1.劃分操作區：

目前
，普通PCR尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管
，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，PCR的前處理和後處理要在不同的隔離區內進行：

(1)標本處理區，包括擴增摸板的製備。

(2)擴增區，包括反應液的配製和PCR擴增。

(3)產物分析區，凝膠電泳分析，產物拍照及重組克隆的製備。

(4)各工作區要有一定的隔離，操作器材專用，要有一定的方向性。如：標本製備→PCR擴增→產物分析→產物處理。

切記：產物分析區的產物及器材不要拿到其他兩個工作區。

2.分裝試劑：

PCR擴kuo增zeng所suo需xu要yao的de試shi劑ji均jun應ying在zai裝zhuang有you紫zi外wai燈deng的de超chao淨jing工gong作zuo台tai或huo負fu壓ya工gong作zuo台tai配pei製zhi和he分fen裝zhuang。所suo有you的de加jia樣yang器qi和he吸xi頭tou需xu固gu定ding放fang於yu其qi中zhong，不bu能neng用yong來lai吸xi取qu擴kuo增zeng後hou的deDNA和其他來源的DNA：

(1) PCR用水應為高壓的雙蒸水。

(2) 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產物區配製。

(3)引物和dNTP應分裝儲存
，分裝時應標明時間
，以備發生汙染時查找原因。

3. 實驗操作注意事項：

盡(jin)管(guan)擴(kuo)增(zeng)序(xu)列(lie)的(de)殘(can)留(liu)汙(wu)染(ran)大(da)部(bu)分(fen)是(shi)假(jia)陽(yang)性(xing)反(fan)應(ying)的(de)原(yuan)因(yin)
，樣(yang)品(pin)間(jian)的(de)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)也(ye)是(shi)原(yuan)因(yin)之(zhi)一(yi)。因(yin)此(ci)，不(bu)僅(jin)要(yao)在(zai)進(jin)行(xing)擴(kuo)增(zeng)反(fan)應(ying)是(shi)謹(jin)慎(shen)認(ren)真(zhen)，在(zai)樣(yang)品(pin)的(de)收(shou)集(ji)
、抽提和擴增的所有環節都應該注意：

(1)戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套。

(2)使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露於空氣中，避免氣溶膠的汙染。

(3)避bi免mian反fan應ying液ye飛fei濺jian，打da開kai反fan應ying管guan時shi為wei避bi免mian此ci種zhong情qing況kuang，開kai蓋gai前qian稍shao離li心xin收shou集ji液ye體ti於yu管guan底di。若ruo不bu小xiao心xin濺jian到dao手shou套tao或huo桌zhuo麵mian上shang，應ying立li刻ke更geng換huan手shou套tao並bing用yong稀xi酸suan擦ca拭shi桌zhuo麵mian。

(4)操作多份樣品時，製備反應混合液，先將dNTP
、緩衝液、引物和酶混合好
，然後分裝，這樣即可以減少操作，避免汙染，又可以增加反應的精確度。

(5)最後加入反應模板
，加入後蓋緊反應管。

(6)操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協助判斷擴增係統的可信性。

(7)盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由於加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的汙染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器
，至少PCR操作過程中加樣器應該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區。

(8)重複實驗，驗證結果，慎下結論。