芽(ya)孢(bao)染(ran)色(se)法(fa)是(shi)利(li)用(yong)細(xi)菌(jun)的(de)芽(ya)孢(bao)和(he)菌(jun)體(ti)對(dui)染(ran)料(liao)的(de)親(qin)合(he)力(li)不(bu)同(tong)的(de)原(yuan)理(li)

，用(yong)不(bu)同(tong)染(ran)料(liao)進(jin)行(xing)著(zhe)色(se)，使(shi)芽(ya)孢(bao)和(he)菌(jun)體(ti)呈(cheng)不(bu)同(tong)的(de)顏(yan)色(se)而(er)便(bian)於(yu)區(qu)別(bie)。芽(ya)孢(bao)壁(bi)厚(hou)、透性低，著色、脫色均較困難，因此，當先用一弱堿性染料，如孔雀綠（malachite green）或堿性品紅（basicfuchsin）zaijiaretiaojianxiajinxingranseshi
，ciranliaobujinkeyijinrujunti
，erqieyekeyijinruyabao，jinrujuntideranliaokejingshuixituose，erjinruyabaoderanliaozenanyitouchu，ruozaiyongfuranye（如番紅液）或襯托溶液（如黑色素溶液）處理，則菌體和芽孢易於區分。

二
、器材

　　枯草芽孢杆菌，蠟狀芽孢杆菌（Bacillus cereus）
，生孢梭菌（Clostridium sporogenes）
；

　　孔雀綠染液，番紅水溶液
，苯酚品紅溶液，黑色素溶液等。

三、操作步驟

方法1
、

（1）將培養24小時左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌
，作塗片


、幹燥、固定。

（2）滴加3—5滴孔雀綠染液於已固定的塗片上。

（3）yongmujiajiazhuzaibopianzaihuoyanshangjiare


，shiranyemaozhengqidanwufeiteng，qiejishiranyezhenggan，biyaoshiketianjiashaoxuranye。jiareshijiancongranyemaozhengqishikaishijisuanyue4—5分鍾。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6％）染10分鍾。

（4）傾去染液，待玻片冷卻後水洗至孔雀綠不再褪色為止。

（5）用番紅水溶液複染1分鍾

，水洗。

（6）待幹燥後，置油鏡觀察
，芽孢呈綠色
，菌體呈紅色。

方法2、

（1）取二支潔淨的小試管，分別加入0．2ml無菌水，再往一管中加入1—2接種環的蠟狀芽孢杆菌的菌苔
，另一管中加入1—2接種環的生孢梭菌的菌苔，兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。

（2）在菌懸液中分別加入0．2ml苯酚品紅溶液，充分混合後，於沸水浴中加熱3—5分鍾。

（3）用接種環分別取上述混合液2—3環於兩片載玻片上，塗薄，風幹後

，將載玻片稍傾斜於燒杯上，用95％乙醇衝洗至無紅色液流出。

（4）再用自來水衝洗
，濾紙吸幹。

（5）取1—2接種環黑色素溶液於塗片處，立即展開塗薄
，自然幹燥後，油鏡觀察，在淡紫灰色背景的襯托下
，菌體為白色
，菌體內的芽孢為紅色。

四、實驗報告