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【實驗目的】
掌握細菌芽孢染色的方法.
【實驗原理】
細菌的芽孢含水量少,脂肪含量高,芽孢壁較厚,對染料的透性差,不易著色,但是一旦著色又難以脫色.
通常,芽孢染色采用弱堿性染料孔雀綠在加熱的條件下進行.染色完畢,用蒸餾水衝洗.因孔雀綠是弱堿性染料,與菌體結合力較差,因此易被水衝洗掉,而進入芽孢的孔雀綠卻難於溶出.水洗後,再用一種呈紅色的堿性染料複染,使菌體和芽孢呈現不同顏色.
【實驗材料、藥品及器具】
1、菌種 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)
2、染液 孔雀綠染液
藏花紅染液
3、器皿 顯微鏡、酒精燈、鑷子、洗淨的載玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、玻璃紅、洗瓶裝蒸餾水、接種環.
【實驗步驟】
1、取培養24h左右的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌分別塗片、幹燥、固定.
2、在塗片部分用吸水紙條蓋住,然後向紙條滴加孔雀綠液至飽和.
3、將塗片逐漸加熱至微冒蒸汽並不時添加染液以防止吸水紙條幹燥.染色
2-8 分鍾.
4、除去吸水紙條,用蒸餾水輕輕衝洗掉多餘染液.
5、用藏花紅染液複染30~60S.
6、水洗,風幹或烘幹後鏡檢.
【實驗結果】
1、首先用低倍鏡,再用油浸鏡檢查製片,注意芽孢的顏色和菌體的顏色.
2、繪製芽孢圖.注意芽孢在菌體內的位置、大小和形狀並繪製遊離芽孢形態圖.
【思考題】
1、為什麼經孔雀綠染色後,水洗再複染紅色染液隻能染上菌體?
2、用革蘭氏染色能否看到芽孢,為什麼?
