(二)實驗原理：細菌的芽胞具有厚而致密的壁，透性低，不易著色，若用一般染色法隻能使菌體著色而芽胞不著色(芽胞呈無色透明狀)。芽胞染色法就是根據芽胞既難以染色而一旦染上色後又難以脫色這一特點而設計的。所有的芽胞染色法都基於同一個原則：除(chu)了(le)用(yong)著(zhe)色(se)力(li)強(qiang)的(de)染(ran)料(liao)外(wai)，還(hai)需(xu)要(yao)加(jia)熱(re)，以(yi)促(cu)進(jin)芽(ya)胞(bao)著(zhe)色(se)。當(dang)染(ran)芽(ya)胞(bao)時(shi)，菌(jun)體(ti)也(ye)會(hui)著(zhe)色(se)，然(ran)後(hou)水(shui)洗(xi)，芽(ya)胞(bao)染(ran)上(shang)的(de)顏(yan)色(se)難(nan)以(yi)滲(shen)出(chu)，而(er)菌(jun)體(ti)會(hui)脫(tuo)色(se)。然(ran)後(hou)用(yong)對(dui)比(bi)度(du)強(qiang)的(de)染(ran)料(liao)對(dui)菌(jun)體(ti)複(fu)染(ran)，使(shi)菌(jun)體(ti)和(he)芽(ya)胞(bao)呈(cheng)現(xian)出(chu)不(bu)同(tong)的(de)顏(yan)色(se)

，因(yin)而(er)能(neng)更(geng)明(ming)顯(xian)地(di)襯(chen)托(tuo)出(chu)芽(ya)胞(bao)，便(bian)於(yu)觀(guan)察(cha)。

　　(三)實驗器材

　　1.活材料：培養36小時的蘇雲金杆菌(Bacillus thuringiensis)或者枯草杆菌(Bacillus subtilis)。

　　2.染色液和試劑：5%孔雀綠水溶液、0.5%蕃紅水溶液[見附錄二(一)6、5]。

　　3.器材：小試管(75mm×10mm)、燒杯(300mL)、滴管、玻片擱架、接種環、擦鏡紙、鑷子、顯微鏡等。

　　(四)實驗方法

　　1.改良的Schaeffer和Fulton氏染色法

　　(1)製備菌液：加1—2滴無菌水於小試管中
，用接種環從斜麵上挑取2—3環的菌體於試管中並充分打勻
，製成濃稠的菌液。

　　(2)加染色液：加5%孔雀綠水溶液2—3滴於小試管中，用接種環攪拌使染料與菌液充分混合。

　　(3)加熱：將此試管浸於沸水浴(燒杯)
，加熱15—20min。

　　(4)塗片：用接種環從試管底部挑數環菌液於潔淨的載玻片上
，做成塗麵，晾幹。

　　(5)固定：將塗片通過酒精燈火焰3次。

　　(6)脫色：用水洗直至流出的水中無孔雀綠顏色為止。

　　(7)複染：加蕃紅水溶液染色5min後
，傾去染色液，不用水洗，直接用吸水紙吸幹。

　　(8)鏡檢：先低倍，再高倍
，最後用油鏡觀察。

　　結果：芽胞呈綠色，芽胞囊和菌體為紅色。

　　2.Schaeffer與Fulton氏染色法

　　(1)塗片：按常規方法將待檢細菌製成一薄的塗片。

　　(2)晾幹固定：待塗片晾幹後在酒精燈火焰上通過2—3次。

　　(3)染色：

　　①加染色液：加5%孔雀綠水溶液於塗片處(染料以鋪滿塗片為度)
，然後將塗片放在銅板上，用酒精燈火焰加熱至染液冒蒸汽時開始計算時間，約維持15-20min。加熱過程中要隨時添加染色液，切勿讓標本幹涸。(加熱時溫度不能太高)。

　　②水洗：待玻片冷卻後 ，用水輕輕地衝洗，直至流出的水中無染色液為止。

　　③複染：用蕃紅液染色5min。

　　(4)水洗、晾幹或吸幹。

　　(5)鏡檢：先低倍，再高倍
，最後在油鏡下觀察芽胞和菌體的形態。。

　　結果：芽胞呈綠色，菌體為紅色。

　　(五)實驗作業：

　　繪出所用材料的芽胞和菌體的形態圖。

　　(六)注意事項

　　1.供芽胞染色用的菌種應控製菌齡。

　　2.改良法在節約染料、簡化操作及提高標本質量等方麵都較常規塗片法優越，可優先使用。

　　3.用(yong)改(gai)良(liang)法(fa)時(shi)
，欲(yu)得(de)到(dao)好(hao)的(de)塗(tu)片(pian)，首(shou)先(xian)要(yao)製(zhi)備(bei)濃(nong)稠(chou)的(de)菌(jun)液(ye)，其(qi)次(ci)是(shi)從(cong)小(xiao)試(shi)管(guan)中(zhong)取(qu)染(ran)色(se)的(de)菌(jun)液(ye)時(shi)，應(ying)先(xian)用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)充(chong)分(fen)攪(jiao)拌(ban)，然(ran)後(hou)再(zai)挑(tiao)取(qu)菌(jun)液(ye)
，否(fou)則(ze)菌(jun)體(ti)沉(chen)於(yu)管(guan)底(di)，塗(tu)片(pian)時(shi)菌(jun)體(ti)太(tai)少(shao)。