使shi用yong液ye相xiang色se譜pu儀yi的de小xiao夥huo伴ban肯ken定ding會hui遇yu到dao漏lou氣qi和he漏lou液ye的de狀zhuang況kuang,流liu動dong相xiang是shi造zao成cheng液ye相xiang色se譜pu各ge種zhong問wen題ti的de最zui主zhu要yao源yuan頭tou。液ye相xiang色se譜pu最zui常chang見jian的de故gu障zhang一yi是shi堵du,二是漏。今天就這兩部分別展開討論(流動相以甲醇為例,色譜柱以C18為例) 。
首先,為何會堵?“堵”debiaoxianxianxiangjiushizhuyayichangshenggao,zhijieyuanyinjiushiliulubuchang。dusaidezhuyaoweizhijiushizaisepuzhudeqianduan,zuizhuyaoyuanyinjiushiliudongxiangliyouzazhi,zazhidezhuyaolaiyuanjiushixijun。
純水中的細菌汙染
shouxianwomenyaorenshidao,yibandeguochanjiachunqishibuxuyaoewaiguolvchuli,zhijieshiyongmeiyouwenti。jishishiyouxiegutaiweilizazhi,yenengzaiyexiangliuluxitongzuiqianduandeguolvtoushangpaichu,zhenzhengrongyiyinqiwentide,shishuizhongdexijun。xinzhibeidechunshuizaishineifangzhijitianjiuhuichangjun,erzhexiexijunsuiranrouyanbukejian,quezuyidusaizhutianliaokelidekongxi,zaochengzhuzihenkuaibaofei。zhejiushizaipeizhiliudongxiangshizaochengdexijunwurandeyuanyin,jiejuetadefangfahenjiandan,jiushiquebaoshuidekekaoxing。
解決辦法:
(1)最理想的方式當然是購買實驗室專用純水機,既方便又可靠,質量也放心。唯一的缺點就是價格不菲。
(2)成箱購買市售品牌純淨水,如500mldeyibaohuowahaha,zhexieshuidezhiliangzuyiyingfuyexiangsepudeyaoqiu。xiansuijichouquyipingzuoyixiaxijunpingbanshiyan,daijunluoshuhegefangkeshiyong。zheyangmeicizhiyaodandukaiyipingjike,yehenfangbian。meicichengben2元左右。這裏特別指出一個細節:在zai絕jue大da多duo數shu書shu本ben上shang,凡fan談tan到dao配pei製zhi流liu動dong相xiang都dou會hui談tan到dao最zui後hou一yi個ge過guo濾lv的de步bu驟zhou。但dan是shi從cong我wo們men長chang期qi使shi用yong的de實shi際ji效xiao果guo來lai說shuo,隻zhi要yao能neng保bao證zheng水shui的de質zhi量liang,這zhe一yi步bu完wan全quan可ke以yi也ye應ying當dang去qu除chu。
水有保證,可以不過濾?
(1)流動相過濾在理論上有好處,但是實際操作時由於不可能做到專瓶專用,反而容易造成的交叉汙染,對於配比複雜的流動相影響更大。
(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多duo元yuan,且qie過guo濾lv器qi公gong認ren是shi比bi較jiao容rong易yi損sun壞huai的de設she備bei。最zui主zhu要yao是shi過guo濾lv片pian的de成cheng本ben太tai高gao,一yi片pian就jiu要yao幾ji十shi元yuan。按an一yi般ban液ye相xiang柱zhu的de正zheng常chang使shi用yong壽shou命ming計ji算suan,過guo濾lv片pian的de成cheng本ben會hui遠yuan遠yuan高gao於yu色se譜pu柱zhu的de成cheng本ben上shang升sheng。
流動相的細菌汙染
流動相剛開始不長菌,在使用時卻產生了細菌汙染。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。舉最簡單的例子:50%的甲醇水流動相,有兩種使用方式。一種方式是在上機前就配好混合在一起,另一種方式是在流路A放純甲醇,流路B放純水。從單純實驗效果來說,後一種有明顯的優點:首先是簡單,不需要實驗者另個計算配比混合,其次就是比例準確,能得到保留時間重複性極好實驗效果。
但是,它有一個致命的缺陷,就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,而是用緩衝鹽溶液,本身就是優質肥料,細菌長得更迅速),一yi旦dan有you細xi菌jun柱zhu子zi就jiu壞huai得de很hen快kuai。所suo以yi這zhe種zhong方fang式shi要yao求qiu操cao作zuo人ren員yuan每mei次ci實shi驗yan都dou要yao用yong新xin製zhi備bei的de純chun水shui,更geng要yao求qiu在zai每mei次ci實shi驗yan後hou把ba水shui相xiang換huan掉diao,換huan成cheng甲jia醇chun衝chong洗xi幹gan淨jing,這zhe一yi點dian在zai實shi際ji工gong作zuo中zhong很hen多duo人ren意yi識shi不bu強qiang,就jiu是shi意yi識shi到dao了le但dan多duo次ci使shi用yong中zhong總zong有you一yi兩liang次ci會hui遺yi漏lou,但dan是shi往wang往wang這zhe一yi兩liang次ci就jiu足zu以yi產chan生sheng致zhi命ming的de影ying響xiang。因yin為wei液ye相xiang色se譜pu柱zhu的de堵du塞sai是shi不bu可ke逆ni的de。
所以,寧可犧牲小小的保留時間的重複性,也不要用純水溶液作為流動相。從實際實驗效果來說,我建議用10%的甲醇水代替水溶液(以前我做過不同比例甲醇水的細菌總數實驗,在5%就基本可以抑菌,在10%及以上就可以完全殺菌了),這樣可以有效排除長細菌的隱患,既可作流動相,也可衝柱。就算是在配製流動相時會計算得麻煩一些,但是一次麻煩,終身受益。
不適當操作
(1)在更換零件時選擇的型號有誤,接口不是很匹配,在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液淨化得不幹淨,長期會在六通閥和柱之間形阻塞不暢。
(3)在使用用手動六通閥時,有些人可能由於手勁小的原因,轉動的不到位,於是造成流路形成死堵,壓力快速升高超過警戒值。
(4)zaishiyongjinshuguanluzuochufeiyeguanshi,yingdangzhuyizuihaofeiyepingzhongxianfangyixieshui,bingbafeiyeguandechukouduanjiejingchengkuaibingzaochengdusai。zhezhongqingkuangbuchangjian,danquedequefashengguo。
查堵的方法
在發生“堵”的現象後,就需要找出原因,主要是什麼位置發生了“堵”。
注(zhu)意(yi),絕(jue)大(da)多(duo)數(shu)情(qing)況(kuang)下(xia),整(zheng)個(ge)係(xi)統(tong)隻(zhi)會(hui)有(you)一(yi)個(ge)地(di)方(fang)發(fa)生(sheng)堵(du)塞(sai)。查(zha)堵(du)的(de)方(fang)法(fa)是(shi)從(cong)尾(wei)向(xiang)前(qian)逆(ni)向(xiang)分(fen)段(duan)拆(chai)開(kai),仔(zai)細(xi)觀(guan)察(cha)壓(ya)力(li)數(shu)值(zhi),如(ru)果(guo)某(mou)一(yi)個(ge)部(bu)件(jian)(柱子除外)裝上和拆下時的壓力差別很大,可發展變化判斷。至於柱的堵塞,可以通過換同樣規格的柱的壓力是否一致來判斷。
“漏” 分兩種:漏液和漏氣。
漏(lou)液(ye),液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)儀(yi)從(cong)流(liu)動(dong)相(xiang)瓶(ping)到(dao)廢(fei)液(ye)瓶(ping)之(zhi)間(jian)的(de)流(liu)路(lu)是(shi)一(yi)個(ge)全(quan)封(feng)閉(bi)體(ti)係(xi),內(nei)部(bu)壓(ya)力(li)很(hen)高(gao),但(dan)外(wai)部(bu)卻(que)能(neng)保(bao)證(zheng)一(yi)滴(di)不(bu)漏(lou)。如(ru)果(guo)某(mou)個(ge)部(bu)件(jian)發(fa)生(sheng)漏(lou)液(ye),那(na)就(jiu)是(shi)故(gu)障(zhang)所(suo)在(zai)。漏(lou)液(ye)的(de)原(yuan)因(yin)分(fen)兩(liang)種(zhong):
接觸硬件不當
在(zai)更(geng)換(huan)零(ling)件(jian)如(ru)流(liu)路(lu)管(guan)或(huo)換(huan)柱(zhu)時(shi),換(huan)的(de)接(jie)頭(tou)接(jie)口(kou)不(bu)匹(pi)配(pei),造(zao)成(cheng)漏(lou)液(ye)。要(yao)注(zhu)意(yi)不(bu)同(tong)公(gong)司(si)的(de)柱(zhu)子(zi)接(jie)頭(tou)很(hen)多(duo)是(shi)不(bu)同(tong)的(de),甚(shen)至(zhi)同(tong)一(yi)家(jia)公(gong)司(si)在(zai)不(bu)同(tong)時(shi)期(qi)生(sheng)產(chan)的(de)液(ye)相(xiang)柱(zhu)接(jie)頭(tou)也(ye)有(you)很(hen)大(da)區(qu)別(bie)。當(dang)然(ran)選(xuan)項(xiang)用(yong)PEEK接(jie)頭(tou)是(shi)一(yi)較(jiao)好(hao)是(shi)一(yi)個(ge)較(jiao)好(hao)的(de)解(jie)決(jue)方(fang)法(fa),不(bu)僅(jin)通(tong)用(yong)性(xing)好(hao),而(er)且(qie)靠(kao)手(shou)擰(ning)就(jiu)能(neng)保(bao)證(zheng)不(bu)漏(lou)液(ye)。即(ji)使(shi)是(shi)接(jie)口(kou)本(ben)身(shen)是(shi)匹(pi)配(pei)的(de),但(dan)是(shi)如(ru)果(guo)操(cao)作(zuo)不(bu)當(dang)也(ye)會(hui)漏(lou)液(ye),一(yi)種(zhong)不(bu)當(dang)就(jiu)是(shi)力(li)度(du)把(ba)握(wo)不(bu)好(hao),擰(ning)得(de)太(tai)緊(jin)或(huo)太(tai)鬆(song);
另一種不當就是致命的錯誤:滑(hua)絲(si),這(zhe)往(wang)往(wang)是(shi)動(dong)手(shou)能(neng)力(li)不(bu)太(tai)強(qiang),螺(luo)絲(si)釘(ding)很(hen)少(shao)擰(ning)的(de)工(gong)作(zuo)者(zhe)犯(fan)的(de)錯(cuo)誤(wu),滑(hua)絲(si)的(de)後(hou)果(guo)不(bu)僅(jin)是(shi)漏(lou)液(ye)那(na)麼(me)簡(jian)單(dan),常(chang)造(zao)成(cheng)重(zhong)要(yao)部(bu)件(jian)的(de)報(bao)廢(fei)。解(jie)決(jue)這(zhe)個(ge)問(wen)題(ti)隻(zhi)能(neng)靠(kao)惡(e)補(bu)基(ji)本(ben)功(gong)來(lai)實(shi)驗(yan),那(na)就(jiu)是(shi)擰(ning)螺(luo)絲(si)。
使用儀器不當
隻要互相有10%比例就不會出現這個問題。另一原因是在用緩衝液鹽溶液(不論甲醇含量有多少)作(zuo)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi),實(shi)驗(yan)結(jie)束(shu)後(hou)沒(mei)有(you)換(huan)甲(jia)醇(chun)水(shui)衝(chong)洗(xi),使(shi)得(de)微(wei)滲(shen)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)幹(gan)燥(zao)形(xing)成(cheng)晶(jing)體(ti)造(zao)成(cheng)。不(bu)過(guo),輸(shu)送(song)泵(beng)漏(lou)液(ye)並(bing)不(bu)是(shi)非(fei)得(de)馬(ma)上(shang)修(xiu)不(bu)可(ke),衝(chong)洗(xi)幹(gan)淨(jing)並(bing)在(zai)以(yi)後(hou)的(de)使(shi)用(yong)中(zhong)多(duo)加(jia)小(xiao)心(xin)一(yi)般(ban)都(dou)可(ke)以(yi)正(zheng)常(chang)使(shi)用(yong)。檢(jian)測(ce)器(qi)漏(lou)液(ye)是(shi)個(ge)很(hen)麻(ma)煩(fan)的(de)事(shi),一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)吸(xi)收(shou)池(chi)的(de)問(wen)題(ti),更(geng)換(huan)的(de)費(fei)用(yong)相(xiang)當(dang)高(gao)。但(dan)是(shi)並(bing)不(bu)是(shi)說(shuo)一(yi)定(ding)要(yao)馬(ma)上(shang)更(geng)換(huan),還(hai)可(ke)以(yi)從(cong)實(shi)際(ji)實(shi)驗(yan)效(xiao)果(guo)看(kan)能(neng)否(fou)湊(cou)合(he)使(shi)用(yong)。
漏(lou)氣(qi),漏(lou)液(ye)是(shi)從(cong)內(nei)部(bu)向(xiang)外(wai)漏(lou),而(er)漏(lou)氣(qi)則(ze)是(shi)外(wai)部(bu)了(le)的(de)氣(qi)體(ti)進(jin)入(ru)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)儀(yi)的(de)流(liu)路(lu)內(nei)部(bu)形(xing)成(cheng)氣(qi)泡(pao)。下(xia)麵(mian)按(an)流(liu)路(lu)的(de)方(fang)向(xiang)逐(zhu)個(ge)部(bu)件(jian)分(fen)析(xi)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)的(de)原(yuan)因(yin)和(he)相(xiang)應(ying)解(jie)決(jue)方(fang)法(fa)。
過濾頭
做油液時,在流路管中有不規則但持續的小氣泡產生,這時考慮的是流動相有沒有脫氣(需要特別提醒即使是有了真空脫氣機也是要先超聲脫氣的,起碼可以減少脫氣機的工作壓力並提高工作效率),如(ru)果(guo)已(yi)脫(tuo)氣(qi),則(ze)要(yao)注(zhu)意(yi)過(guo)濾(lv)頭(tou)的(de)汙(wu)染(ran)也(ye)會(hui)造(zao)成(cheng)這(zhe)種(zhong)現(xian)象(xiang)。處(chu)理(li)方(fang)法(fa)比(bi)較(jiao)簡(jian)單(dan),擰(ning)下(xia)過(guo)濾(lv)頭(tou)在(zai)稀(xi)硝(xiao)酸(suan)中(zhong)浸(jin)泡(pao),超(chao)聲(sheng)半(ban)小(xiao)時(shi),洗(xi)淨(jing)後(hou)裝(zhuang)回(hui)去(qu)即(ji)可(ke)。
透明流路管
指(zhi)的(de)是(shi)在(zai)過(guo)濾(lv)頭(tou)和(he)輸(shu)送(song)泵(beng)之(zhi)間(jian)的(de)那(na)一(yi)段(duan)管(guan)路(lu)。這(zhe)一(yi)個(ge)部(bu)分(fen)往(wang)往(wang)不(bu)是(shi)有(you)點(dian)氣(qi)泡(pao),而(er)經(jing)常(chang)是(shi)整(zheng)個(ge)管(guan)中(zhong)全(quan)是(shi)空(kong)氣(qi)而(er)操(cao)作(zuo)人(ren)員(yuan)卻(que)渾(hun)然(ran)不(bu)知(zhi),以(yi)致(zhi)輸(shu)送(song)泵(beng)工(gong)作(zuo)了(le)半(ban)天(tian)才(cai)發(fa)現(xian)流(liu)動(dong)相(xiang)瓶(ping)裏(li)的(de)液(ye)體(ti)一(yi)點(dian)也(ye)沒(mei)少(shao)。這(zhe)也(ye)是(shi)我(wo)們(men)常(chang)說(shuo)的(de)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)儀(yi)至(zhi)少(shao)一(yi)周(zhou)要(yao)開(kai)機(ji)一(yi)次(ci)的(de)原(yuan)因(yin)(我們做液相一定要有“微滲”的概論)。如(ru)果(guo)長(chang)時(shi)間(jian)不(bu)用(yong),這(zhe)一(yi)段(duan)管(guan)路(lu)的(de)液(ye)體(ti)會(hui)徹(che)底(di)幹(gan)掉(diao),而(er)充(chong)滿(man)空(kong)氣(qi)的(de)管(guan)路(lu)和(he)充(chong)滿(man)液(ye)體(ti)的(de)管(guan)路(lu)不(bu)仔(zai)細(xi)看(kan)是(shi)分(fen)辨(bian)不(bu)出(chu)來(lai)的(de)。這(zhe)種(zhong)情(qing)況(kuang)對(dui)於(yu)輸(shu)送(song)泵(beng)很(hen)危(wei)險(xian),因(yin)為(wei)泵(beng)從(cong)設(she)計(ji)來(lai)說(shuo)是(shi)輸(shu)送(song)液(ye)體(ti)而(er)不(bu)是(shi)輸(shu)送(song)氣(qi)體(ti),內(nei)部(bu)的(de)液(ye)體(ti)對(dui)於(yu)活(huo)塞(sai)來(lai)說(shuo)起(qi)到(dao)了(le)機(ji)油(you)的(de)作(zuo)用(yong),如(ru)果(guo)活(huo)塞(sai)杆(gan)還(hai)殘(can)存(cun)了(le)一(yi)些(xie)緩(huan)衝(chong)鹽(yan),則(ze)極(ji)易(yi)拉(la)傷(shang),造(zao)成(cheng)不(bu)可(ke)逆(ni)轉(zhuan)的(de)影(ying)響(xiang)。
對於這種情況,要突出“預防為主”如:液相色譜使用人員要相對固定和穩定,工作中合理搭配資源,每台機一周至少一次實驗,如長期不用起碼每周要衝流動相2小時。養成良好的工作習慣很重要。
如果流路管中真漏氣了怎麼辦?
我的建議是用外力使管路中充滿液體。
具體如下:
1、找到流路管進入輸送泵的接頭。
2、擰下來。
3、用一幹淨洗耳球的尖端對準管路的平整切口。
4、吸液體,看液麵從流動相瓶裏上升,至離洗耳球5cm左右時停止該動作。
5、快速把接頭擰回輸送泵上(這個過程可能會有少許流動相外泄,這是正常現象)。
6、開機,打開排液閥門,啟動輸送泵。
7、等排液管中流出的溶液沒有氣泡時,再關閉排液閥,儀器正常工作。
輸送泵和柱子
這些部分進了氣泡一般不怕,衝掉就行。
檢測器
yinggaishuo,zhenggeliuluzhongzhiyaoyouyigeqipaodouhuizaijianceqishangdedaoqiangliedexinhaofanying,jianceqineibudeqipaoyibandounengbeichongzou,danyeyouhennanchongdiaodecanliuqipaodeqingkuang。ruguojianceqineiyoucanliuqipao,huiyoutebiemingxiandebiaoxianxingshi,jiushizaizoujixianshihuishibushijiangechuxianzhishangzhixiaxinhaohendadexinhaofeng。zheshixiankanputongliuliangnengfouchongzou,ruguochongbuzou,naweiyidebanfajiushichaizhu,bajianceqizhijielianjiedaoshusongbengdechukou,jiadajibuliuliangchongxi,zekendingnengchongzouqipao。
根據接頭處、泵、進樣閥、色譜柱、檢測器等常見故障的解決方法,特整理下表,便於大家收藏記憶。
液相色譜的漏液及處理方法:
1、接頭處漏液
2、泵漏液
3、進樣閥漏液
4、色譜柱漏液
5、檢測器漏液
文章(文字)來源:網絡。
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