（1）在肉膏蛋白腖斜麵試管上
，用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。

（2）點燃酒精燈或煤氣燈。

（3）將菌種試管和待接種的斜麵試管
，用大拇指和食指、中指
、無名指握在左手中，並將中指夾在兩試管之間，使斜麵向上
，成水平狀態。在火焰邊用右手鬆動試管塞，以利於接種時拔出。

（4）右手拿接種環通過火焰燒灼滅菌（參照實驗一）
，在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出
，並迅速燒灼管口。

（5）將(jiang)滅(mie)菌(jun)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)伸(shen)入(ru)菌(jun)種(zhong)試(shi)管(guan)內(nei)，先(xian)將(jiang)環(huan)接(jie)觸(chu)試(shi)管(guan)內(nei)壁(bi)或(huo)未(wei)長(chang)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，達(da)到(dao)冷(leng)卻(que)的(de)目(mu)的(de)，然(ran)後(hou)再(zai)挑(tiao)取(qu)少(shao)許(xu)菌(jun)苔(tai)。將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)退(tui)出(chu)菌(jun)種(zhong)試(shi)管(guan)，迅(xun)速(su)伸(shen)入(ru)待(dai)接(jie)種(zhong)的(de)斜(xie)麵(mian)試(shi)管(guan)，用(yong)環(huan)在(zai)斜(xie)麵(mian)上(shang)自(zi)試(shi)管(guan)底(di)部(bu)向(xiang)上(shang)端(duan)輕(qing)輕(qing)地(di)劃(hua)直(zhi)線(xian)，勿(wu)將(jiang)培(pei)養(yang)基(ji)劃(hua)破(po)，也(ye)不(bu)要(yao)使(shi)環(huan)接(jie)觸(chu)管(guan)壁(bi)或(huo)管(guan)口(kou)。

（6）jiezhonghuantuichuxiemianshiguan，zaiyonghuoyanshaoguankou
，bingzaihuoyanbianjiangshiguansaisaishang。jiangjiezhonghuanzhujianjiejinhuoyan，zaishaozhuo。ruguojiezhonghuanshangzhandejuntijiaoduoshi
，yingxianjianghuanzaihuoyanbiankaogan，ranhoushaozhuo，yimianweishaosidejunzhongfeijianchuwuranhuanjing
，jiezhongbingyuanjunshigengyaozhuyicidian。

二、液體培養基接種

xiangrougaodanbaidongyetipeiyangjizhongjiezhongshaoliangjuntishi，qicaozuobuzhoujibenyuxiemianjiezhongshixiangtong
，butongzhichushitiaoqujuntidejiezhonghuanfangruyetipeiyangjihou，yingzaiyetibiaomianchudeguanneibishangqingqingmoca
，shijunticonghuanshangtuoluo，hunjinyetipeiyangji，saihaoshiguansaihou，yaodongyeti
，shijuntizaiyetizhongfenbujunyun，huoyongshiguanzhendangqihunyun。

向(xiang)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)接(jie)種(zhong)量(liang)大(da)或(huo)要(yao)求(qiu)定(ding)量(liang)接(jie)種(zhong)時(shi)，可(ke)將(jiang)無(wu)菌(jun)水(shui)或(huo)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)注(zhu)入(ru)菌(jun)種(zhong)試(shi)管(guan)，用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)將(jiang)菌(jun)苔(tai)刮(gua)下(xia)，再(zai)將(jiang)菌(jun)種(zhong)懸(xuan)液(ye)以(yi)無(wu)菌(jun)吸(xi)管(guan)定(ding)量(liang)吸(xi)出(chu)加(jia)入(ru)，或(huo)直(zhi)接(jie)倒(dao)入(ru)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)。如(ru)果(guo)菌(jun)種(zhong)為(wei)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)物(wu)，則(ze)可(ke)用(yong)無(wu)菌(jun)吸(xi)管(guan)定(ding)量(liang)吸(xi)出(chu)加(jia)入(ru)或(huo)直(zhi)接(jie)倒(dao)入(ru)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)。整(zheng)個(ge)接(jie)種(zhong)過(guo)程(cheng)都(dou)要(yao)求(qiu)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)。

三、穿刺接種

用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養基的中心垂直地刺入半固體培養基中，直至接近管底，但不要穿透，然後沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針。

上述幾種接種法的無菌操作，凡未敘述的均按實驗一操作。試驗者應反複練習無菌操作接種技術，直至較熟練地掌握。

四
、將已接種的斜麵、液體和半固體培養基放置28—30℃溫箱，培養2—3天後取出觀察結果。