗室多使用商品化即用型培養基、商品化脫水合成培養基。在培養基的采購中,應選擇國內、外知名商家的產品,並向生產企業索要培養基成分名稱、產品編號、批號、最終 pH 值、儲存條件、生產日期、有效期、質控報告和必要的相關信息,以保證培養基的質量。在產品交貨驗收時,購買者需對產品包裝的完整性、生產日期、有效期和產品合格證明等進行核驗,檢查培養基的顏色、性質等是否符合實驗室相關標準,培養基檢驗合格後進行入庫登記。
培養基的製備
配製要求
正zheng確que按an要yao求qiu製zhi備bei培pei養yang基ji是shi做zuo好hao微wei生sheng物wu檢jian驗yan的de基ji礎chu。實shi驗yan人ren員yuan使shi用yong商shang品pin化hua脫tuo水shui合he成cheng培pei養yang基ji配pei製zhi培pei養yang基ji時shi,要yao嚴yan格ge按an照zhao產chan品pin說shuo明ming進jin行xing配pei製zhi,並bing做zuo好hao配pei製zhi記ji錄lu。在zai配pei製zhi過guo程cheng中zhong,實shi驗yan人ren員yuan需xu要yao嚴yan格ge遵zun守shou相xiang關guan操cao作zuo標biao準zhun,佩pei戴dai口kou罩zhao進jin行xing操cao作zuo,避bi免mian吸xi入ru含han有you有you毒du物wu質zhi的de培pei養yang基ji粉fen末mo,稱cheng量liang、溶解應使用專門的角匙,不使用金屬製品,避免金屬離子混入培養基,影響微生物生長;準確稱量後,應先加入適量的水充分溶解,再加水至所需量進行加熱,加熱中應不斷攪拌,防止培養基在容器底部積聚;調節pH值,分裝到比培養基體積最少大 20% 的容器中,按說明要求進行滅菌。粉末狀態的培養基開封後應存放在陰涼幹燥處,及時使用,環境濕度過大會使培養基出現受潮、結塊、汙染等情況。對於瓊脂類培養基,可采用沸水浴或流動蒸汽的加熱方式進行融化,但反複凍融隻允許進行1次。
配製用水
水是配製培養基不可或缺的一部分,一般使用純化水。還應定期檢查培養基配製用水的微生物汙染情況,應符合純化水要求。
滅(mie)菌(jun)能(neng)確(que)保(bao)培(pei)養(yang)基(ji)質(zhi)量(liang)達(da)標(biao),實(shi)驗(yan)室(shi)常(chang)采(cai)用(yong)濕(shi)熱(re)滅(mie)菌(jun)法(fa),培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)按(an)照(zhao)產(chan)品(pin)使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)要(yao)求(qiu)進(jin)行(xing)滅(mie)菌(jun),每(mei)次(ci)滅(mie)菌(jun)需(xu)放(fang)置(zhi)壓(ya)力(li)蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌(jun)化(hua)學(xue)指(zhi)示(shi)卡(ka),驗(yan)證(zheng)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)。一(yi)些(xie)培(pei)養(yang)基(ji)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)煮(zhu)沸(fei)的(de)方(fang)式(shi)進(jin)行(xing)滅(mie)菌(jun),如(ru)結(jie)晶(jing)紫(zi)中(zhong)性(xing)紅(hong)膽(dan)鹽(yan)瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)、亞硫酸鉍瓊脂培養基。實驗人員應及時將培養基從滅菌鍋中取出,盡快冷卻至所需溫度,防止加熱過度,對實驗數據造成影響;要檢查培養基的pH值、色澤、均勻度等指標,確保符合要求後貼上標簽,標明名稱、日期、效期等基本信息。製備平板時,將滅菌後的培養基傾注於滅菌過的幹燥平皿中,在平皿中形成至少3mm的厚度,直徑90mm 的平皿通常需要加入18~20 mL 的瓊脂培養基,需要保存或培養超過48h的培養基應傾注更多培養基 。培養基冷卻凝固後應立即使用或儲存,儲存時應標記好培養基名稱及製備日期,密封後放置在2~8 ℃冰箱中。製備斜麵培養基時,應先將培養基分裝到試管中,通常每管加入10mL培(pei)養(yang)基(ji),高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun),在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)冷(leng)卻(que)凝(ning)固(gu)前(qian)將(jiang)試(shi)管(guan)傾(qing)斜(xie)一(yi)定(ding)角(jiao)度(du)放(fang)置(zhi),待(dai)冷(leng)卻(que)凝(ning)固(gu)後(hou)方(fang)能(neng)使(shi)用(yong)和(he)保(bao)存(cun)。對(dui)於(yu)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji),根(gen)據(ju)使(shi)用(yong)要(yao)求(qiu)直(zhi)接(jie)分(fen)裝(zhuang)至(zhi)三(san)角(jiao)瓶(ping)或(huo)試(shi)管(guan)中(zhong),滅(mie)菌(jun),冷(leng)卻(que)至(zhi)室(shi)溫(wen)直(zhi)接(jie)使(shi)用(yong)或(huo)保(bao)存(cun)。驗收入庫的培養基應嚴格按照生產廠家標明的儲存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封後的商品化脫水合成培養基要放置在密閉容器中保存,在瓶身注明首次開封日期 。實驗室自製培養基應避光、幹燥保存,需冷藏的培養基可放置在2~8℃冰箱中保存,平板保存時間通常為2~4周,瓶裝及試管裝培養基保存時間一般為3~6個月,具體效期應進行驗證。每次使用培養基前,要觀察顏色變化、流動性、均勻性、是否結塊和是否汙染等情況。如果發現培養基出現受潮、結塊、其他性狀明顯改變的情況,應停止使用。