這裏以大家最常用的大腸埃希菌為例
，其它菌種方法類似。

也可以使用TSA平板進行培養，如果轉接的是冷凍保藏管中的菌，最好再轉接一次
，使用第二次轉接的菌種。

取(qu)菌(jun)液(ye)的(de)時(shi)候(hou)
，需(xu)要(yao)先(xian)對(dui)菌(jun)液(ye)進(jin)行(xing)振(zhen)蕩(dang)或(huo)吹(chui)打(da)混(hun)勻(yun)

，方(fang)可(ke)吸(xi)取(qu)菌(jun)液(ye)。可(ke)以(yi)不(bu)用(yong)進(jin)行(xing)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋(shi)，隻(zhi)要(yao)能(neng)保(bao)證(zheng)最(zui)後(hou)加(jia)入(ru)到(dao)測(ce)試(shi)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)菌(jun)的(de)數(shu)量(liang)符(fu)合(he)要(yao)求(qiu)即(ji)可(ke)。

取菌液時同樣需要先將試管中的菌液進行混勻。

不建議逐日觀察結果

，因為平板中可能有凝集水， 逐日觀察拿動平板，可能會導致水落到菌落上，菌跟著水流到下一個空白地方，導致結果不準確；另外如果是ù菌，因為有孢子，拿動也會導致孢子落到平板空白地方，影響結果。

菌懸液使用有時效性要求

2015版<中國藥典>和<歐洲藥典>8.0版要求如果放置在室溫，菌懸液必須在2小時內使用

，如果放置在2-8℃保存

，可以在24小時內使用。

那ô問題來了，菌懸液的菌的數量需要在48小時後才能確定，但是在24小時之內菌懸液必須使用，所以在不知道菌含量的情況下，樣品測試需要做至少三個梯度。

筆者之前在微生物實驗室做了5次的菌懸液製備

，為了保證實驗的成功，ÿ次都是要做三個梯度
，雖然大多數都是同一個稀釋級的含量符合要求，但是還是偶爾有另一個稀釋級才符合要求的時候，所以筆者ÿ次都乖乖的做三個梯度的測試，還好筆者那個時候依據的法規中，日常的無菌檢查和控製菌檢查中û有陽性對照的要求。

這(zhe)裏(li)說(shuo)的(de)三(san)個(ge)梯(ti)度(du)不(bu)是(shi)說(shuo)隻(zhi)是(shi)計(ji)數(shu)，而(er)是(shi)菌(jun)懸(xuan)液(ye)實(shi)際(ji)運(yun)用(yong)的(de)測(ce)試(shi)中(zhong)也(ye)需(xu)要(yao)三(san)個(ge)梯(ti)度(du)，舉(ju)個(ge)例(li)子(zi)，某(mou)個(ge)無(wu)菌(jun)產(chan)品(pin)無(wu)菌(jun)檢(jian)查(zha)中(zhong)的(de)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)測(ce)試(shi)，需(xu)要(yao)做(zuo)三(san)個(ge)對(dui)照(zhao)。當(dang)然(ran)，同(tong)樣(yang)的(de)產(chan)品(pin)方(fang)法(fa)適(shi)用(yong)性(xing)，培(pei)養(yang)基(ji)促(cu)生(sheng)長(chang)測(ce)試(shi)也(ye)是(shi)如(ru)此(ci)。流(liu)程(cheng)圖(tu)如(ru)下(xia)：

這個流程圖中，還是省略了一些步驟
，一句話帶過的倍比稀釋


，做過的小夥伴們知道，這個說起來容易做起來難。

另外在接收菌種和從冷凍保藏管中取出菌種來使用時，還需要進行相應的鑒定，所以不要覺得這個流程好冗長
，其實已經是簡單版的。