一

、菌株的采集

實shi驗yan室shi用yong菌jun種zhong一yi是shi到dao國guo家jia法fa定ding機ji構gou采cai購gou
，二er是shi購gou買mai商shang業ye派pai生sheng菌jun種zhong，三san是shi科ke研yan中zhong菌jun種zhong交jiao流liu。不bu管guan是shi哪na種zhong來lai源yuan，均jun統tong一yi采cai集ji。采cai集ji中zhong嚴yan格ge按an照zhao規gui範fan執zhi行xing。要yao求qiu包bao裝zhuang可ke靠kao，采cai集ji迅xun速su，不bu泄xie漏lou不bu汙wu染ran。保bao證zheng菌jun種zhong合he格ge和he環huan境jing安an全quan。采cai集ji中zhong要yao有you菌jun種zhong傳chuan代dai標biao識shi。選xuan擇ze有you資zi質zhi的de標biao準zhun菌jun株zhu的de合he格ge供gong應ying商shang
，每mei批pi標biao準zhun菌jun株zhu必bi須xu附fu帶dai有you供gong應ying商shang的de合he格ge證zheng或huo檢jian測ce報bao告gao或huo說shuo明ming書shu，來lai證zheng明ming所suo采cai購gou的de標biao準zhun菌jun株zhu是shi合he格ge的de。

二、標準菌株和驗收 

實(shi)驗(yan)室(shi)收(shou)到(dao)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)
，首(shou)先(xian)應(ying)進(jin)行(xing)符(fu)合(he)性(xing)感(gan)官(guan)檢(jian)查(zha)，記(ji)錄(lu)菌(jun)株(zhu)號(hao)和(he)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)來(lai)源(yuan)途(tu)徑(jing)信(xin)息(xi)
，確(que)保(bao)溯(su)源(yuan)性(xing)清(qing)楚(chu)。同(tong)時(shi)還(hai)應(ying)記(ji)錄(lu)標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)名(ming)稱(cheng)和(he)數(shu)量(liang)、生產日期、接收日期和有無破損等情況。

三、凍幹標準菌株的複活

1.開啟產品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，再打開使用。

2.複活：選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)和(he)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)進(jin)行(xing)複(fu)活(huo)。菌(jun)種(zhong)的(de)首(shou)次(ci)活(huo)化(hua)最(zui)好(hao)是(shi)在(zai)非(fei)選(xuan)擇(ze)性(xing)瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)，除(chu)非(fei)特(te)殊(shu)情(qing)況(kuang)或(huo)特(te)別(bie)推(tui)薦(jian)，一(yi)般(ban)不(bu)用(yong)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)。凍(dong)幹(gan)菌(jun)株(zhu)的(de)傳(chuan)代(dai)次(ci)數(shu)不(bu)得(de)超(chao)過(guo)5代，從標準菌株保藏中心購買的凍幹標準菌株為第F0代。

四、工作菌株確認方法及依據

用無菌接種環取上述培養物，在相應的培養基平板（營養瓊脂、大豆胰蛋白腖瓊脂）上或相應的細菌鑒別平板（如伊紅美藍、麥康凱
、BP等上劃線分離單個菌落
，置適宜條件下培養（若該類微生物為厭氧菌，則培養條件應為厭氧條件）。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA（薩布羅培養基）平板上或玫瑰紅鈉培養基平板上，23～28℃下培養7d

；培養後觀察是否具有典型的菌落狀態，然後挑取單一純菌落，進行革蘭染色
、鏡檢，觀察其染色特征及菌體形態以確定菌種。

五

、 汙染處理

jiaruzaigaipingbanshangfaxianyouqitajunluoshengchang
，zeshuomingcaozuoyouwuranhuojunzhongbuchun。yaojianggaiwuranpeiyangwuzuomiejunchuli，xunzhaoyuanyin，zhongxinfenlitiaoxuanchunjunluo。

六、菌種保存

所有菌種均由實驗室專人(雙人雙鎖)保存於專用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記台帳，詳細記錄菌種采集、保管、製備、使用、處置情況；每一種菌種一定要有檢測鑒定報告（具體的的鑒定方法見菌種質量報告鑒定證書上的方法）；

具體菌種保存方法一般為：將複蘇後肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例（肉湯8.5mL+甘油1.5mL）混合，-30 ℃凍存，（可用2mL凍存管凍存多管），作為保藏儲備菌株F1代，也可使用商品化的菌種保存管。

七、菌種的傳代

1.標準菌株的複蘇

① 菌種操作應在無菌條件下進行
，防止雜菌汙染。

② 每次使用和複蘇時隻需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養。

2.標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。（確認方法一般為他們各自獨有的形態
，在鑒別培養基上的形態）

3.工作菌株轉接的方法

①配製營養瓊脂培養基（溶血性弧菌加3%氯化鈉 ）
，121℃高壓滅菌15分鍾後分裝在試管內
，冷卻後備用。

②在無菌條件下，用接種環挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種，放置在36℃的培養箱內培養24小時。

4.工作菌株的使用

①內部質量控製：一個月一次陽性對照、培養基每批驗收；

②外部質量控製：能力驗證、實驗室比對；

③工作菌株的期間核查

期間核查的頻率：每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

工作菌株期間核查的方法及依據：同工作菌株的確認一樣。

建立標準菌株期間核查記錄。

八、菌種的標識

菌種代數的計算為幹粉菌種為第0代，轉接一次加一代。具體標識為：例單增李斯特氏菌第0代，標識為DZ-0，第一代標識為DZ-01第一代有12支，則DZ-01-01、……
、DZ-01-12
；並標明日期：如2016.02.13這樣填寫。

九、菌種的保藏

①將試管內菌種放入冰箱中2～8℃冷藏保存。

②將傳代並經過培養後的菌種放入冰箱中2～8℃保存。每支保存菌種需標明菌名
、標準編號、傳次、傳代日期。

十、菌種的銷毀

①菌種使用後或超過貯存期的應進行銷毀。

②需銷毀的菌種，應用高壓蒸汽（121℃）滅菌30分鍾。

③滅菌後
，再進行清洗和處理。

④銷毀的菌種應做好記錄。銷毀時由化驗負責人監督銷毀，保管人員負責銷毀。