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平板劃線分離法:是shi指zhi把ba混hun雜za在zai一yi起qi的de微wei生sheng物wu或huo同tong一yi微wei生sheng物wu群qun體ti中zhong的de不bu同tong細xi胞bao用yong接jie種zhong環huan在zai平ping板ban培pei養yang基ji表biao麵mian，通tong過guo分fen區qu劃hua線xian稀xi釋shi而er得de到dao較jiao多duo獨du立li分fen布bu的de單dan個ge細xi胞bao，經jing培pei養yang後hou生sheng長chang繁fan殖zhi成cheng單dan菌jun落luo，通tong常chang把ba這zhe種zhong單dan菌jun落luo當dang作zuo待dai分fen離li微wei生sheng物wu的de純chun種zhong。有you時shi這zhe種zhong單dan菌jun落luo並bing非fei都dou由you單dan個ge細xi胞bao繁fan殖zhi而er來lai的de，故gu必bi須xu反fan複fu分fen離li多duo次ci才cai可ke得de到dao純chun種zhong。其qi原yuan理li是shi將jiang微wei生sheng物wu樣yang品pin在zai固gu體ti培pei養yang基ji表biao麵mian多duo次ci作zuo“由點到線”稀釋而達到分離目的的。
為方便劃線，一般培養基不宜太薄，ÿ皿約傾倒20ml培養基，培養基應厚薄均勻，平板表麵光滑。劃線分離主要有分區劃線法和連續劃線法兩種（如圖1， A、B）。
圖1
分區劃線法是將平板分四區，故又稱四分區劃線法。劃線時ÿ次將平板轉動60~70°劃線，ÿ換一次角度，應將接種環上的菌燒死後，再通過上次劃線處劃線；
另一種連續劃線法是從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。
1）連續劃線法
接種環於酒精燈外焰燒至紅透，接種棒也要充分灼燒，最後再集中燒接種環至紅。
qingqingyaoyundaijiezhongshiguan，zuoshoushouxintuodaijiezhongshiguandicebu，youshouzhijiezhonghuan，youshouxiaozhibaxiashiguansai，yujiujingdengfujinjiangjiezhonghuanshenjinshiguan，shaohou，zaicharudaijiejiezhongyezhong，zhanyixia，qumanyihuan，chouchu、燒塞、蓋蓋、放(fang)回(hui)試(shi)管(guan)架(jia)。或(huo)將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)通(tong)過(guo)稍(shao)打(da)開(kai)皿(min)蓋(gai)的(de)縫(feng)隙(xi)伸(shen)入(ru)平(ping)板(ban)，在(zai)平(ping)板(ban)邊(bian)緣(yuan)空(kong)白(bai)處(chu)接(jie)觸(chu)一(yi)下(xia)使(shi)接(jie)種(zhong)環(huan)冷(leng)卻(que)，然(ran)後(hou)以(yi)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)接(jie)種(zhong)環(huan)直(zhi)接(jie)取(qu)平(ping)板(ban)上(shang)待(dai)分(fen)離(li)純(chun)化(hua)的(de)菌(jun)落(luo)。
於靠近酒精燈處打開平皿蓋約30°，右手將環伸進平皿，將菌種點種在平板邊緣一處，輕輕塗布於瓊脂培養基邊緣（如圖2），抽出接種環，蓋上平皿蓋，然後將接種環上多餘的培養液在火焰中灼燒，打開平皿蓋約30°伸shen入ru接jie種zhong環huan，待dai接jie種zhong環huan冷leng卻que後hou，再zai與yu接jie種zhong液ye處chu輕qing輕qing接jie觸chu，開kai始shi在zai平ping板ban表biao麵mian輕qing巧qiao滑hua動dong劃hua線xian，接jie種zhong環huan不bu要yao嵌qian入ru培pei養yang基ji內nei劃hua破po培pei養yang基ji，線xian條tiao要yao平ping行xing密mi集ji，充chong分fen利li用yong平ping板ban表biao麵mian積ji，注zhu意yi勿wu使shi前qian後hou兩liang條tiao線xian重zhong疊die，劃hua線xian完wan畢bi，關guan上shang皿min蓋gai。灼zhuo燒shao接jie種zhong環huan，待dai冷leng卻que後hou放fang置zhi接jie種zhong架jia上shang。培pei養yang皿min倒dao置zhi於yu適shi溫wen的de恒heng溫wen箱xiang內nei培pei養yang（以免培養過程皿蓋冷凝水滴下，衝散已分離的菌落）。培養後在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，鏡檢後再接種斜麵。
圖2
2）分區劃線法
取菌、接種、培養方法與“連續劃線法”相似。
分區劃線法分離時平板分四個區，故又稱四分區劃線法。其中第4區是單菌落的主要分布區，故其劃線麵積應最大。為防止第4區內劃線與1、2、3區線條相接觸，應使4區線條與1區線條相平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120°左右。
先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3~5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋，將平板轉動60~70°，右手把接種環上多餘菌體燒死，將燒紅的接種環在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的菌體為菌源，由1區向2區作第2次平行劃線。第2次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60~70°，同樣依次在3、4區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。
該法主要用於單個菌落的純培養、保存菌種或觀察細菌的某些特性。
（1）左zuo手shou平ping托tuo兩liang支zhi試shi管guan，拇mu指zhi按an住zhu試shi管guan的de底di部bu。外wai側ce一yi支zhi試shi管guan是shi斜xie麵mian上shang長chang有you菌jun苔tai的de菌jun種zhong試shi管guan，內nei側ce一yi支zhi是shi待dai接jie的de空kong白bai斜xie麵mian，兩liang支zhi試shi管guan的de斜xie麵mian同tong時shi向xiang上shang。用yong右you手shou將jiang試shi管guan塞sai旋xuan鬆song，以yi便bian在zai接jie種zhong時shi容rong易yi拔ba出chu。
（2）右手拿接種環（如握ë筆一樣），在火焰上先將環端燒紅滅菌，然後將有可能伸入試管的其餘部λ也過火滅菌．
（3）jiangliangzhishiguandeshangduanbingqi，kaojinhuoyan，yongyoushouxiaozhihezhangxinjiangliangzhishiguandeshiguansaiyibingjiazhubachu，shiguansairengjiazaishouzhong，ranhourangshiguankouhuanhuanguohuoyan。zhuyibudejiangshiguansaisuiyidiuyuzhuoshangshoudaozhanwu，shiguankouqiewushaodeguotangyimianzhalie。
（4）將已灼燒的接種環伸入外側的菌種試管內。先把接種環的先端觸及無菌苔的培養基上使其冷卻（如果操作迅速，此時接種環尚δ完全冷卻）。再(zai)根(gen)據(ju)需(xu)要(yao)用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)沾(zhan)取(qu)一(yi)定(ding)量(liang)的(de)菌(jun)苔(tai)，注(zhu)意(yi)勿(wu)刮(gua)破(po)培(pei)養(yang)基(ji)。將(jiang)沾(zhan)有(you)菌(jun)苔(tai)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)迅(xun)速(su)抽(chou)出(chu)試(shi)管(guan)，注(zhu)意(yi)勿(wu)使(shi)接(jie)種(zhong)環(huan)碰(peng)到(dao)管(guan)壁(bi)或(huo)管(guan)口(kou)上(shang)。
（5）迅速將沾有菌種的接種環伸入另一支待接斜麵試管的底部，輕輕向上劃線（直線或曲線，根據需要確定），勿劃破培養基表麵。
（6）接好種的斜麵試管口再次過火焰，試管塞底部過火焰後立即塞入試管內。
（7）將沾有菌苔的接種環在火焰上燒紅滅菌。先在內焰中燒灼，使其幹燥後，再在外焰中燒紅，以免菌苔驟熱，會使菌體爆濺，造成汙染。
（8）放下環後，再將試管塞旋緊，在試管外麵上方距試管口2～3cm處貼上標簽。
斜麵接種方法及無菌操作過程如下具體操作過程見圖3。
圖3
用接種針經火焰滅菌，沾取少量菌種，垂直地穿入試管固體培養基中心至底部，然後將挑起菌落的接種針平行於管壁插入瓊脂斜麵底部、沿著原接種線將針拔出、燒試管塞和試管口、塞上試管塞，再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。要做到手穩、動作輕巧快速。見下圖4。（a:垂直接種法，b：水平接種法）
1）液體接種法
baokuocongwaimianjunzhongjierupeiyangye，huocongyetijunzhongjieruyetipeiyangye，liangzhongqingkuangdoukeyiyongjiezhonghuanjiezhong。danzaipeiyangliangbijiaodadeqingkuangxia，yetijiezhongyicaiyongyiyeguanjiezhong，yaoqiuwujuncaozuo。
左zuo手shou持chi試shi管guan，右you手shou將jiang燒shao灼zhuo過guo的de接jie種zhong環huan伸shen入ru菌jun種zhong管guan，待dai冷leng卻que後hou，取qu菌jun液ye一yi環huan，立li即ji移yi入ru培pei養yang基ji管guan中zhong，在zai接jie近jin液ye麵mian的de管guan壁bi上shang輕qing輕qing研yan磨mo，然ran後hou將jiang試shi管guan稍shao傾qing斜xie，並bing沾zhan取qu少shao許xu液ye體ti調tiao和he，使shi菌jun液ye混hun合he於yu培pei養yang基ji中zhong。
2）半固體培養基接種法
將jiang燒shao灼zhuo過guo的de接jie種zhong針zhen插cha入ru菌jun種zhong管guan冷leng卻que後hou，沾zhan取qu菌jun液ye少shao許xu，立li即ji垂chui直zhi插cha入ru半ban固gu體ti培pei養yang基ji的de中zhong心xin至zhi接jie近jin於yu管guan底di處chu，但dan不bu可ke直zhi刺ci至zhi管guan底di，然ran後hou循xun原yuan·退出。管口通過火焰，塞上棉塞，接種針燒灼滅菌後放下。
將上述已接種好的培養物，37℃度恒溫箱內培養，24小時後取出觀察結果。
用無菌移液管吸取菌懸液0.1mL，滴di加jia於yu培pei養yang基ji平ping板ban上shang，右you手shou持chi無wu菌jun塗tu布bu棒bang，左zuo手shou拿na培pei養yang皿min，並bing用yong拇mu指zhi將jiang皿min蓋gai打da開kai一yi縫feng，在zai火huo焰yan旁pang右you手shou持chi塗tu布bu棒bang與yu培pei養yang皿min平ping板ban表biao麵mian將jiang菌jun液ye自zi平ping板ban中zhong央yang均jun勻yun向xiang四si周zhou塗tu布bu擴kuo散san，切qie忌ji用yong力li過guo猛meng將jiang菌jun液ye直zhi接jie推tui向xiang平ping板ban邊bian緣yuan或huo將jiang培pei養yang基ji劃hua破po。接jie種zhong後hou，將jiang平ping板ban倒dao置zhi於yu恒heng溫wen箱xiang中zhong，培pei養yang觀guan察cha。
