檢測過程中的注意事項

1、在GB 4789.2的培養條件下所得結果，隻包括一群在平板計數瓊脂上生長發育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數。

2、根據食品衛生標準要求和對樣品汙染情況的估計

，選擇2~3個稀釋度。加入樣品時要注意外來的汙染。

3、為防止細菌增殖及產生片狀菌落，在加入樣液後，應在15min內傾注培養基。檢樣與培養基混勻時，可先向一個方向旋轉，然後再向相反方向旋轉。旋轉中應防止混合物濺到皿邊的上方。

4、培養基傾注的溫度與厚度是實驗正確與否的關鍵。（傾注的溫度：一般水浴和傾注溫度在46±1℃，溫度過高會造成已受損傷的菌細胞死亡，過低會導致瓊脂發生輕微凝固。厚度：直徑9cm的平皿一般要求15~20mL培養基，若培養基太薄，在培養過程中可能因水分蒸發而影響細菌的生長）。培養基凝固後
，應在盡快將平皿翻轉培養，保持瓊脂表麵幹燥
，盡量避免菌落蔓延生長，影響計數。

5
、檢驗過程中還應該用稀釋液做空白對照


，用以判定稀釋液、培養基、平(ping)皿(min)或(huo)吸(xi)管(guan)可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)的(de)汙(wu)染(ran)。同(tong)時(shi)
，檢(jian)驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)應(ying)在(zai)工(gong)作(zuo)台(tai)上(shang)打(da)開(kai)一(yi)塊(kuai)空(kong)白(bai)的(de)平(ping)板(ban)計(ji)數(shu)瓊(qiong)脂(zhi)

，其(qi)暴(bao)露(lu)時(shi)間(jian)應(ying)與(yu)檢(jian)驗(yan)時(shi)間(jian)相(xiang)當(dang)，以(yi)了(le)解(jie)檢(jian)樣(yang)在(zai)檢(jian)驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)有(you)無(wu)受(shou)到(dao)來(lai)自(zi)空(kong)氣(qi)的(de)汙(wu)染(ran)。

6、meizhongbutongyangpinzhongdexijundouyouyidingdeshenglitexing，peiyangshiyingyongbutongdeyingyangtiaojianjishenglitiaojiankenengdechubutongdejieguo，yineryinggenjujiancebiaozhundeyaoqiuxuanzeshidangdepeiyangwenduhepeiyangshijian。

食品：36±１℃，48±2h 。

飲用水：36±１℃，48±2h 。

水產品（指原生態、未加工的水產品）：30±１℃，72±3h。(36℃培養和30℃培養結果差別較大，同樣水產品48h結果和72h也有差別。

7、有時檢樣的稀釋液中往往帶有食品顆粒（如奶粉
、堅果）
，在這種情況下，為避免與細菌菌落混淆
，可作一檢樣對照將稀釋液與PCA混合，不經培養，置4℃環境放置
，在計數時用於對照。

另外也可以在已熔化而保溫在46±1℃水浴內的平板計數瓊脂中，按100ml加1ml 0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液
，培養後食品顆粒不變色，細菌為紅色。

菌落計數注意事項

1
、ruguogaoxishidupingbanshangdejunluoshubidixishidupingbanshangdejunluoshugao，zeshuomingjianyanguochengzhongkenengchuxianchacuohuoyangpinzhonghanyijunwuzhi
，zheyangdejieguobukeyongyujieguobaogao。

2
、如(ru)果(guo)平(ping)板(ban)上(shang)出(chu)現(xian)鏈(lian)狀(zhuang)菌(jun)落(luo)，菌(jun)落(luo)間(jian)沒(mei)有(you)明(ming)顯(xian)的(de)界(jie)限(xian)，這(zhe)可(ke)能(neng)是(shi)瓊(qiong)脂(zhi)與(yu)檢(jian)樣(yang)混(hun)勻(yun)時(shi)，一(yi)個(ge)細(xi)菌(jun)塊(kuai)被(bei)分(fen)散(san)所(suo)造(zao)成(cheng)的(de)。一(yi)條(tiao)鏈(lian)作(zuo)為(wei)一(yi)個(ge)菌(jun)落(luo)計(ji)。若(ruo)培(pei)養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)遭(zao)遇(yu)昆(kun)蟲(chong)侵(qin)入(ru)
，在(zai)昆(kun)蟲(chong)爬(pa)行(xing)過(guo)的(de)地(di)方(fang)也(ye)會(hui)出(chu)現(xian)鏈(lian)狀(zhuang)菌(jun)落(luo)，也(ye)不(bu)應(ying)分(fen)開(kai)計(ji)數(shu)。

3、如果平板上菌落太多，不能計數時，不建議采用多不可計作報告。可以在最高稀釋度平板上任意選取2個1cm²的麵積，計算菌落數，除2求出每cm²麵積內平均菌落數，乘以63.6(皿底麵積cm²數)。

4、如果檢樣是微生物類製劑（酸牛奶

、酵母製酸性飲料等）
，在進行菌落計數時應將有關微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可並入檢樣的菌落總數內作報告。 每個樣品從開始稀釋到傾注最後一個平板的時間不得超過15min,目(mu)的(de)是(shi)為(wei)了(le)使(shi)菌(jun)落(luo)能(neng)在(zai)平(ping)板(ban)上(shang)均(jun)勻(yun)分(fen)布(bu)，否(fou)則(ze)，時(shi)間(jian)放(fang)長(chang)了(le)
，樣(yang)液(ye)可(ke)能(neng)由(you)於(yu)幹(gan)燥(zao)而(er)貼(tie)在(zai)平(ping)板(ban)上(shang)
，傾(qing)注(zhu)瓊(qiong)脂(zhi)後(hou)不(bu)易(yi)搖(yao)開(kai)，容(rong)易(yi)產(chan)生(sheng)片(pian)狀(zhuang)菌(jun)落(luo)，影(ying)響(xiang)菌(jun)落(luo)計(ji)數(shu)。另(ling)外(wai)，瓊(qiong)脂(zhi)凝(ning)固(gu)後(hou)不(bu)要(yao)在(zai)室(shi)溫(wen)長(chang)時(shi)間(jian)放(fang)置(zhi)，應(ying)及(ji)時(shi)將(jiang)平(ping)皿(min)倒(dao)置(zhi)培(pei)養(yang)
，可(ke)避(bi)免(mian)菌(jun)落(luo)的(de)蔓(man)延(yan)生(sheng)長(chang)。

結果計算注意事項

1、若隻有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數範圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(mL)樣品中菌落總數結果。

2、若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜技術範圍內時
，按式（1）計算

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d ……………………(1)式中:

N ———樣品中菌落數;

∑C———平板(含適宜範圍菌落數的平板)菌落數之和;

n1 ———第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;

n2 ———第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;

d ———稀釋因子(第一稀釋度)。

N = ∑C/(n1 +0.1n2)d = (232+244+33+35)/[2+ (0.1×2)]×10-2 = 544/0.022=24727

表示為25000或2.5×104。

3、若所有稀釋度的平板上菌落數均大於300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

4、若所有稀釋度的平板菌落數均小於30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

5
、若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小於1乘以最低稀釋倍數計算。

6

、若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU~300CFU 之間,其中一部分小於30CFU 或大於300CFU 時,則以最接近30CFU 或300CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

菌落總數的報告

1、菌落數小於100CFU 時,按“四舍五入”原則修約,以整數報告。

2、菌落數大於或等於100CFU 時,第3位數字采用“四舍五入”原則修約後,取前2位數字,後麵用0代替位數;也可用10的指數形式來表示,按“四舍五入”原則修約後,采用兩位有效數字。

3

、若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延。

4、若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。

5、稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告。