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本(ben)測(ce)試(shi)方(fang)法(fa)采(cai)用(yong)沉(chen)降(jiang)法(fa)，即(ji)通(tong)過(guo)自(zi)然(ran)沉(chen)降(jiang)原(yuan)理(li)收(shou)集(ji)在(zai)空(kong)氣(qi)中(zhong)的(de)生(sheng)物(wu)粒(li)子(zi)於(yu)培(pei)養(yang)基(ji)平(ping)皿(min)，經(jing)若(ruo)幹(gan)時(shi)間(jian)，在(zai)適(shi)宜(yi)的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)讓(rang)其(qi)繁(fan)殖(zhi)到(dao)可(ke)見(jian)的(de)菌(jun)落(luo)進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)，以(yi)平(ping)板(ban)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)的(de)菌(jun)落(luo)數(shu)來(lai)判(pan)定(ding)潔(jie)淨(jing)環(huan)境(jing)內(nei)的(de)活(huo)微(wei)生(sheng)物(wu)數(shu)，並(bing)以(yi)此(ci)來(lai)評(ping)定(ding)潔(jie)淨(jing)室(shi)（區）的潔淨度。
2 所用的儀器和設備
2.1 高壓消毒鍋使用時應嚴格按照儀器說明書操作。
2.2 恒溫培養箱必須定期對培養箱的溫度進行校驗。
2.3 培養皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼矽酸玻璃培養皿。
2.4 普通肉湯瓊脂培養基的準備及滅菌見附件A
3 測試步驟
3.1 采樣方法
將已製備好的培養皿，按潔淨室沉降菌采樣點布置圖的要求放置，打開培養皿蓋，使培養基麵暴露30分鍾（靜態），再將培養皿蓋蓋上後倒置。
3.2 培養
3.2.1 全部采樣結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中培養。
3.2.2 在30℃-35℃培養箱中培養，時間不少於48h。
3.2.3 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。
3.3 菌落計數
3.3.1 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然後用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。
3.3.2 若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。
4 注意事項
4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性，準確性。
4.2 采取一切措施防止人為對樣本的汙染。
4.3 對培養基、培養條件及其他參數做詳細的記錄。
4.4 由(you)於(yu)細(xi)菌(jun)種(zhong)類(lei)繁(fan)多(duo)，差(cha)別(bie)甚(shen)大(da)，計(ji)數(shu)時(shi)一(yi)般(ban)用(yong)透(tou)射(she)光(guang)於(yu)培(pei)養(yang)皿(min)背(bei)麵(mian)或(huo)正(zheng)麵(mian)仔(zai)細(xi)觀(guan)察(cha)，不(bu)要(yao)漏(lou)計(ji)培(pei)養(yang)皿(min)邊(bian)緣(yuan)生(sheng)長(chang)的(de)菌(jun)落(luo)，並(bing)須(xu)注(zhu)意(yi)細(xi)菌(jun)菌(jun)落(luo)與(yu)培(pei)養(yang)基(ji)沉(chen)澱(dian)物(wu)的(de)區(qu)別(bie)，必(bi)要(yao)時(shi)用(yong)顯(xian)微(wei)鏡(jing)鑒(jian)別(bie)。
4.5 采樣前仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質，破損或汙染的應剔除。
5 測試規則
5.1 沉降菌檢測前，被檢測潔淨室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速控製在規定值內。
5.1.2 沉降菌檢測前，被檢測潔淨室（區）已經過消毒。
5.1.3 測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，並在報告中注明測試狀態。
5.2 測試人員
5.2.1 測試人員必須穿戴符合環境潔淨度級別的工作服。
5.2.2 靜態測試時，室內測試人員不得多於二人。
5.3 測試時間
5.3.1 對單向流，測試應在淨化空調係統運行不少於15min 後開始。
5.3.2 對非單向流，測試應在淨化空調係統正常運行不少於30min後開始。
5.4 沉降菌計數
5.4.1 采樣點數目及其布置
最少采樣點數目如下表
|
麵 積 m2 |
潔 淨 度 級 別 |
|||
|
A |
B |
C |
D |
|
|
<10 ≥10-<20 ≥20-<50 ≥50-<100 ≥100-<200 |
2-3 5 8 16 50 |
2-3 5 8 16 50 |
2 2 2 5 10 |
2 2 2 2 3 |
|
注：表中的麵積，對於單向流潔淨室，是指送風麵麵積。對於非單向流潔淨室是指房間的麵積。 |
||||
在滿足最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數見下表
|
潔淨度級別 |
所需Ф90mm培養皿數（以沉降30分鍾計） |
|
A、B C D |
14 2 2 |
采樣點的布置
工作區采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右（略高於工作麵）。
可在關鍵設備或關鍵工作活動範圍處增加采樣點。采樣點位置的詳細規則見附件B。
房間采樣點超過10個點，每7天對所有采樣點輪流監測一次。
5.5 記錄
監測記錄中應記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態。
5.6 結果計算
5.6.1 用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
5.6.2 平均菌落數的計算，見式（1）。
式(1)
式中：m 平均菌落數；
m1 1號培養皿菌落數；
m2 2號培養皿菌落數；
mn n號培養皿菌落數；
N 培養皿總數。
5.7 結果評定標準：
靜態：
|
潔淨度級別 |
微生物（沉降菌）最大允許數 |
潔淨度級別 |
微生物（沉降菌）最大允許數 |
|
個/皿 |
個/皿 |
||
|
A、B級 |
0 |
D級 |
5 |
|
C級 |
3 |
注：表中各數值均為平均值。
5.7.1 潔淨室（區）內的平均菌落數必須低於所選定的評定標準。
5.7.2 若某潔淨室（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然後重新采樣兩次，測試結果均須合格。
6 附件
6.1 附件A：培養基的準備及滅菌
6.1.1 培養基的準備
培養基應購買國家認可的培養基。
6.1.2 培養基平皿的製備
6.1.2.1 將Ф90mm 的培養皿置於121℃濕熱滅菌20min或160℃幹熱滅菌2h。
6.1.2.2 將培養基加熱熔化，冷至55℃時，在無菌操作要求下將培養基注入培養皿，每皿約15mL。
6.1.2.3 待瓊脂凝固後，將培養基平皿倒置於30℃-35℃恒溫培養箱中培養48h，若培養基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。
6.1.2.4 注：製備好的培養基平皿宜在2℃-8℃的環境中存放。
6.2 附件B：采樣點布置
潔淨區采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區域過於集中，某局部區域過於稀疏。
