不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形:不慎未及時補充流動相,泵將溶劑瓶中的流動相吸幹了,HPLC係xi統tong由you此ci而er停ting止zhi工gong作zuo了le。如ru此ci情qing況kuang是shi否fou會hui損sun壞huai色se譜pu柱zhu?泵beng是shi否fou已yi將jiang色se譜pu柱zhu中zhong所suo有you流liu動dong相xiang都dou排pai幹gan了le?色se譜pu柱zhu還hai能neng使shi用yong嗎ma?事shi實shi上shang,如ru果guo泵beng將jiang溶rong劑ji瓶ping中zhong的de流liu動dong相xiang吸xi幹gan,並bing不bu會hui造zao成cheng色se譜pu柱zhu的de損sun壞huai。即ji使shi泵beng中zhong充chong滿man了le空kong氣qi,泵beng也ye不bu會hui將jiang空kong氣qi排pai入ru色se譜pu柱zhu。因yin為wei泵beng隻zhi能neng輸shu送song液ye體ti,而er不bu能neng輸shu送song空kong氣qi。相xiang比bi之zhi下xia,另ling一yi個ge更geng可ke能neng發fa生sheng的de情qing況kuang是shi忘wang記ji蓋gai上shang色se譜pu柱zhu兩liang端duan的de密mi封feng蓋gai或huo蓋gai子zi太tai鬆song而er使shi色se譜pu柱zhu變bian幹gan。同tong樣yang,整zheng個ge色se譜pu柱zhu幹gan涸he的de情qing況kuang不bu太tai容rong易yi發fa生sheng,多duo半ban可ke能neng隻zhi是shi色se譜pu柱zhu兩liang端duan的de幾ji個ge毫hao米mi變bian幹gan了le,因yin揮hui發fa掉diao所suo有you溶rong劑ji是shi色se譜pu柱zhu變bian幹gan需xu要yao相xiang當dang長chang的de時shi間jian。即ji使shi色se譜pu柱zhu真zhen的de變bian幹gan了le,也ye不bu一yi定ding就jiu不bu可ke救jiu藥yao了le。可ke以yi嚐chang試shi用yong一yi種zhong完wan全quan脫tuo氣qi的de、表麵張力低的溶劑(如經氦氣脫氣的甲醇)衝洗色譜柱以除去氣體。較低的表麵張力有助於浸潤填料表麵;已脫氣的溶劑應該能夠溶解並去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要(以1mL/min的流速)衝一個小時或更多的時間被徹底浸潤,恢複到正常狀態。
2. 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接頭需要注意什麼問題?
如果經常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱,使用PEEK材料製成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接;PEEK接頭不僅無需工具,手擰即可固定,而且容易調節錐箍之外的管路長度,方便與不同品牌或規格的色譜柱相連接。
使用此類材料的管路需要注意的是:PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象,但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不鏽鋼管可耐受6000psi的壓力,但PEEK管隻能耐受近4000psi(但多數HPLC應用係統壓力不會超過3000psi)。
使用PEEK接頭時則無需擔心接頭耐溶劑性能,因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低於不鏽鋼管,因而壓力太高時,可能會使接頭在管路上滑動而產生死體積或漏液。
3. 如何預防液相泵的故障:
要保持泵的良好操作性能,必須維護係統的清潔,保證溶劑和試劑的質量,對流動相進行過濾和脫氣.下麵列出預防泵故障的幾項措施:
1).用高質量試劑和HPLC級溶劑;
2)、過濾流動相和溶劑;
3)、脫氣;
4)、每天開始使用時放空排氣,工作結束後從泵中洗去緩衝液;
5)、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中;
6)、定期更換墊圈;
7)、需要時加潤滑油;
8)、查閱有關泵操作手冊中的其它建議。
處於良好操作狀態的泵,應該能使色譜圖上的基線平穩;保留時間的重複性好。在等度洗脫時壓力波動小於2%。梯度洗脫時壓力變化應是緩慢和平穩的。
為了使故障發生後盡快排除,平時應常備密封、單向閥(入口與出口)、泵頭裝置、各式接頭、保險絲等部件,以及更換工具。
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