手機版
培養基的購置與驗收
1.1 購置
從培養基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養基的供應企業進行評價後選擇合格的供應商，這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業；企業是否通過了質量管理體係的認證是較為客觀的評價指標。
要求生產企業提供：培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。
1.2 驗收
購買的培養基到貨後，應有專人做好接受和驗收工作，應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨後都應對培養基的質量進行檢測，滿足檢測方法規定的要求後方可投入使用。
培養基的儲存
幹粉培養基應保存在陰涼幹燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養基在室溫下的保存期限以廠家提供為準，開瓶後的幹粉培養基易吸濕，應注意防潮並盡快用完。
應定期對儲存中的培養基進行常規檢查，如容器密閉性複查、首次開封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
培養基的製備
3.1 培養基用水
培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水，最好不使用離子交換器生產的去離子水。
3.2 稱量
稱量時要用專用的角匙，避免交叉汙染而影響檢驗結果；幹粉培養基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
3.3 複水
複水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養基中，影響微生物的生長；容器的大小需大於複水後培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養基溢出；含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鍾；加熱培養基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對於少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。
燒shao糊hu的de培pei養yang基ji營ying養yang物wu質zhi被bei破po壞huai，並bing可ke產chan生sheng有you毒du物wu質zhi，如ru發fa現xian焦jiao化hua，或huo未wei溶rong解jie均jun勻yun前qian培pei養yang基ji有you溢yi出chu，該gai培pei養yang基ji即ji不bu能neng使shi用yong，應ying重zhong新xin製zhi備bei。對dui於yu瓊qiong脂zhi類lei培pei養yang基ji進jin行xing再zai融rong化hua時shi應ying使shi用yong沸fei水shui浴yu或huo流liu動dong蒸zheng汽qi進jin行xing加jia熱re，最zui多duo隻zhi能neng加jia熱re兩liang次ci，第di二er次ci再zai融rong化hua後hou仍reng未wei用yong完wan的de培pei養yang基ji應ying棄qi去qu。
3.4 滅菌
一般培養基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15 min，含han糖tang或huo特te殊shu培pei養yang基ji，按an照zhao國guo家jia標biao準zhun或huo生sheng產chan商shang提ti供gong的de說shuo明ming滅mie菌jun。已yi配pei製zhi好hao的de培pei養yang基ji必bi須xu立li即ji滅mie菌jun，避bi免mian微wei生sheng物wu生sheng長chang繁fan殖zhi而er消xiao耗hao養yang分fen，改gai變bian培pei養yang基ji的de酸suan堿jian度du。
高(gao)溫(wen)可(ke)破(po)壞(huai)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen)，還(hai)會(hui)使(shi)瓊(qiong)脂(zhi)的(de)凝(ning)膠(jiao)強(qiang)度(du)下(xia)降(jiang)，因(yin)此(ci)必(bi)須(xu)嚴(yan)格(ge)控(kong)製(zhi)滅(mie)菌(jun)溫(wen)度(du)和(he)時(shi)間(jian)，並(bing)且(qie)不(bu)可(ke)重(zhong)複(fu)滅(mie)菌(jun)。高(gao)壓(ya)蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌(jun)鍋(guo)的(de)壓(ya)力(li)表(biao)等(deng)要(yao)定(ding)期(qi)進(jin)行(xing)檢(jian)定(ding)，並(bing)定(ding)期(qi)采(cai)用(yong)生(sheng)物(wu)指(zhi)示(shi)菌(jun)法(fa)或(huo)化(hua)學(xue)變(bian)色(se)紙(zhi)片(pian)對(dui)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)進(jin)行(xing)驗(yan)證(zheng)。
3.5 pH測定
微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH值，即培養基使用前的pH，並應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表麵測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調整培養基的pH，應用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL調整，注意不可反複調pH，否則會影響培養基的滲透壓。
3.6 配製好的培養基保存
滅菌以後培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果。
所配製的培養基的量，應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完，應於冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。
培養基的性能測試
4.1 外觀控製
製備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉澱。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化，是否蒸發/脫水。
4.2 汙染控製
從每批製備好的培養基中選取部分進行汙染測試（空白試驗），確定無微生物生長方可使用。
4.3 性能測試
4.3.1 測試菌株選擇： 測試菌株是具有其代表種的穩定特性並能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株，應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株或其他有證書的菌株。
4.3.2 定量測試方法： 改良Miles-Misra法。測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋；測試平板和參照平板劃分為4個區域並標記；從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液於試驗平板和對照平板標記好的區域；將稀釋液塗滿整個1/4區域，37°C培養18小時；對易計數的區域計數，按公式計算生長率（生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數）。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低於0.7，該類培養基應易於目標菌生長；選擇性培養基上目標菌的生長率應不低於0.1 。
4.3.3 半定量測試方法：改進的劃線法接種法。 平板分ABCD四區，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分，沒有菌落生長或生長量少於劃線的一半記作0分，分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長，而非目標菌的生長應部分或完全被抑製，目標菌的生長指數G大於6時，培養基可接受 。
4.3.4 定性測試方法 ：平板接種觀察法。 用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)取(qu)測(ce)試(shi)菌(jun)培(pei)養(yang)物(wu)，在(zai)測(ce)試(shi)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)劃(hua)平(ping)行(xing)直(zhi)線(xian)。按(an)標(biao)準(zhun)中(zhong)規(gui)定(ding)的(de)培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度(du)對(dui)接(jie)種(zhong)後(hou)的(de)平(ping)板(ban)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)，目(mu)標(biao)菌(jun)應(ying)呈(cheng)現(xian)良(liang)好(hao)生(sheng)長(chang)，並(bing)有(you)典(dian)型(xing)的(de)菌(jun)落(luo)外(wai)觀(guan)、大小和形態，非目標菌應是微弱生長或無生長 。
另外對選擇性培養基還應選擇被抑製生長的菌株進行培養基驗收。
附件：教你看懂培養基檢驗報告單（CoA）
幹粉類培養基的檢驗報告單主要包括以下內容，建議拿一份CoA結合本文閱讀。
1. 感官
一般包括色澤、氣味、形態、雜質等，屬於主觀評價。不同廠家產品會有不同。
2. 理化
a) 幹燥失重或水分
一般控製在5%-6%yinei，butongchangjiahuiyoubutong。jieheshuihuodulaishuo，zheshikongzhipeiyangjiganfenweishengwuwurandezhongyaoshouduan。tongshiyaoguanzhumifengqingkuang，bunengpohuaishuihuodudehuanjing。
b) 凝膠強度
zhetiaojinxianyushiqiongzhileiganfenpeiyangji，yibanmiaoshuweishiyihuoshizhong。yinweiqiongzhipingbanyibanyaodaozhipeiyang，suoyiningjiaoqiangdufeichangzhongyao。erningjiaoqiangdudegaodiyezhijielaiyuanyuqiongzhidezhiliang。qiongzhishiyizhonglaiyuanyuhaizaozhong，juyouziranbianyixingdeshengwucailiao，bingbushiyingyangwuzhi。zhuyaoyingyongyushipinhezhiyaoxingye，shipinxingyeshiyongliangzuida，ruguodong。xijunxueqiongzhizhuyaocongshihuacaizhonghuoqu，ermuqianquanqiuzhengjinglishihuacaideduanque。
瓊(qiong)脂(zhi)質(zhi)量(liang)也(ye)用(yong)凝(ning)膠(jiao)強(qiang)度(du)來(lai)評(ping)價(jia)。瓊(qiong)脂(zhi)類(lei)培(pei)養(yang)基(ji)必(bi)須(xu)達(da)到(dao)規(gui)定(ding)的(de)凝(ning)膠(jiao)強(qiang)度(du)才(cai)能(neng)實(shi)現(xian)穩(wen)定(ding)倒(dao)置(zhi)培(pei)養(yang)。如(ru)果(guo)加(jia)入(ru)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)本(ben)身(shen)的(de)凝(ning)膠(jiao)強(qiang)度(du)小(xiao)，加(jia)入(ru)量(liang)就(jiu)要(yao)增(zeng)加(jia)。過(guo)多(duo)的(de)加(jia)入(ru)瓊(qiong)脂(zhi)量(liang)不(bu)僅(jin)造(zao)成(cheng)不(bu)必(bi)要(yao)的(de)浪(lang)費(fei)而(er)且(qie)會(hui)造(zao)成(cheng)培(pei)養(yang)基(ji)過(guo)硬(ying)，直(zhi)接(jie)影(ying)響(xiang)微(wei)生(sheng)物(wu)對(dui)營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)的(de)吸(xi)收(shou)利(li)用(yong)，而(er)且(qie)培(pei)養(yang)基(ji)過(guo)硬(ying)時(shi)平(ping)板(ban)劃(hua)線(xian)容(rong)易(yi)產(chan)生(sheng)裂(lie)痕(hen)，所(suo)以(yi)有(you)時(shi)候(hou)並(bing)不(bu)是(shi)你(ni)的(de)技(ji)術(shu)問(wen)題(ti)。從(cong)這(zhe)個(ge)角(jiao)度(du)來(lai)說(shuo)就(jiu)很(hen)好(hao)理(li)解(jie)為(wei)什(shen)麼(me)國(guo)外(wai)的(de)一(yi)些(xie)標(biao)準(zhun)中(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)用(yong)量(liang)是(shi)一(yi)個(ge)範(fan)圍(wei)，如(ru)每(mei)升(sheng)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)含(han)量(liang)為(wei)12-20g，其實是根據所用瓊脂的凝膠強度不同來決定的。凝膠強度可以用凝膠強度測定儀直接檢測。
c)澄清度
溶解之後的澄清度情況，液體培養基尤其要關注這點。
d)pH值
滅菌後在25℃的pH測定值。瓊脂類培養基必須采用平頭pH值測定儀測定。
3. 微生物
a)回收率
接菌量在10-100cfu/ml，huishoulvbiaozhuntongyaodianbiaozhun。danshiyaozhuyiduizhaopeiyangjibuyidingshiyaodianyongdezhongjianyuantuiguangdeduizhaopeiyangji。youxieguowaishengchanpeiyangjideduizhaopeiyangjizhishiqianyipicihegechanpin。
b)質控菌
菌落特征要符合標準，菌落顏色、大小、其他特征。生長情況描述為良好或者用+++表示。將質控菌稀釋到一定濃度後，使用定量接種環進行四區劃線後看結果，第四區能出現單個菌落並形態明顯最好。那+++是不是隻代表隻生長到第三區呢？你可以問問你的培養基供應商。
c）抑菌情況
分為部分抑製，完全抑製。也是用四區劃線法，一般部分抑製允許在第一區有部分菌落存在。但是接菌量有區別，有些是100-1000cfu/ml有些是1000-10000cfu/ml，要(yao)注(zhu)意(yi)不(bu)同(tong)廠(chang)家(jia)的(de)產(chan)品(pin)上(shang)會(hui)有(you)說(shuo)明(ming)。單(dan)從(cong)抑(yi)菌(jun)情(qing)況(kuang)來(lai)說(shuo)，如(ru)果(guo)接(jie)菌(jun)量(liang)越(yue)大(da)抑(yi)製(zhi)情(qing)況(kuang)都(dou)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)越(yue)好(hao)，但(dan)是(shi)要(yao)結(jie)合(he)生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)考(kao)慮(lv)，很(hen)多(duo)抑(yi)菌(jun)成(cheng)分(fen)如(ru)果(guo)過(guo)多(duo)也(ye)會(hui)對(dui)正(zheng)常(chang)生(sheng)長(chang)的(de)菌(jun)產(chan)生(sheng)影(ying)響(xiang)。
如何評價一份高質量的CoA？
1. 結果有具體數字，如水分或幹燥失重、pH、回收率、凝膠強度等。
2. 在同樣的培養條件下生長情況能達到四區劃線都有。
3. 抑製情況是該抑製的都抑製。
4.有配套的MSDS，化學品安全技術說明書。
一般的MSDS應該包括組分信息、急救措施、消防措施、泄漏應急處理、操作處置與儲存、接觸控製和個體防護、理化特性、穩定性、毒理學信息、生態學信息、廢棄處置等。
從安全操作的角度來說，MSDS告訴你保護自己和保護環境的有用信息。
從穩定操作角度來說，MSDS告訴你一瓶開蓋幹粉培養基可以放置多久。
從廢物處理角度來說，MSDS告訴你大量幹粉應該如何處置。
