進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)時(shi)
，動(dong)作(zuo)要(yao)準(zhun)確(que)敏(min)捷(jie)，但(dan)又(you)不(bu)必(bi)太(tai)快(kuai)
，以(yi)防(fang)空(kong)氣(qi)流(liu)動(dong)
，增(zeng)加(jia)汙(wu)染(ran)機(ji)會(hui)。不(bu)能(neng)用(yong)手(shou)觸(chu)及(ji)已(yi)消(xiao)毒(du)器(qi)皿(min)
，如(ru)已(yi)接(jie)觸(chu)


，要(yao)用(yong)火(huo)焰(yan)燒(shao)灼(zhuo)消(xiao)毒(du)或(huo)取(qu)備(bei)品(pin)更(geng)換(huan)。為(wei)拿(na)取(qu)方(fang)便(bian)

，工(gong)作(zuo)台(tai)麵(mian)上(shang)的(de)用(yong)品(pin)要(yao)有(you)合(he)理(li)的(de)布(bu)局(ju)，原(yuan)則(ze)上(shang)應(ying)是(shi)右(you)手(shou)使(shi)用(yong)的(de)東(dong)西(xi)放(fang)置(zhi)在(zai)右(you)側(ce)，左(zuo)手(shou)用(yong)品(pin)在(zai)左(zuo)側(ce)
，酒(jiu)精(jing)燈(deng)置(zhi)於(yu)中(zhong)央(yang)。工(gong)作(zuo)由(you)始(shi)至(zhi)終(zhong)要(yao)保(bao)持(chi)一(yi)定(ding)順(shun)序(xu)性(xing)，組(zu)織(zhi)或(huo)細(xi)胞(bao)在(zai)未(wei)做(zuo)處(chu)理(li)之(zhi)前(qian)，勿(wu)過(guo)早(zao)暴(bao)露(lu)在(zai)空(kong)氣(qi)中(zhong)。同(tong)樣(yang)
，培(pei)養(yang)液(ye)在(zai)未(wei)用(yong)前(qian)
，不(bu)要(yao)過(guo)早(zao)開(kai)瓶(ping)；用過之後如不再重複使用


，應立即封閉瓶口直立可增加落菌機會。吸取營養液

、PBS、細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)及(ji)其(qi)它(ta)各(ge)種(zhong)用(yong)液(ye)時(shi)，均(jun)應(ying)分(fen)別(bie)使(shi)用(yong)吸(xi)管(guan)
，不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)
，以(yi)防(fang)擴(kuo)大(da)汙(wu)染(ran)或(huo)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。工(gong)作(zuo)中(zhong)不(bu)能(neng)麵(mian)向(xiang)操(cao)作(zuo)野(ye)講(jiang)話(hua)或(huo)咳(ke)嗽(sou)

，以(yi)免(mian)唾(tuo)沫(mo)把(ba)細(xi)菌(jun)或(huo)支(zhi)原(yuan)體(ti)帶(dai)入(ru)工(gong)作(zuo)台(tai)麵(mian)發(fa)生(sheng)汙(wu)染(ran)。操(cao)作(zuo)前(qian)用(yong)酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)超(chao)淨(jing)台(tai)麵(mian)及(ji)雙(shuang)手(shou)。手(shou)或(huo)相(xiang)對(dui)較(jiao)髒(zang)的(de)物(wu)品(pin)不(bu)能(neng)經(jing)過(guo)開(kai)放(fang)的(de)瓶(ping)口(kou)上(shang)方(fang)，瓶(ping)口(kou)最(zui)易(yi)汙(wu)染(ran)，加(jia)液(ye)時(shi)如(ru)吸(xi)管(guan)尖(jian)碰(peng)到(dao)瓶(ping)口(kou)，則(ze)應(ying)將(jiang)吸(xi)管(guan)丟(diu)掉(diao)。

【培養前準備】

 

在開始實驗前要製定好實驗計劃和操作程序。有關數據的計算要事先做好。根據實驗要求，準備各種所需器材和物品

、清點無誤後將其放置操作場所（培養室、超淨台）內，然後開始消毒。這可以避免開始實驗後．囚物品不全往返拿取而增加汙染機會。

 

【操作野消毒】

 

無菌培養室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地麵—次（拖布要專用）．紫外線照射消毒30-50min

，超淨工作台台麵每次實驗前要用75％酒精擦洗。然後紫外線淌毒30min。在工作台麵消毒時切勿將培養細胞和培養用液同時照射紫外線，消毒時工作台麵上用品不要過多或重疊放置．否則會遮擋射線降低消毒效果。—些操作用具如移液器

、廢液缸、汙物盒、試管架等用75%酒精擦洗後置於台內同時紫外線消毒。

體ti外wai培pei養yang細xi胞bao缺que乏fa抗kang感gan染ran能neng力li，所suo以yi防fang止zhi汙wu染ran是shi決jue定ding培pei養yang成cheng功gong或huo失shi敗bai的de首shou要yao條tiao件jian。即ji便bian使shi用yong設she備bei完wan善shan的de實shi驗yan室shi。若ruo實shi驗yan者zhe粗cu心xin大da意yi，技ji術shu操cao作zuo不bu規gui範fan,也會導致汙染。因而．為在一切操作中為最大可能的保證無菌．每一項工作都必須做到有條不紊和完全靠。

 

  

【洗手和著裝】

 

原則上和外科手術相同。平時僅做觀察不做培養操作時
，可穿裝細胞培養室內紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超淨台工作時，因整個前臂要伸入箱內，應著長袖的清潔工作服，並於開始操作前要用75％酒精消毒手。如果實驗過程中手觸及可能汙染的物品和出入培養室都要重新用消毒液洗手。進入原代培養室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。

 

【火焰消毒】

 

在無菌環境進行培養或做其它無菌工作時，首先要點燃酒精燈或煤氣燈。以後一切操作，如按裝吸管帽
、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處並經過燒灼進行。但要注意：金(jin)屬(shu)器(qi)械(xie)不(bu)能(neng)在(zai)為(wei)焰(yan)中(zhong)燒(shao)的(de)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)
，以(yi)防(fang)退(tui)火(huo)，燒(shao)過(guo)的(de)金(jin)屬(shu)鑷(nie)要(yao)待(dai)冷(leng)卻(que)後(hou)才(cai)能(neng)挾(xie)取(qu)組(zu)織(zhi)
，以(yi)免(mian)造(zao)成(cheng)組(zu)織(zhi)損(sun)傷(shang)。吸(xi)取(qu)過(guo)營(ying)養(yang)液(ye)後(hou)的(de)吸(xi)管(guan)不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)火(huo)焰(yan)燒(shao)灼(zhuo)
，因(yin)殘(can)留(liu)在(zai)吸(xi)管(guan)頭(tou)中(zhong)營(ying)養(yang)液(ye)能(neng)燒(shao)焦(jiao)形(xing)成(cheng)炭(tan)膜(mo)，再(zai)用(yong)時(shi)會(hui)把(ba)有(you)害(hai)物(wu)帶(dai)入(ru)營(ying)養(yang)液(ye)中(zhong)。開(kai)啟(qi)
、guanbichangyouxibaodepeiyangpingshi
，huoyanmiejunshijianyaoduan。fangzhiyinwenduguogaoshaosixibao。lingwaijiaosaiguohuoyanshiyebunengshijianchang
，yimianshaojiaochanshengyouduqiti，weihaipeiyangxibao。